一、流動相溶劑瓶的保養
溶劑瓶是流動相的起點,通常是盛放水相溶液或是有機相溶液。
1.水相溶液,對於水相溶液來說,首要的問題是防止汙染。對於溶劑瓶我們要做的非常重要的工作就是勤換流動相,常換常新。
2.有(you)機(ji)相(xiang)溶(rong)液(ye),對(dui)於(yu)有(you)機(ji)相(xiang)溶(rong)液(ye),可(ke)以(yi)不(bu)用(yong)擔(dan)心(xin)細(xi)菌(jun)繁(fan)殖(zhi)的(de)問(wen)題(ti)。但(dan)是(shi)有(you)機(ji)相(xiang)容(rong)易(yi)發(fa)生(sheng)聚(ju)合(he),特(te)別(bie)是(shi)乙(yi)腈(jing)在(zai)適(shi)宜(yi)的(de)光(guang)照(zhao)條(tiao)件(jian)下(xia)極(ji)易(yi)發(fa)生(sheng)聚(ju)合(he),瓶(ping)子(zi)裏(li)就(jiu)會(hui)出(chu)現(xian)一(yi)些(xie)絮(xu)狀(zhuang)的(de)聚(ju)合(he)沉(chen)澱(dian)物(wu)。為(wei)了(le)防(fang)止(zhi)聚(ju)合(he)過(guo)程(cheng)的(de)發(fa)生(sheng),裝(zhuang)乙(yi)腈(jing)時(shi)要(yao)用(yong)棕(zong)色(se)的(de)溶(rong)劑(ji)瓶(ping),避(bi)免(mian)陽(yang)光(guang)直(zhi)射(she),更(geng)換(huan)乙(yi)腈(jing)時(shi)應(ying)當(dang)棄(qi)去(qu)瓶(ping)底(di)剩(sheng)餘(yu)的(de)溶(rong)液(ye)。
3.清(qing)洗(xi)過(guo)濾(lv),溶(rong)劑(ji)瓶(ping)裏(li)的(de)過(guo)濾(lv)頭(tou),其(qi)作(zuo)用(yong)是(shi)為(wei)了(le)防(fang)止(zhi)溶(rong)液(ye)瓶(ping)中(zhong)的(de)顆(ke)粒(li)雜(za)質(zhi)進(jin)入(ru)到(dao)儀(yi)器(qi)的(de)流(liu)路(lu)係(xi)統(tong)中(zhong),它(ta)的(de)材(cai)質(zhi)通(tong)常(chang)分(fen)為(wei)玻(bo)璃(li)燒(shao)結(jie)石(shi)英(ying)和(he)不(bu)鏽(xiu)鋼(gang),如(ru)果(guo)不(bu)慎(shen)堵(du)塞(sai)會(hui)造(zao)成(cheng)流(liu)動(dong)相(xiang)吸(xi)液(ye)不(bu)暢(chang),因(yin)此(ci)必(bi)須(xu)進(jin)行(xing)清(qing)洗(xi),玻(bo)璃(li)材(cai)質(zhi)的(de)通(tong)常(chang)是(shi)用(yong)稀(xi)硝(xiao)酸(suan)泡(pao),而(er)不(bu)鏽(xiu)鋼(gang)材(cai)質(zhi)的(de)可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)進(jin)行(xing)超(chao)聲(sheng)清(qing)洗(xi)。
二、高壓泵的保養
bengshiyexiangsepudehexin,bengjiangliudongxiangcongrongjipingshusongdaoyexiangliuluxitongzhong,bingyaozaigaoyaxiabaochiliuliangheyalidewending。zhuangtaizhengchangdegaoyabengshiyexiangsepuzhunquefenxidejichu,suoyipingriyidingyaozhongshiduibengdeweihu。
1.泵(beng)壓(ya)力(li)波(bo)動(dong),很(hen)多(duo)情(qing)況(kuang)下(xia),泵(beng)的(de)問(wen)題(ti)反(fan)映(ying)在(zai)壓(ya)力(li)上(shang),壓(ya)力(li)波(bo)動(dong)又(you)是(shi)常(chang)見(jian)的(de)一(yi)類(lei)問(wen)題(ti)。通(tong)常(chang)我(wo)們(men)可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)重(zhong)新(xin)清(qing)洗(xi)流(liu)路(lu)和(he)再(zai)次(ci)脫(tuo)氣(qi)流(liu)動(dong)相(xiang)加(jia)以(yi)解(jie)決(jue)。
2.過濾白頭保養,在泵的維護裏還有一項常做的工作就是更換清洗閥上的過濾白頭,通常判斷的標準是純水以5mL/min流速清洗的時候,如果壓力超過1MPa則考慮更換。
三、進樣器的保養
進樣器分手動和自動兩大類,雖然兩者工作模式不同,但使用的要點是基本一致的。
1.fangzhijiaochawuran,zidongjinyangqichangjiandewentishijiaochawuran,jiaochawuranchanshengdeyuanyinhenzhijie,yangpincanliuzaijinyangzhenneiwaibiaomian,bingsuixiayicijinyangjinrusepuxitong。yaojiejuejiaochawuran,zhuyaokaoqingxi。
