(注:流動相以甲醇為例,色譜柱以C18為例)
“堵”的de表biao現xian現xian象xiang就jiu是shi柱zhu壓ya異yi常chang升sheng高gao,直zhi接jie原yuan因yin就jiu是shi流liu路lu不bu暢chang。堵du塞sai的de主zhu要yao位wei置zhi就jiu是shi在zai色se譜pu柱zhu的de前qian端duan,最zui主zhu要yao原yuan因yin就jiu是shi流liu動dong相xiang裏li有you雜za質zhi,雜za質zhi的de主zhu要yao來lai源yuan就jiu是shi細xi菌jun。
“堵”的原因
新(xin)製(zhi)備(bei)的(de)純(chun)水(shui)在(zai)室(shi)內(nei)放(fang)置(zhi)幾(ji)天(tian)就(jiu)會(hui)長(chang)菌(jun),而(er)這(zhe)些(xie)細(xi)菌(jun)雖(sui)然(ran)肉(rou)眼(yan)不(bu)可(ke)見(jian),卻(que)足(zu)以(yi)堵(du)塞(sai)柱(zhu)填(tian)料(liao)顆(ke)粒(li)的(de)空(kong)隙(xi),造(zao)成(cheng)柱(zhu)子(zi)很(hen)快(kuai)報(bao)廢(fei)。這(zhe)就(jiu)是(shi)在(zai)配(pei)製(zhi)流(liu)動(dong)相(xiang)時(shi)造(zao)成(cheng)的(de)細(xi)菌(jun)汙(wu)染(ran)的(de)原(yuan)因(yin),解(jie)決(jue)它(ta)的(de)方(fang)法(fa)很(hen)簡(jian)單(dan),就(jiu)是(shi)確(que)保(bao)水(shui)的(de)可(ke)靠(kao)性(xing)。
(2)成箱購買市售品牌純淨水,如,500mL的de娃wa哈ha哈ha,這zhe些xie水shui的de質zhi量liang足zu以yi應ying付fu液ye相xiang色se譜pu的de要yao求qiu。先xian隨sui機ji抽chou取qu一yi支zhi做zuo一yi下xia細xi菌jun平ping板ban實shi驗yan,待dai菌jun落luo數shu合he格ge方fang可ke使shi用yong。這zhe樣yang每mei次ci隻zhi要yao單dan獨du開kai一yi支zhi即ji可ke,也ye很hen方fang便bian。每mei次ci成cheng本ben2元左右。
(2)流動相過濾在經濟成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000duoyuan,qieguolvqigongrenshibijiaorongyisunhuaideshebei。zuizhuyaoshiguolvpiandechengbentaigao,yipianjiuyaojishiyuan。anyibanyexiangzhudezhengchangshiyongshoumingjisuan,guolvpiandechengbenhuiyuanyuangaoyusepuzhudechengben。
(3)流動相過濾對於工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個預清洗、裝備、使用、用後清洗,晾幹的過程,至少也有一個小時的時間。這個成本也不能忽視。
(4)在實際工作未發現流動相不過濾會對柱壽命有任何影響。我們起碼有6年時間沒有做過流動相過濾的工作,但是和國內同行相比較,在同等使用強度下我們的柱壽命是比較長的。
從單純實驗效果來說,後一種有明顯的優點:首先是簡單,不需要實驗者另個計算配比混合,其次就是比例準確,能得到保留時間重複性極好的實驗效果。
但是,它有一個致命的缺陷,就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌(很多情況下不僅僅用純水作流動相,而是用緩衝鹽溶液,本身就是優質肥料,細菌長得更迅速),一yi旦dan有you細xi菌jun柱zhu子zi就jiu壞huai得de很hen快kuai。所suo以yi這zhe種zhong方fang式shi要yao求qiu操cao作zuo人ren員yuan每mei次ci實shi驗yan都dou要yao用yong新xin製zhi備bei的de純chun水shui,更geng要yao求qiu在zai每mei次ci實shi驗yan後hou把ba水shui相xiang換huan掉diao,換huan成cheng甲jia醇chun衝chong洗xi幹gan淨jing,這zhe一yi點dian在zai實shi際ji工gong作zuo中zhong很hen多duo人ren意yi識shi不bu強qiang,就jiu是shi意yi識shi到dao了le但dan多duo次ci使shi用yong中zhong總zong有you一yi兩liang次ci會hui遺yi漏lou,但dan是shi往wang往wang這zhe一yi兩liang次ci就jiu足zu以yi產chan生sheng致zhi命ming的de影ying響xiang。因yin為wei液ye相xiang色se譜pu柱zhu的de堵du塞sai是shi不bu可ke逆ni的de。
