xibaopeiyangjishuzhong，xibaojishushiyixiangjibengong，duiyubiaozhunhuapeiyangtiaojianyijixuyaodingliangdeshiyanlaishuodouguanjian。zhelijieshaoshiyongxuexibaojishuqiduixibaojinxing計數的經典方法以及中間一些需要注意的細節。

製備細胞懸液：

對於貼壁生長的細胞
，我們需要使用胰酶消化的方法使細胞從培養皿表麵脫落

根據需要加入合適體積的培養基，將細胞進行中和及稀釋，以得到均質的細胞懸液。要求盡可能將細胞吹打散開
，不要殘留任何細胞團

準備血細胞計數器：

使用70%乙醇將蓋玻片和血細胞計數器清潔幹淨

將將蓋玻片潤濕（使用水或呼一口氣
，目的是使蓋玻片與血細胞計數器接觸更緊密，易於粘連），並覆蓋至血細胞計數器上

台盼蘭染色（可選）：

如果需要計算細胞的活力，則需要將細胞懸液和0.4%台盼蘭等體積混合

室溫孵育3-5分鍾，使台盼蘭進入死細胞，使死細胞著藍色

血細胞計數器加樣：

使用吸管將細胞懸液或細胞/台盼蘭混合液滴加到血細胞計數器計數池的邊緣。此時液滴將在虹吸的作用下進入蓋玻片下方的計數池

以同樣的方式在另一側的計數池中也加入細胞懸液

將計數板放置幾分鍾使細胞擴散
，同時用吸水紙吸除多餘的液體

細胞計數：

在100倍顯微鏡下，移動計數板將視野對準計數板的中央大方塊
，該方塊四周有一圈3條平行線包圍，中間有密集的網格。中央方塊區差不多剛好可以填滿整個視野。

使用手持式計數器記錄計數池四個角以及中央方塊內的細胞數（1-5號位置

，經典的current-protocol推薦每個方塊細胞數應不大於20-50）
，並(bing)重(zhong)複(fu)記(ji)錄(lu)另(ling)一(yi)側(ce)計(ji)數(shu)池(chi)中(zhong)的(de)細(xi)胞(bao)數(shu)，總(zong)計(ji)十(shi)個(ge)方(fang)塊(kuai)。計(ji)數(shu)的(de)方(fang)法(fa)是(shi)隻(zhi)計(ji)算(suan)上(shang)邊(bian)和(he)左(zuo)邊(bian)壓(ya)線(xian)的(de)細(xi)胞(bao)，而(er)右(you)邊(bian)和(he)下(xia)邊(bian)壓(ya)線(xian)的(de)細(xi)胞(bao)不(bu)予(yu)計(ji)算(suan)（下圖，總體原則是“計上不計下，計左不計右”
，判斷標準為是否接觸三條邊線的中間線）。ruguoyouduogexibaomeiyouchuisanchengtuancunzai，cishizhikejiweiyigexibao。ruguotuankuaihenduo
，zekenengxuyaozhongxinchuidashenzhixiaohuazhizhijuedaduoshuxibaoweidangexibao