眾(zhong)所(suo)周(zhou)知(zhi)
，在(zai)反(fan)相(xiang)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)中(zhong)，固(gu)定(ding)相(xiang)是(shi)非(fei)極(ji)性(xing)的(de)
，而(er)流(liu)動(dong)相(xiang)是(shi)極(ji)性(xing)的(de)。我(wo)們(men)如(ru)何(he)使(shi)流(liu)動(dong)相(xiang)呈(cheng)極(ji)性(xing)呢(ne)？通(tong)過(guo)添(tian)加(jia)水(shui)這(zhe)樣(yang)的(de)水(shui)性(xing)組(zu)分(fen)。然(ran)而(er)，添(tian)加(jia)水(shui)的(de)比(bi)例(li)有(you)限(xian)製(zhi)，不(bu)能(neng)使(shi)用(yong)含(han)水(shui)量(liang)過(guo)高(gao)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)進(jin)行(xing)反(fan)相(xiang)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)分(fen)析(xi)
，如(ru)90%、95%甚至100%。那麼，這是什麼原因呢？

首(shou)先(xian)

，我(wo)們(men)需(xu)要(yao)了(le)解(jie)為(wei)什(shen)麼(me)要(yao)使(shi)用(yong)高(gao)含(han)水(shui)量(liang)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)。原(yuan)因(yin)可(ke)能(neng)是(shi)為(wei)了(le)保(bao)留(liu)高(gao)極(ji)性(xing)分(fen)子(zi)，如(ru)有(you)機(ji)酸(suan)。例(li)如(ru)抗(kang)壞(huai)血(xue)酸(suan)，這(zhe)些(xie)分(fen)子(zi)在(zai)性(xing)質(zhi)上(shang)是(shi)高(gao)極(ji)性(xing)的(de)，它(ta)們(men)在(zai)反(fan)相(xiang)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)中(zhong)不(bu)會(hui)被(bei)充(chong)分(fen)保(bao)留(liu)，因(yin)為(wei)我(wo)們(men)的(de)固(gu)定(ding)相(xiang)是(shi)非(fei)極(ji)性(xing)的(de)，而(er)非(fei)極(ji)性(xing)固(gu)定(ding)相(xiang)不(bu)會(hui)保(bao)留(liu)這(zhe)些(xie)極(ji)性(xing)化(hua)合(he)物(wu)。因(yin)此(ci)，需(xu)要(yao)在(zai)流(liu)動(dong)相(xiang)中(zhong)添(tian)加(jia)高(gao)比(bi)例(li)的(de)水(shui)相(xiang)。這(zhe)是(shi)因(yin)為(wei)水(shui)是(shi)一(yi)種(zhong)極(ji)性(xing)溶(rong)劑(ji)
，它(ta)能(neng)夠(gou)與(yu)極(ji)性(xing)較(jiao)強(qiang)的(de)分(fen)析(xi)物(wu)形(xing)成(cheng)氫(qing)鍵(jian)或(huo)離(li)子(zi)相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)，從(cong)而(er)降(jiang)低(di)分(fen)析(xi)物(wu)在(zai)流(liu)動(dong)相(xiang)中(zhong)的(de)溶(rong)解(jie)度(du)
，有(you)利(li)於(yu)分(fen)析(xi)物(wu)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)上(shang)的(de)保(bao)留(liu)和(he)分(fen)離(li)。

