酶聯免疫吸附試驗(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay， ELISA)在生物實驗技術中
，ELISA是一種非常常見的分析方法。其qi原yuan理li是shi抗kang原yuan或huo抗kang體ti的de固gu相xiang化hua及ji抗kang原yuan抗kang體ti的de酶mei標biao記ji。加jia入ru酶mei反fan應ying的de底di物wu後hou
，底di物wu被bei酶mei催cui化hua成cheng為wei有you色se產chan物wu

，產chan物wu的de量liang與yu標biao本ben中zhong受shou檢jian物wu質zhi的de量liang直zhi接jie相xiang關guan
，由you此ci進jin行xing定ding性xing或huo定ding量liang分fen析xi。該gai實shi驗yan因yin其qi靈ling敏min度du較jiao高gao，特te異yi性xing較jiao好hao
，操cao作zuo較jiao簡jian單dan

，可ke大da批pi量liang操cao作zuo而er廣guang泛fan應ying用yong於yu多duo種zhong傳chuan染ran性xing疾ji病bing的de篩shai查zha工gong作zuo中zhong。而在進行ELISA實驗的過程中
，有時會遇到一種被稱為“花板”的現象。

“花板”現象，顧名思義
，是指在進行ELISA實驗時，酶標板上的反應孔出現了不均勻的顏色分布，使得孔內的顏色看起來像是“花”一樣。所謂“花板”
，就是空白、陰性、陽性對照及室內質控孔結果正常，而標本孔的OD值卻偏高，弱陽性結果較多。這一現象的出現，影響了實驗結果的準確性，往往是由於實驗過程中的某些操作不當或試劑的問題所導致的。對“花板”現象進行了分析和總結，認為花板原因大多在樣品，解決辦法主要在洗滌
，孵育和顯色過程也會導致。

1、花板原因大多在樣品

所謂“花板”，就是空白
、陰陽性對照及室內質控孔結果正常，而標本孔的OD值卻偏高。之所以空白、對照及質控結果正常而標本孔異常
，是因為樣品本身的原因
，大部分或全部標本孔的OD值偏高，很可能是因為樣品中某些共有的物質非特異性的吸附於固相載體，而在實驗的過程中未被除去。

1.1
、 待測血清中混有紅細胞或纖維蛋白原 這兩種物質易沉澱或附著在聚乙烯孔內不易洗淨


，實驗表明在較高的離心轉速(3000 /min)和較長的離心時間(>10 min)zhixia，xueyebiaobenbeichongfendilixinfenlizhihou，shihongxibaohexianweidanbaichongfenchendian，keyizaijiayangshibimianjiaruhongxibaohexianweidanbai

，bimianzheliangzhongganraowuzhiduishiyanjieguodeyingxiang，jiukebimian“花板”情況。

1.2、 高IgG血症 在實際工作中
，筆者發現
，檢測丙肝的實驗出現花板的情況較多，原因之一是因為目前國內外的抗-HCV EIA試劑均采用間接酶聯免疫檢測原理
，間接法的一個重要影響因素是血清中所含的高濃度的非特異性IgG，IgG對聚苯乙烯有較強的吸附力，非特異性IgG可吸附到固相載體上或包被的抗原上造成假陽性。

2
、解決辦法主要在洗滌

聚苯乙烯因其具有較強的吸附蛋白質的性能而被廣泛用於ELISA實shi驗yan的de固gu相xiang載zai體ti，聚ju苯ben乙yi烯xi等deng塑su料liao對dui蛋dan白bai質zhi的de吸xi附fu是shi普pu遍bian性xing的de
，因yin此ci需xu要yao通tong過guo洗xi滌di清qing除chu在zai反fan應ying過guo程cheng中zhong非fei特te異yi性xing地di吸xi附fu於yu固gu相xiang載zai體ti的de幹gan擾rao物wu質zhi。洗xi滌di在zai ELISA guochengzhongsuibushiyigefanyingbuzhou
，danquejuedingzheshiyandechengbai。shangshutidaodexueqingzhongcunzaihongxibaohuoxianweidanbaiyuan
，keyizaijiayangqianlixinshidedaokongzhi，tongyangyekeyitongguoshidangzengjiaxidicishuhejinpaoshijianjianqinghuobimianduishiyanjieguodeyingxiang，tongyang

，duiyuxueyecunzaidefeiteyixingdeIgG,實驗者很難在加樣時將其去除
，那麼解決的最佳時機就是洗滌過程。

ELISA在洗滌過程中需注意以下幾點：

(1)板要平整，尤其是在用洗板機洗板的過程中，往往是3排一起洗

，如果板不平，就很可能造成洗液有殘留

，從而導致非特異性結合不能清除幹淨，對實驗結果造成幹擾。

(2)洗液溫度
，實驗表明，洗液溫度也會影響洗板的幹淨程度

，尤其是冬天溫度過低時容易出現“花板”問題。因此
，最好保持室溫在20℃-30℃。

(3)洗液要注滿孔，孔壁洗滌不幹淨也易造成“花板”現象。

(4)洗液要新鮮配置，洗液要臨用前新鮮配製

，放置時間過長易產生絮狀物或混濁，造成賭孔或花板。

(5)洗板次數不夠或洗滌間隔時間過短也會造成由於洗板不淨而造成“花板”。

3、孵育時間過長也會造成“花板”

本實驗室曾有一段時間經常出現丙肝檢測“花板”現xian象xiang
，究jiu其qi原yuan因yin是shi由you於yu樣yang本ben較jiao多duo
，加jia樣yang後hou未wei及ji時shi放fang入ru孵fu育yu箱xiang，反fan應ying板ban在zai室shi溫wen呆dai的de時shi間jian過guo長chang，即ji間jian接jie增zeng加jia了le孵fu育yu時shi間jian，導dao致zhi孵fu育yu時shi間jian過guo長chang，蛋dan白bai質zhi非fei特te異yi性xing吸xi附fu於yu固gu相xiang載zai體ti。因yin此ci，應ying嚴yan格ge控kong製zhi加jia樣yang時shi間jian，加jia樣yang後hou及ji時shi孵fu育yu，標biao本ben較jiao多duo時shi可ke分fen批pi操cao作zuo。

此外

，有些廠家的試劑顯色液不穩定，使用前容易變藍
，如在實驗前不仔細檢查，很容易導致“花板”現象的發生，這也提醒實驗者應使用新鮮的顯色液，大程度的保證實驗的準確性。

綜上所述，將ELISA“花板”現象總結為：huabanyuanyindaduozaiyangpin
，jiejuebanfazhuyaozaixidi
，fuyuhexianseguochengyehuidaozhi。jiranyuanyindaduozaiyangpin，namezaiyangpinjiaojieshiyingyangeanzhaoguiding，wurongxue，wuningxue，zuliang，dangederongxueyangpinsuibuzhizaocheng“花板”
，但血紅蛋白中的血紅素基團
，具有類過氧化物的活性，在以辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)為標記酶的ELISA測定中，易在孵育過程中吸附於固相，從而與後麵加入的底物反應顯色，從而造成假陽性。

洗滌是ELISA的關鍵步驟，充分有效的洗滌也是避免“花板”的有利措施。同樣
，嚴格按照試劑說明孵育，使用新鮮的顯色液也是有效避免“花板”的保障。以上措施可以有效減少“花板”次數
，從而提高檢測的特異性和準確性，更好的發揮ELISA的方法學優勢。