所以,寧可犧牲小小的保留時間的重複性,也不要用純水溶液作為流動相的一組。從實際實驗效果來說,我建議用10%的甲醇水代替純水溶液(以前我做過不同比例甲醇水的細菌總數實驗,在5%就基本可以抑菌,在10%及以上就可以完全殺菌了),這樣可以有效排除長細菌的隱患,既可作流動相,也可衝柱。就算是在配製流動相時會計算得麻煩一些,但是一次麻煩,終身受益。
(2)樣品處理液淨化得不幹淨,長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。
(3)在使用手動六通閥時,有些人可能由於手勁小的原因,轉動的不到位,於是造成流路形成了死堵,壓力快速升高超過警戒值。
(4)在(zai)使(shi)用(yong)金(jin)屬(shu)管(guan)路(lu)作(zuo)出(chu)廢(fei)液(ye)管(guan)時(shi),應(ying)當(dang)注(zhu)意(yi)最(zui)好(hao)廢(fei)液(ye)瓶(ping)中(zhong)先(xian)放(fang)一(yi)些(xie)水(shui),並(bing)把(ba)廢(fei)液(ye)管(guan)的(de)出(chu)口(kou)端(duan)放(fang)在(zai)液(ye)麵(mian)下(xia)。如(ru)果(guo)位(wei)於(yu)在(zai)液(ye)相(xiang)上(shang)且(qie)實(shi)驗(yan)使(shi)用(yong)較(jiao)高(gao)濃(nong)度(du)的(de)緩(huan)衝(chong)鹽(yan)溶(rong)液(ye),在(zai)停(ting)機(ji)時(shi)可(ke)能(neng)在(zai)出(chu)口(kou)端(duan)結(jie)晶(jing)成(cheng)塊(kuai)並(bing)造(zao)成(cheng)堵(du)塞(sai)。這(zhe)種(zhong)情(qing)況(kuang)不(bu)常(chang)見(jian),但(dan)卻(que)的(de)確(que)發(fa)生(sheng)過(guo)。
漏液的原因分兩種:
(1)接觸硬件不當
在更換零件如流路管或換柱時shi,換huan的de接jie頭tou接jie口kou不bu匹pi配pei,造zao成cheng漏lou液ye。要yao注zhu意yi不bu同tong公gong司si的de柱zhu子zi接jie頭tou很hen多duo是shi不bu同tong的de,甚shen至zhi同tong一yi家jia公gong司si在zai不bu同tong時shi期qi生sheng產chan的de液ye相xiang柱zhu接jie頭tou也ye有you很hen大da區qu別bie。當dang然ran選xuan用yongPEEK接頭是一個較好的解決方法,不僅通用性好,而且靠手擰就能保證不漏液。
即使是接口本身是匹配的,但是如果操作不當也會漏液,一種不當就是力度把握不好,擰得太緊或太鬆;另一種不當就是致命的錯誤:huasi,zheshiwangwangshidongshounenglibutaiqiang,luosidinghenshaoningdegongzuozhefandecuowu,huasidehouguobujinshilouyenamejiandan,changzaochengzhongyaobujiandebaofei。jiejuezhegewentizhinengkaoebujibengonglaishiyan,najiushiningluosi。
(2)使用儀器不當
如果是輸送泵漏液,最常見的原因就是在活塞位置緩衝鹽析出造成。
xichudeyuanyinyouliangge,yishishiyonghuanchongyanrongyeshituranjiarulechunjiachunerxichu,zhezhongcuowuhenrongyibimian,zheshijinliangbuyaoyongchundejiachunhechunshui。zhiyaohuxiangyou10%的比例就不會出現這個問題。另一原因是在用緩衝鹽溶液(不論甲醇含量有多少)作流動相時,實驗結束後沒有換甲醇水衝洗,使得微滲的流動相幹燥形成晶體造成。
不過,輸送泵漏液並不是非得馬上修不可,衝洗幹淨並在以後的使用中多加小心一般都可以正常使用。
jianceqilouyeshigehenmafandeshi,yibandoushixishouchidewenti,genghuandefeiyongxiangdanggao。danshibingbushishuoyidingyaomashanggenghuan,haikeyicongshijishiyanxiaoguokannengfoucouheshiyong。