2.精細操作,手動進樣器的操作要點大致相同,應使用液相色譜LC專用進樣針,進樣時插針應插到底,不使用時將針頭留在進樣器內,使用前後都要及時清洗。
四、色譜柱的保養
色譜柱是化合物分離的關鍵。保養良好的色譜柱具有很高的塔板數,且儀器基線平穩。
1.避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會衝動柱內填料,因此在調節流速時應該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉動不能過緩(如前所述)。
2.應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變為全部是水,反之亦然。
3.色譜柱反衝,納譜分析小分子分離液相色譜柱ChromCore係列和EcoPak係列色譜柱可以反衝;納譜分析手性色譜柱UniChiral係列色譜柱可以反衝,反衝可以除去留在柱頭的雜質。但是納譜分析生物大分子液相色譜柱BioCore係列色譜柱不要反衝,否則反衝會迅速降低柱效。
4.選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),yibimiangudingxiangbeipohuai。youshikeyizaijinyangqiqianmianlianjieyiyuzhu,fenxizhushijianheguijiaoshi,yuzhuweiguijiao,keshiliudongxiangzaijinrufenxizhuzhiqianyuxianbeiguijiao“飽和”,避免分析柱中的矽膠基質被溶解。
5.避bi免mian將jiang基ji質zhi複fu雜za的de樣yang品pin尤you其qi是shi生sheng物wu樣yang品pin直zhi接jie注zhu入ru柱zhu內nei,需xu要yao對dui樣yang品pin進jin行xing預yu處chu理li或huo者zhe在zai進jin樣yang器qi和he色se譜pu柱zhu之zhi間jian連lian接jie一yi保bao護hu柱zhu。保bao護hu柱zhu一yi般ban是shi填tian有you相xiang似si固gu定ding相xiang的de短duan柱zhu。保bao護hu柱zhu可ke以yi而er且qie應ying該gai經jing常chang更geng換huan。
6.jingchangyongqiangrongjichongxisepuzhu,qingchubaoliuzaizhuneidezazhi。zaijinxingqingxishi,duiliuluxitongzhongliudongxiangdezhihuanyingyixianghunrongderongjizhujianguodu,meizhongliudongxiangdetijiyingshizhutijide20倍左右,即常規分析需要50-75ml。
下麵列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序,作為參考:
矽膠柱以正已烷(或庚烷)、二(er)氯(lv)甲(jia)烷(wan)和(he)甲(jia)醇(chun)依(yi)次(ci)衝(chong)洗(xi),然(ran)後(hou)再(zai)以(yi)相(xiang)反(fan)順(shun)序(xu)依(yi)次(ci)衝(chong)洗(xi),所(suo)有(you)溶(rong)劑(ji)都(dou)必(bi)須(xu)嚴(yan)格(ge)脫(tuo)水(shui)。甲(jia)醇(chun)能(neng)洗(xi)去(qu)殘(can)留(liu)的(de)強(qiang)極(ji)性(xing)雜(za)質(zhi),已(yi)烷(wan)使(shi)矽(gui)膠(jiao)表(biao)麵(mian)重(zhong)新(xin)活(huo)化(hua)。
反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次衝洗,再以相反順序依次衝洗。
如果下一步分析用的流動相不含緩衝液,那麼可以省略最後用水衝洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質,在甲醇(乙腈)衝洗時重複注射100-200µl四氫呋喃數次有助於除去強疏水性雜質。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞碸數次。此外,用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質汙染。
陽離子交換柱可用稀酸緩衝液衝洗,陰離子交換柱可用稀堿緩衝液衝洗,除去交換性能強的鹽,然後用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表麵的有機物)、甲醇、水依次衝洗。
7.保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發幹燥。禁止將緩衝溶液留在柱內靜置過晚上或更長時間。
8.色譜柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是燒結濾片被堵塞,這時應更換濾片或將其取出進行清洗;另一種可能是大分子進入柱內,使柱頭被汙染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現塌陷,死體積增大。
在後兩種情況發生時,小心擰開柱接頭,用潔淨小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度(注意把被汙染填料取淨)再把柱內填料整平。然後用適當溶劑濕潤的固定相(與柱內相同)填滿色譜柱,壓平,再擰緊柱接頭。這樣處理後柱效能得到改善,但是很難恢複到新柱的水平。