接下來
，我們需要了解C8或C18固定相的性質。C8/C18是一種常用的反相液相色譜柱，其表麵鍵合有C8或C18烷基鏈，具有類似油脂的非極性特性。在反相色譜法中，分析物在流動相和固定相之間進行分配，以實現分離。由於C8/C18柱的固定相非極性，它們通常適用於分析非極性或弱極性分析物。然而，油水不能混合
，類似油脂的非極性特性使得C8或C18固定相在高比例水相中不能被潤濕。當流動相中有一定比例的有機溶劑
，如乙腈或甲醇（其性質為非極性）時，對C8或C18具有良好的潤濕性。而鍵合的固定相是位於矽膠孔內的，這意味流動相能夠潤濕C8或C18固定相的孔。這一點是非常重要的，否則它們將無法實現對目標分析物的保留。然而，如果使用100%的水相作為流動相
，這會使C8或C18鍵jian合he固gu定ding相xiang幹gan涸he。因yin為wei水shui具ju有you較jiao高gao的de表biao麵mian張zhang力li
，流liu經jing固gu定ding相xiang的de水shui分fen子zi不bu會hui進jin入ru孔kong內nei
，而er隻zhi會hui通tong過guo孔kong之zhi間jian的de空kong間jian。這zhe樣yang一yi來lai，孔kong就jiu不bu會hui打da開kai
，如ru果guo孔kong沒mei有you被bei潤run濕shi，那na麼me固gu定ding相xiang無wu法fa處chu於yu活huo躍yue狀zhuang態tai，不bu能neng與yu分fen析xi物wu發fa生sheng相xiang互hu作zuo用yong。這zhe就jiu是shi在zai反fan相xiang液ye相xiang色se譜pu中zhong使shi用yongC8/C18柱時要避免高水相流動相的原因。

當C8/C18固定相暴露在高水相流動相中時
，由於表麵張力較高
，C8/C18表麵會脫水，這種現象稱為固定相塌陷
、鏈折疊或固定相打結
，化合物無法正常地與固定相發生相互作用進行保留。

那麼，固定相塌陷會帶來哪些問題呢？固定相塌陷可能會導致保留減少
、baoliushijiandebuzhongfudexianxiang。bingqieruguoxiangzaicicongganhezhuangtaihuifudaorunshizhuangtai，zhegefanxiangguochengjiangxuyaohenchangdeshijian。baoliudejianshaoshiyinweijianhegudingxiangdehuoxingbiaomiancunzaiyuguijiaokongzhong，erkongneimeiyoubeirunshi，huahewuyewufajinrukongneiyuqifashengxianghuzuoyong。yinci，baoliushijianhuijianshao。liru，ruguoshiyong90%的水和10%的甲醇作為流動相，保留時間為10分鍾。此時
，如果隻使用100%的水，10分鍾的保留時間會急劇減少到3~4分fen鍾zhong。第di二er個ge重zhong要yao的de點dian是shi保bao留liu時shi間jian的de重zhong複fu性xing會hui降jiang低di
，可ke能neng會hui隨sui著zhe時shi間jian的de推tui移yi而er發fa生sheng變bian化hua。所suo以yi，如ru果guo保bao留liu時shi間jian變bian化hua很hen大da
，可ke能neng是shi因yin為wei流liu動dong相xiang中zhong水shui含han量liang較jiao高gao。

如果別無選擇，隻能使用水性或高比例水相的流動相

，那麼在方法開發階段
，需要注意選擇合適的色譜柱。

1.未封端色譜柱。未封端柱表麵存在較多的具有一定極性的遊離矽醇


，遊離矽醇使固定相表麵能被潤濕
，有利於極性分析物的保留。

2.短鏈烷基色譜柱：鍵合鏈之間存在遊離體積，矽醇的屏蔽作用很小，有利於極性分析物的分離。

3.極性嵌入烷基相色譜柱：在烷基鏈中嵌入極性基團，增強與極性分析物之間的相互作用，提高保留性能。

4.寬孔徑相色譜柱：以便水可以滲透到孔內使相濕潤，有利於極性分析物在高水相流動相下的保留。

綜上所述，在使用C8/C18sepuzhushi
，yingbimiangaoshuixiangliudongxiang

，yimianzaochenggudingxiangtaxiandengwenti。zhenduigaoshuixiangliudongxiangxiabaoliujixingfenxiwudexuqiu，keyixuanzeqitaleixingdesepuzhujinxingfenxi。