1.非特異性擴增帶
PCR擴增後出現的條帶與預計的大小不一致,或大或小,或者同時出現特異性擴增帶與非特異性擴增帶。非特異性條帶的出現,其原因:
一是引物與靶序列不完全互補、或引物聚合形成二聚體。
二是Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低,及PCR循(xun)環(huan)次(ci)數(shu)過(guo)多(duo)有(you)關(guan)。其(qi)次(ci)是(shi)酶(mei)的(de)質(zhi)和(he)量(liang),往(wang)往(wang)一(yi)些(xie)來(lai)源(yuan)的(de)酶(mei)易(yi)出(chu)現(xian)非(fei)特(te)異(yi)條(tiao)帶(dai)而(er)另(ling)一(yi)來(lai)源(yuan)的(de)酶(mei)則(ze)不(bu)出(chu)現(xian),酶(mei)量(liang)過(guo)多(duo)有(you)時(shi)也(ye)會(hui)出(chu)現(xian)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)擴(kuo)增(zeng)。
其對策有:必bi要yao時shi重zhong新xin設she計ji引yin物wu。減jian低di酶mei量liang或huo調tiao換huan另ling一yi來lai源yuan的de酶mei。降jiang低di引yin物wu量liang,適shi當dang增zeng加jia模mo板ban量liang,減jian少shao循xun環huan次ci數shu。適shi當dang提ti高gao退tui火huo溫wen度du或huo采cai用yong二er溫wen度du點dian法fa(93℃變性,65℃左右退火與延伸)。
2.片狀拖帶或塗抹帶
PCR擴增有時出現塗抹帶或片狀帶或地毯樣帶。
其原因往往由於
(1)酶量過多或酶的質量差
(2)dNTP濃度過高
(3)Mg2+濃度過高
(4)退火溫度過低
(5)循環次數過多
其對策有:
(1)減少酶量,或調換另一來源的酶
(2)減少dNTP的濃度
(3)適當降低Mg2+濃度
(4)增加模板量
(5)減少循環次數
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