PCR( Polymerase Chain Reaction)-聚合酶鏈式反應，可以選擇性擴增一段DNA序列。其基本步驟是，首先將待擴增的模板DNA變性使之成為單鏈，DNA樣品中
，特異性的引物能夠與其互補的序列雜交，在dNTPs和Taq酶存在時
，就可以合成模板DNA的互補鏈
，反應完成後
，將反應混合物加熱使DNA雙鏈變性
，溫度下降後，過量的引物又可以開始第二輪的合成反應。這種延伸-變性-退火-延伸的循環可以重複多次，使所需要的DNA片段得到特異性的擴增。PCR檢測試劑盒反應失敗的原因及解決方法如下：

一 、模板質量問題：

1.模板提取不完整，其中不含你的目的基因，或目的基因含量太低。可以跑個電泳看看提取的DNA
，PCR陽性樣品與陰性樣品是否有明顯差別。如果確定是這種問題
，可以增加模板量試試，但不一定行得通。

2.模板裏麵殘留某種試劑成份，可能抑製Taq聚合酶的活性
，如果是這種情況

，可以用試劑盒把模板再純化一下

，或將模板做個梯度稀釋以確定最佳的模板量。

3.為什麼跑電泳會出現拖帶呢？

（1）有you可ke能neng的de因yin為wei你ni的de電dian壓ya調tiao的de太tai高gao了le。電dian泳yong跟gen很hen多duo因yin素su有you關guan
，其qi中zhong就jiu有you一yi個ge是shi電dian壓ya，在zai適shi當dang的de電dian壓ya範fan圍wei內nei增zeng加jia是shi可ke以yi加jia快kuai遷qian移yi速su率lv

，但dan是shi要yao是shi超chao到dao一yi個ge臨lin界jie值zhi反fan而er有you害hai。你ni可ke以yi適shi當dang的de調tiao低di點dian看kan看kan。
（2）有時候發現上樣量太多的話會有拖帶。你看能否回收之後 ，按1:50 或1:100 等稀釋後，再當成模板擴一次怎麼樣。

二 、引物問題
1.樣(yang)品(pin)自(zi)身(shen)的(de)基(ji)因(yin)型(xing)差(cha)異(yi)導(dao)致(zhi)擴(kuo)增(zeng)失(shi)敗(bai)。也(ye)就(jiu)是(shi)說(shuo)你(ni)的(de)引(yin)物(wu)與(yu)某(mou)些(xie)基(ji)因(yin)型(xing)的(de)樣(yang)品(pin)結(jie)合(he)的(de)好(hao)
，而(er)和(he)另(ling)一(yi)些(xie)基(ji)因(yin)型(xing)結(jie)合(he)不(bu)好(hao)。可(ke)以(yi)換(huan)一(yi)對(dui)更(geng)保(bao)守(shou)的(de)引(yin)物(wu)試(shi)試(shi)。祝(zhu)順(shun)利(li)！
2.普通PCR所suo用yong的de一yi對dui引yin物wu中zhong有you一yi個ge引yin物wu加jia多duo了le

，為wei正zheng常chang的de三san倍bei隻zhi要yao引yin物wu特te異yi性xing比bi較jiao好hao，那na麼me不bu會hui產chan生sheng大da的de影ying響xiang。如ru果guo恰qia巧qiao是shi加jia多duo的de這zhe條tiao引yin物wu不bu是shi很hen特te異yi的de話hua，也ye許xu會hui擴kuo出chu來lai非fei特te異yi帶dai。

三、Taq酶處於失活狀態。因為活性降低了能出現二聚體。

四

、模板濃度過低。

五、退火溫度過高。可以做個梯度PCR試一下。

六
、循環次數過少或延伸時間過短以致目的基因擴增量不夠。這個可能性不大。

七
、dNTP濃度低時PCR產率及特異性均增高
，適合於用擴增摻入法標記生物素及放射性元素。當100μl PCR液中含dNTP各40μmol/L時就足以合成2.6μg的DNA（dNTP消耗一半）,所以,你不小心多加了4倍的量,會很影響PCR結果,即Taq酶活力要降低20～30%，即底物抑製。

八、PCR產物電泳
1.電泳圖不清晰，可能電泳緩衝液和製膠緩衝液濃度不準或者髒了吧。換新的電泳緩衝液和製膠緩衝液試試。marker都出問題說明是膠的問題
，或者電泳操作的問題。
2. PCR擴增有時出現塗抹帶或片狀帶或地毯樣帶。其原因往往由於酶量過多或酶的質量差，dNTP濃度過高，Mg²⁺濃度過高，退火溫度過低，循環次數過多引起。