1.過濾頭
抽液時,在流路管中有不規則但持續的小氣泡產生,這時考慮的是流動相有沒有脫氣(需要特別提醒即使是有了真空脫氣機也是要先超聲脫氣的,起碼可以減少脫氣機的工作壓力並提高工作效率),ruguoyijingtuoleqi,zeyaozhuyiguolvtoudewuranyehuizaochengzhezhongxianxiang。chulifangfabijiaojiandan,ningxiaguolvtouzaixixiaosuanzhongjinpao,chaoshengbanxiaoshi,xijinghouzhuanghuiqujike。
2.透明流路管
指zhi的de是shi在zai過guo濾lv頭tou和he輸shu送song泵beng之zhi間jian的de那na一yi段duan管guan路lu。這zhe一yi個ge部bu分fen往wang往wang不bu是shi有you點dian氣qi泡pao,而er經jing常chang是shi整zheng個ge管guan中zhong全quan是shi空kong氣qi而er操cao作zuo人ren員yuan卻que渾hun然ran不bu知zhi,以yi致zhi輸shu送song泵beng工gong作zuo了le半ban天tian才cai發fa現xian流liu動dong相xiang瓶ping裏li的de液ye體ti一yi點dian也ye沒mei少shao。這zhe也ye是shi我wo們men常chang說shuo的de液ye相xiang色se譜pu儀yi至zhi少shao一yi周zhou要yao開kai機ji一yi次ci的de原yuan因yin(我們做液相一定要有“微滲”的概念)。如果長時間不用,這一段管路的液體會徹底幹掉,而充滿空氣的管路和充滿液體的管路不仔細看是分辨不出的。
zhezhongqingkuangduiyushusongbenghenweixian,yinwei,bengcongshejilaishuoshishusongyetierbushiqiti,neibudeyetiduiyuhuosailaishuoqidaolejiyoudezuoyong,ruguohuosaiganshanghaicancunleyixiehuanchongyan,zejiyilashang,zaochengbukenizhuandeyingxiang。duiyuzhezhongqingkuang,yaotuchu“預防為主”,如,液相色譜使用人員要相對固定和穩定,工作中合理搭配資源,每台機一周至少作一次實驗,如長期不用起碼每周要衝流動相2小時。養成良好的工作習慣很重要。如果不慎出現了這種問題怎麼辦?我的建議是用外力使管路中充滿液體。具體如下:
(1)找到流路管進入輸送泵的接頭。
(2)擰下來。
(3)用一幹淨的洗耳球的尖端對準管路的平整切口。(4)吸液體,看液麵從流動相瓶裏上升,至離洗耳球5厘米左右時停止該動作。
(5)快速把接頭擰回輸送泵上(這個過程可能會有少許流動相外泄,這是正常現象)。
(6)開機,打開排液閥門,啟動輸送泵。
(7)等排液管中流出的溶液沒有氣泡時,再關閉排液閥,儀器正常工作。
3.輸送泵和柱子
這些部分進了氣泡一般不怕,衝掉就行。
4.檢測器
應(ying)該(gai)說(shuo),整(zheng)個(ge)流(liu)路(lu)中(zhong)隻(zhi)要(yao)有(you)一(yi)個(ge)氣(qi)泡(pao)都(dou)會(hui)在(zai)檢(jian)測(ce)器(qi)上(shang)得(de)到(dao)強(qiang)烈(lie)的(de)信(xin)號(hao)反(fan)映(ying),檢(jian)測(ce)器(qi)內(nei)部(bu)的(de)氣(qi)泡(pao)一(yi)般(ban)都(dou)能(neng)被(bei)衝(chong)走(zou),但(dan)也(ye)有(you)很(hen)難(nan)衝(chong)掉(diao)的(de)殘(can)留(liu)氣(qi)泡(pao)的(de)情(qing)況(kuang)。
ruguojianceqiliyoucanliuqipao,huiyoutezhengmingxiandebiaoxianxingshi,jiushizaizoujixianshihuishibushijiangechuxianzhishangzhixiaxinhaohendadexinhaofeng。zheshixiankanputongliuliangnengfouchongzou,ruguochongbuzou,naweiyidebanfajiushichaizhu,bajianceqizhijieliandaoshusongbengdechukou,jiadajibeiliuliangchongxi,zekendingnengchongzouqipao。
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