二、包被用抗原
天然抗原、重(zhong)組(zu)抗(kang)原(yuan)和(he)合(he)成(cheng)多(duo)肽(tai)抗(kang)原(yuan)三(san)大(da)類(lei)。合(he)成(cheng)多(duo)肽(tai)抗(kang)原(yuan)是(shi)抗(kang)原(yuan)決(jue)定(ding)簇(cu)的(de)氨(an)基(ji)酸(suan)序(xu)列(lie)人(ren)工(gong)合(he)成(cheng)的(de)多(duo)肽(tai)片(pian)段(duan)。一(yi)般(ban)隻(zhi)含(han)有(you)一(yi)個(ge)抗(kang)原(yuan)決(jue)定(ding)簇(cu),純(chun)度(du)高(gao),特(te)異(yi)性(xing)也(ye)高(gao),但(dan)由(you)於(yu)分(fen)子(zi)量(liang)太(tai)小(xiao),往(wang)往(wang)難(nan)於(yu)直(zhi)接(jie)吸(xi)附(fu)於(yu)固(gu)相(xiang)上(shang)。借(jie)助(zhu)於(yu)偶(ou)聯(lian)物(wu)與(yu)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)的(de)吸(xi)附(fu),間(jian)接(jie)地(di)結(jie)合(he)到(dao)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)表(biao)麵(mian)。
三、包被用抗體
IgG對聚苯 烯有強吸附力,其聯結發生在Fc段上,ELISA試劑盒抗體結合點暴露於外。取材於抗血清或含單克隆抗體的培養液.須除去雜抗體後才能用於ELISA,以保證試驗的特異性。
腹(fu)水(shui)中(zhong)單(dan)抗(kang)的(de)濃(nong)度(du)較(jiao)高(gao),特(te)異(yi)性(xing)亦(yi)較(jiao)強(qiang),因(yin)此(ci)不(bu)需(xu)要(yao)作(zuo)吸(xi)收(shou)層(ceng)析(xi)處(chu)理(li),直(zhi)接(jie)包(bao)被(bei)。在(zai)某(mou)些(xie)情(qing)況(kuang)下(xia),用(yong)多(duo)種(zhong)單(dan)抗(kang)混(hun)合(he)包(bao)被(bei),可(ke)取(qu)得(de)更(geng)好(hao)的(de)效(xiao)果(guo)。
四、包被的條件
pH9.6碳酸鹽緩衝液
pH7.2的磷酸鹽緩衝液
pH7-8的Tris-HCL緩衝液
加入包被液後,在4-8℃冰箱中放置,37℃中保溫2小時。ELISA試劑盒包被濃度隨載體和包被物的性質可有很大的變化,每批材料需通過實驗與酶結合物的濃度協調選定。一般蛋白質的包被濃度為10ng/ml-20μg/ml。
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