柱子失效通常是柱端部分,在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5-30mm),可以起到保護、延長柱壽命的作用。采用保護柱會損失一定的柱效,這是值得的。
通常以矽膠為基質的色譜柱,隻能在pH2-9範(fan)圍(wei)內(nei)使(shi)用(yong)。柱(zhu)子(zi)使(shi)用(yong)一(yi)段(duan)時(shi)間(jian)後(hou),可(ke)能(neng)有(you)一(yi)些(xie)吸(xi)附(fu)作(zuo)用(yong)強(qiang)的(de)物(wu)質(zhi)保(bao)留(liu)於(yu)柱(zhu)頂(ding),特(te)別(bie)是(shi)一(yi)些(xie)有(you)色(se)物(wu)質(zhi)更(geng)易(yi)看(kan)清(qing)被(bei)吸(xi)著(zhe)在(zai)柱(zhu)頂(ding)的(de)填(tian)料(liao)上(shang)。新(xin)的(de)色(se)譜(pu)柱(zhu)在(zai)使(shi)用(yong)一(yi)段(duan)時(shi)間(jian)後(hou)柱(zhu)頂(ding)填(tian)料(liao)可(ke)能(neng)塌(ta)陷(xian),使(shi)柱(zhu)效(xiao)下(xia)降(jiang),這(zhe)時(shi)也(ye)可(ke)補(bu)加(jia)填(tian)料(liao)使(shi)柱(zhu)效(xiao)恢(hui)複(fu)。
每次工作完後,用洗脫能力強的洗脫液衝洗,例如ODS柱宜用甲醇衝洗至基線平衡。當采用鹽緩衝溶液作流動相時,使用完後應用無鹽流動相衝洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會腐蝕不鏽鋼管道,不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經常使用,應每隔4-5天開機衝洗15分鍾。
五、檢測器的保養
1.光源部分
檢(jian)測(ce)器(qi)中(zhong)非(fei)常(chang)重(zhong)要(yao)的(de)部(bu)件(jian)是(shi)光(guang)源(yuan),光(guang)源(yuan)對(dui)發(fa)射(she)能(neng)量(liang)有(you)要(yao)求(qiu),一(yi)旦(dan)能(neng)量(liang)衰(shuai)減(jian)到(dao)一(yi)定(ding)程(cheng)度(du),就(jiu)會(hui)出(chu)現(xian)基(ji)線(xian)噪(zao)聲(sheng)變(bian)大(da),靈(ling)敏(min)度(du)降(jiang)低(di)等(deng)一(yi)係(xi)列(lie)影(ying)響(xiang)使(shi)用(yong)的(de)問(wen)題(ti),因(yin)此(ci)光(guang)源(yuan)是(shi)一(yi)個(ge)消(xiao)耗(hao)品(pin)。通(tong)常(chang)紫(zi)外(wai)燈(deng)的(de)壽(shou)命(ming)是(shi)2000h,當到達這個時限的時候,我們就要特別關注燈的能量狀況,可以通過儀器維護軟件中自帶的“燈能量測試”功能來判斷,測試的結果會分別評估低、中、高三個波長段的能量,一旦某個波長段的測試結果顯示失敗,就表示需要更換燈。
2.檢測池
檢jian測ce器qi中zhong另ling一yi個ge重zhong要yao部bu件jian是shi檢jian測ce池chi,也ye叫jiao流liu通tong池chi。通tong常chang大da家jia關guan心xin的de一yi個ge問wen題ti是shi檢jian測ce池chi被bei堵du掉diao,因yin為wei檢jian測ce池chi通tong常chang不bu是shi很hen耐nai壓ya,所suo以yi一yi旦dan被bei堵du就jiu很hen可ke能neng造zao成cheng損sun壞huai。事shi實shi上shang檢jian測ce池chi通tong常chang不bu太tai容rong易yi被bei堵du,原yuan因yin是shi幾ji乎hu所suo有you的de顆ke粒li雜za質zhi都dou會hui被bei色se譜pu柱zhu攔lan下xia了le,所suo以yi堵du塞sai檢jian測ce器qi的de東dong西xi基ji本ben都dou不bu是shi來lai自zi樣yang品pin的de,很hen可ke能neng是shi後hou來lai“產生”的,比如含鹽流動相殘留在檢測池中導致鹽析出。
六、廢液的處置
液相色譜儀LC的(de)廢(fei)液(ye)大(da)部(bu)分(fen)含(han)有(you)有(you)機(ji)溶(rong)劑(ji),會(hui)對(dui)人(ren)體(ti)產(chan)生(sheng)一(yi)定(ding)的(de)危(wei)害(hai),對(dui)環(huan)境(jing)也(ye)會(hui)產(chan)生(sheng)汙(wu)染(ran),嚴(yan)禁(jin)隨(sui)意(yi)傾(qing)倒(dao),應(ying)及(ji)時(shi)處(chu)理(li)。目(mu)前(qian),國(guo)內(nei)大(da)部(bu)分(fen)實(shi)驗(yan)室(shi)是(shi)將(jiang)廢(fei)液(ye)送(song)到(dao)專(zhuan)門(men)的(de)廢(fei)液(ye)處(chu)理(li)站(zhan)集(ji)中(zhong)進(jin)行(xing)無(wu)害(hai)化(hua)處(chu)理(li)。
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