在ELISAdeyanfazhibeizhongyouweizhongyaodejiushitadezhikongliucheng,baokuokangyuanshejijizhibeishaixuan,kangtizhibei,biaozhunpindedingliang,jianceyedeyouhua,shijihedezuzhuang,yijigezhongxingnengdeyanzheng。duiyukeyangongzuozhelaishuo,yaozhibeiyigehaodeELISA kit,需要具備敏感性高,特異性強,重複性好,並且其試劑穩定、易保存,操作簡便等。下麵來看一下ELISA的質控控製。
1. 抗原抗體選擇
ELISA檢(jian)測(ce)原(yuan)理(li)基(ji)於(yu)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)反(fan)應(ying),其(qi)質(zhi)量(liang)影(ying)響(xiang)了(le)試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)性(xing)能(neng)。對(dui)於(yu)大(da)分(fen)子(zi)蛋(dan)白(bai)抗(kang)原(yuan),多(duo)采(cai)用(yong)雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心(xin)法(fa),使(shi)用(yong)優(you)的(de)抗(kang)體(ti)對(dui),且(qie)至(zhi)少(shao)有(you)一(yi)種(zhong)為(wei)單(dan)抗(kang),配(pei)對(dui)篩(shai)選(xuan)最(zui)佳(jia)信(xin)噪(zao)比(bi)的(de)包(bao)被(bei)和(he)檢(jian)測(ce)抗(kang)體(ti)。對(dui)於(yu)抗(kang)原(yuan)為(wei)多(duo)肽(tai)和(he)小(xiao)分(fen)子(zi)(或者偶聯物),多采用競爭抑製法,抗體的是經過驗證的單克隆抗體或者多克隆抗體。
2. 標準品
對dui於yu標biao準zhun品pin定ding量liang的de準zhun確que性xing,每mei個ge公gong司si對dui於yu定ding量liang標biao準zhun和he方fang法fa可ke能neng會hui有you不bu同tong,這zhe是shi企qi業ye標biao準zhun。試shi劑ji盒he使shi用yong的de標biao準zhun品pin多duo為wei重zhong組zu蛋dan白bai或huo者zhe單dan價jia的de小xiao分fen子zi, 定量可參考國際標準品,國家標準物質信息網或者一些大公司,如R&D, Abcam等。標準品的定量直接會決定試劑盒最後樣本的檢測結果。
3. 天然樣本驗證分析
我們在選擇樣本時,避免使用有外源性汙染的樣本,避免血樣本出現溶血、細菌汙染,最好使用較新鮮樣本,避免反複凍融。
血清是最為常見的檢測樣本,但是大約40%的血清標本中含有非特異性幹擾物質,可以不同程度影響檢測結果;常見的幹擾物質有:類風濕因子RF、補體、交叉反應物質和異嗜性抗體等其他物質等。避免其發生的方法有:
①標本用聯有熱變性IgG的固相吸附劑處理。
②用2-C2H6OS加入到標本稀釋液中使RF降解。
③56℃ 30 min加熱血清使補體滅活。
在樣本檢測中,稀釋對於實驗的成功也至關重要,稀釋過度以及稀釋不足均有可能導致樣本的測值低。Elisa shiyanjiaoweichangjiandeyigexianxiangjiushigouzhuangxiaoying,jikangyuanyukangtibilibuheshierdaozhijiayinxingdexianxiang,kangyuanguoliangchengweihoudaixiaoying。dangyangbenzhongmubiaowuhanlianghengao,ermeiyoujinxingzhengquedexishi,jiuyoukenenghuidaozhijiayinxingfanying。
手機版








