1)平底和圓底(U型和V型)培養板的區別和選擇：

　　貼壁細胞一般用平底培養板。懸浮型細胞的培養一般用V型。U型培養板亦多用於培養懸浮型細胞 。V型培養板有時用做免疫學血凝集的實驗。

　　不同型狀的板子自然有不同用途。平底的什麼類型的細胞都可用，但當細胞數目較少
，如做克隆時，就用96孔平底板
，另外，做MTT等實驗時
，無論貼壁和懸浮細胞，一般均用平底板。

　　至於U或Vxingban，yibanzaimouxieteshuyaoqiushicaishiyong。ruzaimianyixuefangmian，dangzuoliangzhongbutonglinbaxibaohunhepeiyangshi，xuyaoerzhexianghujiechuyiciji，yinci，yibanxuyaoU型板，因細胞會由於重力的作用而聚集在一個很小的範圍內。

　　V型板的用途更少，一般用於細胞殺傷實驗時，為了使效靶細胞緊密接觸，常使用V型板，但這種試驗也可用U型板替代(加入細胞後，低速離心)如果是養細胞的話，通常是選用平底的。

　　圓底的好像沒聽說過拿來養細胞。圓底的通常是拿來做分析， 化學反應
， 或是保存樣品用的
， 因為圓底比較好將液體吸得幹淨
，如果用平底的就不好吸了。不過，  如果你是要測吸光值的話，  一定要買平底的才行。大部分細胞培養都用平底培養板

，便於鏡下觀測
、有明確的底麵積、細胞培養液麵高度相對一致
，還便於MTT檢測。圓底培養板主要用於同位素摻入的實驗，需要用細胞收集儀收集細胞的培養
，如“混合淋巴細胞培養”等。

　　2)細胞培養常見問題與解答

　　問：我看到培養板有4
、6
、12、24、48、96孔幾種規格 ，但不知道到底什麼實驗用哪種規格。

　　答：要根據你具體的實驗要求，流式一般用6孔，MTT一般用96孔，細胞爬片一般用24孔等，要具體根據你實驗來定。

　　問：我想測吸光度用酶標儀，用多孔細胞培養板行嗎?請問酶標板多孔細胞培養板有什麼區別?

　　答：用多空細胞培養板測吸光度肯定可以拉，我們經常用它來做樣品的蛋白定量和MTT檢測。

　　區別：酶標板一般要比細胞培養板貴，細胞板主要做細胞培養
，但也可以用來測蛋白濃度;酶(mei)標(biao)板(ban)包(bao)括(kuo)包(bao)被(bei)板(ban)和(he)反(fan)應(ying)板(ban)

，一(yi)般(ban)不(bu)能(neng)用(yong)做(zuo)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)，它(ta)主(zhu)要(yao)做(zuo)免(mian)疫(yi)酶(mei)聯(lian)反(fan)應(ying)後(hou)的(de)蛋(dan)白(bai)檢(jian)測(ce)，它(ta)需(xu)要(yao)更(geng)高(gao)的(de)要(yao)求(qiu)還(hai)需(xu)要(yao)特(te)定(ding)的(de)酶(mei)標(biao)工(gong)作(zuo)液(ye)。

　　常用不同培養板的孔底麵積及推薦加液量：不同孔板所加培養液的液麵都不宜太深，一般在2-3mm範圍，結合不同孔的底麵積就可算出各培養孔的適宜加液量。若加液量過多會影響氣體(氧氣)交換，而且在搬動過程中易溢出造成汙染。具體所加細胞密度依實驗的目的不同靈活掌握。

　　3)細胞培養板的密閉和汙染問題

　　細胞培養板的加樣和操作：細胞培養板在進行細胞操作時同樣遵循嚴格無菌的原則
，各項操作要規範、科學
，不對細胞的生長造成額外的影響。這其中常見的問題就是如何加樣後細胞的均勻和盡量減少換液對細胞生長狀態的影響。

　　問：96

，24孔培養板或培養皿的蓋子都很鬆，這樣是方便了透氣，但是細菌

、黴菌等汙染物會不會也隨著溜進去呢?

　　答：

　　1. 蓋子很鬆，屬於半開放培養
，這樣的目的是透氣(實際上是為了使培養皿外的co2能夠與培養皿充分交換，維持培養基的pH值)。

　　2. 凡(fan)事(shi)有(you)利(li)必(bi)有(you)弊(bi)，這(zhe)樣(yang)當(dang)然(ran)增(zeng)加(jia)了(le)汙(wu)染(ran)的(de)可(ke)能(neng)性(xing)。此(ci)外(wai)這(zhe)樣(yang)還(hai)會(hui)使(shi)培(pei)養(yang)皿(min)內(nei)的(de)液(ye)體(ti)蒸(zheng)發(fa)，這(zhe)對(dui)於(yu)定(ding)量(liang)的(de)藥(yao)物(wu)來(lai)說(shuo)就(jiu)顯(xian)得(de)值(zhi)得(de)注(zhu)意(yi)了(le)。所(suo)以(yi)以(yi)下(xia)二(er)條(tiao)措(cuo)施(shi)是(shi)必(bi)須(xu)的(de)：

　　a. 培養箱內空氣必須清潔(定期紫外線照，酒精擦洗，盡量少開關培養箱);

