準(zhun)備(bei)工(gong)作(zuo)對(dui)開(kai)展(zhan)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)異(yi)常(chang)重(zhong)要(yao)，工(gong)作(zuo)量(liang)也(ye)較(jiao)大(da)，應(ying)給(gei)予(yu)足(zu)夠(gou)的(de)重(zhong)視(shi)，推(tui)備(bei)工(gong)作(zuo)中(zhong)某(mou)一(yi)環(huan)節(jie)的(de)疏(shu)忽(hu)可(ke)導(dao)致(zhi)實(shi)驗(yan)失(shi)敗(bai)或(huo)無(wu)法(fa)進(jin)行(xing)。準(zhun)備(bei)工(gong)作(zuo)的(de)內(nei)容(rong)包(bao)括(kuo)器(qi)皿(min)的(de)清(qing)洗(xi)、幹燥與消毒，培養基與其他試劑的配製
、分裝及滅菌
，無菌室或超淨台的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。

2、取材

在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）後接入培養器血中
，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的*培養稱為原代培養。

理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用於培養
，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比bi成cheng年nian個ge體ti的de組zu織zhi容rong易yi培pei養yang，分fen化hua程cheng度du低di的de組zu織zhi比bi分fen化hua高gao的de容rong易yi培pei養yang，腫zhong瘤liu組zu織zhi比bi正zheng常chang組zu織zhi容rong易yi培pei養yang。取qu材cai後hou應ying立li即ji處chu理li
，盡jin快kuai培pei養yang，因yin故gu不bu能neng馬ma上shang培pei養yang時shi，可ke將jiang組zu織zhi塊kuai切qie成cheng黃huang豆dou般ban大da的de小xiao塊kuai


，置zhi4℃depeiyangyezhongbaocun。quzuzhishiyingyangebaochiwujun
，tongshiyeyaobimianjiechuqitadeyouhaiwuzhi。qubinglizuzhihepifujixiaohuadaoshangpixibaoshirongyidaijun
，weijianshaowurankeyongkangjunsuchuli。

3
、培養

jiangqudedezuzhixibaojierupeiyangpinghuopeiyangbanzhongdeguochengchengweipeiyang。ruxizuzhikuaipeiyang，zezhijiejiangzuzhikuaijierupeiyangqimindibu，jigexiaoshihouzuzhikuaiketielaozaidibu，zaijiarupeiyangji。ruxixibaopeiyang，yibanyingzaijierupeiyangqiminzhiqianjinxingxibaojishu，anyaoqiuyiyidingdeliang（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿並直接加入培養基。細胞進入培養器皿後，立即放入培養箱中

，使細胞盡早進入生長狀態。

正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態是否正常，有無汙染

，培養基的pH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對培養溫度和CO₂濃度也要定時檢查。

原代培養一般有一段潛伏期（數小時到數十天不等）
，在zai潛qian伏fu期qi細xi胞bao一yi般ban不bu分fen裂lie
，但dan可ke貼tie壁bi和he遊you走zou。過guo了le潛qian伏fu期qi後hou細xi胞bao進jin入ru旺wang盛sheng的de分fen裂lie生sheng長chang期qi。細xi胞bao長chang滿man瓶ping底di後hou要yao進jin行xing傳chuan代dai培pei養yang，將jiang一yi瓶ping中zhong的de細xi胞bao消xiao化hua懸xuan浮fu後hou分fen至zhi兩liang到dao三san瓶ping繼ji續xu培pei養yang。每mei傳chuan代dai一yi次ci稱cheng為wei“一代”。二倍體細胞一般隻能傳幾十代，而轉化細胞係或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。

4
、凍存及複蘇

為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度（-196℃）
，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞碸或甘油）的de培pei養yang基ji，以yi一yi定ding的de冷leng卻que速su度du凍dong存cun，保bao存cun於yu液ye氮dan中zhong。在zai低di的de溫wen度du下xia
，細xi胞bao保bao存cun的de時shi間jian幾ji乎hu是shi無wu限xian的de。複fu蘇su一yi般ban采cai用yong快kuai融rong方fang法fa，即ji從cong液ye氮dan中zhong取qu出chu凍dong存cun管guan後hou
，立li即ji放fang入ru37℃水中，使之在一分鍾內迅速融解。然後將細胞轉入培養器皿中進行培養。

凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及複蘇時溫度
、融化速度等都對細胞活力有影響。

5、常用儀器設備

無菌室
、超淨工作台、三重純水蒸餾器
、抽氣泵、壓力蒸氣消毒器、電熱恒溫培養箱、培養器具、CO₂培養箱、恒溫水浴鍋
、倒置顯微鏡、離心機、無菌過濾器、洗刷裝置、細胞計數板和電子細胞技術儀等等。