血清,指血液凝固後,在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養中的細胞起到某些保護作用。血清在細胞培養中提供細胞生長所需的生長因子、激素、各種蛋白、促進貼壁和鋪展的因子、細胞傳代時蛋白酶抑製劑和其他多種不明營養物質,以胎牛血清(FBS)的使用最為普遍,其他血清類型還包括小牛血清、成牛血清、馬血清、羊血清、雞血清、兔血清等,其營養類型有很大差異,適用於不同類型細胞。
血清是細胞培養中用量最大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,具有極為重要的功能:
1、提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。
2、提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。
3、有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。
4、是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。
5、起酸堿度緩衝液作用。
6、提供蛋白酶抑製劑,使在細胞傳代時使剩餘胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。
血清最大的劣勢就是不穩定,不穩定原因如下:
1、來源不穩定
以(yi)胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)為(wei)例(li),懷(huai)孕(yun)母(mu)牛(niu)在(zai)屠(tu)宰(zai)前(qian)腹(fu)部(bu)被(bei)剖(pou)開(kai),取(qu)出(chu)胎(tai)牛(niu),在(zai)低(di)溫(wen)無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia),刺(ci)破(po)胎(tai)牛(niu)的(de)心(xin)髒(zang)以(yi)獲(huo)取(qu)血(xue)清(qing)。就(jiu)這(zhe)一(yi)條(tiao),動(dong)物(wu)倫(lun)理(li)組(zu)織(zhi)就(jiu)可(ke)以(yi)把(ba)你(ni)攔(lan)住(zhu)嘮(lao)嘮(lao)。另(ling)外(wai),牛(niu)血(xue)清(qing)必(bi)須(xu)來(lai)自(zi)有(you)文(wen)件(jian)證(zheng)明(ming)無(wu)牛(niu)海(hai)綿(mian)狀(zhuang)腦(nao)病(bing)的(de)牛(niu)群(qun)或(huo)國(guo)家(jia),我(wo)國(guo)在(zai)對(dui)牛(niu)血(xue)清(qing)的(de)質(zhi)量(liang)《中國生物製品主要原輔料質控標準 2000》中提出比較嚴格的標準要求,包括蛋白質含量,細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸杆菌噬菌體、細菌內毒素,細胞增殖支持等檢查。
2、組分不穩定
還有最讓人鬧心的,動物血清成分複雜,其組分及含量常和動物性別(公胎牛,母胎牛,如激素)、年齡、生理狀態、營(ying)養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)同(tong)而(er)有(you)差(cha)異(yi),是(shi)不(bu)是(shi)覺(jiao)得(de)特(te)像(xiang)中(zhong)藥(yao)。還(hai)有(you),盡(jin)管(guan)血(xue)清(qing)大(da)部(bu)分(fen)成(cheng)分(fen)是(shi)已(yi)知(zhi)的(de),但(dan)仍(reng)然(ran)存(cun)在(zai)不(bu)清(qing)楚(chu)的(de)組(zu)分(fen),所(suo)以(yi)導(dao)致(zhi)標(biao)準(zhun)化(hua)極(ji)其(qi)困(kun)難(nan)。所(suo)以(yi),師(shi)兄(xiong)師(shi)姐(jie)經(jing)常(chang)會(hui)告(gao)訴(su)你(ni)說(shuo),不(bu)同(tong)生(sheng)產(chan)廠(chang)家(jia)的(de)血(xue)清(qing)差(cha)異(yi)很(hen)大(da),就(jiu)是(shi)同(tong)一(yi)廠(chang)家(jia)生(sheng)產(chan)的(de)不(bu)同(tong)批(pi)次(ci)血(xue)清(qing)差(cha)異(yi)也(ye)很(hen)大(da)。
3、用法不穩定
實(shi)驗(yan)習(xi)慣(guan)的(de)不(bu)同(tong),都(dou)可(ke)能(neng)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)的(de)不(bu)穩(wen)定(ding),比(bi)如(ru),有(you)人(ren)四(si)度(du)過(guo)夜(ye)融(rong)化(hua),有(you)人(ren)急(ji)性(xing)子(zi),直(zhi)接(jie)扔(reng)進(jin)水(shui)浴(yu)鍋(guo)。新(xin)手(shou)拿(na)到(dao)一(yi)瓶(ping)血(xue)清(qing),第(di)一(yi)個(ge)問(wen)題(ti)就(jiu)是(shi)問(wen)自(zi)己(ji),要(yao)不(bu)要(yao)滅(mie)活(huo)?還(hai)有(you),別(bie)忘(wang)了(le),血(xue)清(qing)同(tong)時(shi)含(han)有(you)內(nei)毒(du)素(su)、血色素、補體、抗體等其他有害成分,影響細胞生長甚至導致細胞死亡,對某些實驗來說,極為重要。
如此的不穩定,該怎麼在實驗過程中盡可能的解決呢?
1、土豪和有得選擇的實驗室,請選擇無血清培養基。
2、不要頻繁更換血清牌子,不同廠家血清來源,生產工藝,包裝運輸等都有很大差異,盡量不要更換牌子。
3、選定品牌後,對於經過測試過的好用的血清,同一個批次多囤積一些,計算本次實驗的大概用量,然後在多加20%的儲備,放在-20或-80度保存。
4、細胞實驗建議每個人用自己的培養基,PBS,胰酶等試劑以及用具,保持實驗條件一致性,避免交叉汙染,別給自己添堵,也別給別人添堵。
5、如果實在要更換血清,先將細胞在新的血清裏傳兩到三代,適應新的條件後,細胞狀態穩定,再進行後續的實驗。
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