　　b. 培養箱內的濕度必須始終保持為100%(培養箱內放置無菌蒸餾水的水槽)。

　　就好像培養皿
，也是一個蓋倒扣的容器
，也不會汙染。主要是因為蓋子“L”型(xing)邊(bian)緣(yuan)產(chan)生(sheng)氣(qi)流(liu)負(fu)壓(ya)的(de)緣(yuan)故(gu)，灰(hui)塵(chen)上(shang)麵(mian)才(cai)附(fu)著(zhe)有(you)微(wei)生(sheng)物(wu)，而(er)氣(qi)流(liu)攜(xie)帶(dai)的(de)灰(hui)塵(chen)是(shi)無(wu)法(fa)通(tong)過(guo)產(chan)生(sheng)負(fu)壓(ya)的(de)蓋(gai)邊(bian)緣(yuan)的(de)。而(er)透(tou)氣(qi)作(zuo)用(yong)隻(zhi)是(shi)通(tong)過(guo)空(kong)氣(qi)的(de)擴(kuo)散(san)，不(bu)會(hui)產(chan)生(sheng)氣(qi)流(liu)，所(suo)以(yi)隻(zhi)會(hui)透(tou)氣(qi)不(bu)會(hui)透(tou)菌(jun)。

　　問：我使用24孔板

，在其中的某些孔中有操作(在超淨台內)，而其它孔中還有細胞要培養，我很擔心這樣會汙染
，不知道要注意什麼?大家不知道有什麼好的建議。

　　答：在zai超chao淨jing台tai內nei如ru果guo操cao作zuo規gui範fan的de話hua應ying該gai可ke以yi的de，我wo想xiang你ni可ke以yi充chong分fen利li用yong培pei養yang版ban的de蓋gai子zi，盡jin量liang隻zhi暴bao露lu要yao操cao作zuo的de孔kong，將jiang其qi它ta孔kong用yong蓋gai子zi蓋gai起qi來lai。這zhe是shi我wo的de一yi點dian粗cu淺qian的de見jian解jie，拋pao磚zhuan引yin玉yu吧ba!

　　4)細胞分布不均及解決辦法

　　問：我的細胞接種培養板
，細胞總是聚集在周邊部分

，該如何處理啊?我看園子裏有的戰友的細胞卻是聚集在中間
，是不是板子的質量問題啊?

　　答：請問你的細胞是如何混勻的?是滴管吹打還是振蕩培養板?如果是後者，而且是轉圈搖勻的話，很有可能由於離心力的作用使細胞甩到周邊部分，導致細胞中間少
，四周多!自己可是試試!

　　周邊一般是相對會多一點
，但是中間的數量也不會很少啊~~ 鋪板的時候我也沒有特異去振蕩培養板。

　　一個好辦法：在(zai)你(ni)培(pei)養(yang)種(zhong)板(ban)之(zhi)

，把(ba)培(pei)養(yang)板(ban)放(fang)入(ru)培(pei)養(yang)箱(xiang)裏(li)進(jin)行(xing)幾(ji)個(ge)小(xiao)時(shi)的(de)飽(bao)和(he)後(hou)再(zai)取(qu)出(chu)，種(zhong)入(ru)細(xi)胞(bao)時(shi)力(li)量(liang)要(yao)輕(qing)，可(ke)采(cai)取(qu)用(yong)滴(di)頭(tou)在(zai)培(pei)養(yang)板(ban)孔(kong)的(de)側(ce)麵(mian)慢(man)慢(man)加(jia)入(ru)讓(rang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)流(liu)入(ru)板(ban)孔(kong)中(zhong)
，培(pei)養(yang)的(de)細(xi)胞(bao)基(ji)本(ben)是(shi)均(jun)勻(yun)生(sheng)長(chang)。記(ji)住(zhu)千(qian)萬(wan)不(bu)要(yao)用(yong)振(zhen)蕩(dang)器(qi)振(zhen)蕩(dang)
，否(fou)則(ze)你(ni)的(de)細(xi)胞(bao)就(jiu)會(hui)想(xiang)你(ni)說(shuo)得(de)那(na)樣(yang)聚(ju)積(ji)在(zai)一(yi)起(qi)。

　　5)6孔板接種和換液問題：

　　問：我的細胞傳代很正常，但一種到六孔板裏(不管加藥和對照)
，總有兩三個孔(隨機)細胞長得不好，很小
，像破碎了。有人遇到過這種情況嗎?到底是啥原因呢?請各位指點

　　答：可能跟你加液的溫度有關。如果你細胞剛剛拿出來換液加液
，培養基也是從4度冰箱拿出來不久，很容易細胞就會凍死了。建議你把培養基先在培養箱裏邊孵育15min先。

　　6)24孔板接種問題：

　　問：把細胞消化接種到24孔板之後，已經四天了
，老是每孔的中間部分長不滿，每天換液時都用PBS  清洗，第二天換液時都出現同樣的情況，每孔的邊緣長的很好，中央大量死細胞?我是選擇孔內鋪蓋玻片，在玻片上種植。每次換液都用PBS洗
，必要的步驟嗎?另外
，也有可能和細胞種類有關或者和培養液有關?

　　答：1.我想你的培養液可能加的太少了。由於表麵張力的作用，培養板的邊緣液體會向上走，造成培養液麵呈現一個凹麵(就像量筒的液體凹麵一樣)，中zhong央yang的de細xi胞bao正zheng好hao在zai凹ao麵mian的de處chu，培pei養yang液ye少shao，細xi胞bao的de營ying養yang不bu夠gou，甚shen至zhi幹gan涸he掉diao，空kong氣qi中zhong的de氧yang氣qi也ye會hui造zao成cheng損sun傷shang，即ji使shi有you增zeng值zhi過guo來lai的de細xi胞bao也ye會hui死si掉diao。