內標法的優缺點
內nei標biao法fa對dui進jin樣yang量liang不bu嚴yan格ge要yao求qiu,測ce定ding的de結jie果guo也ye較jiao為wei準zhun確que,由you於yu通tong過guo測ce量liang內nei標biao物wu及ji被bei測ce組zu分fen的de峰feng麵mian積ji的de相xiang對dui值zhi來lai進jin行xing計ji算suan的de,因yin而er在zai一yi定ding程cheng度du上shang消xiao除chu了le進jin樣yang量liang、儀器不穩定等變化所引起的誤差,隻對欲分析的組分峰做校正。
不(bu)過(guo)內(nei)標(biao)法(fa)必(bi)須(xu)加(jia)一(yi)個(ge)組(zu)分(fen)進(jin)到(dao)樣(yang)品(pin),易(yi)增(zeng)加(jia)麵(mian)積(ji)測(ce)量(liang)誤(wu)差(cha)。操(cao)作(zuo)程(cheng)序(xu)較(jiao)為(wei)麻(ma)煩(fan),每(mei)次(ci)分(fen)析(xi)時(shi)內(nei)標(biao)物(wu)和(he)試(shi)樣(yang)都(dou)要(yao)準(zhun)確(que)稱(cheng)量(liang),有(you)時(shi)尋(xun)找(zhao)合(he)適(shi)的(de)內(nei)標(biao)物(wu)也(ye)有(you)困(kun)難(nan)。
內標物的選擇原則
采用內標法定量時,內標物的選擇是一項十分重要的工作。理想地說,內標物應當是一個能得到純樣的已知化合物,這樣它能以準確、已知的量加到樣品中去,它應當和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學性質(如化學結構、極性、揮發度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應特征,最好是被分析物質的一個同係物。
當dang然ran,在zai色se譜pu分fen析xi條tiao件jian下xia,內nei標biao物wu必bi須xu能neng與yu樣yang品pin中zhong各ge組zu分fen充chong分fen分fen離li。需xu要yao指zhi出chu的de是shi,在zai少shao數shu情qing況kuang下xia,分fen析xi人ren員yuan可ke能neng比bi較jiao關guan心xin化hua合he物wu在zai一yi個ge複fu雜za過guo程cheng中zhong所suo得de到dao的de回hui收shou率lv,此ci時shi,他ta可ke以yi使shi用yong一yi種zhong在zai這zhe種zhong過guo程cheng中zhong很hen容rong易yi被bei完wan全quan回hui收shou的de化hua合he物wu作zuo內nei標biao,來lai測ce定ding感gan興xing趣qu化hua合he物wu的de百bai分fen回hui收shou率lv,而er不bu必bi遵zun循xun以yi上shang所suo說shuo的de選xuan擇ze原yuan則ze。
對於內標法定量分析來說,內標物的選擇必須滿足如下的條件:
1、內標物與被分析物質的物理化學性質要相似(如:沸點、極性、化學結構等);
2、內標物應是該試樣中不存在的純物質;
3、它必須完全溶於被測樣品(或溶劑)中,且不與被測樣品起化學反應;並與試樣中各組分的色譜峰能完全分離;
4、能加入內標物的量應接近於被測組分;
5、色se譜pu峰feng的de位wei置zhi應ying與yu被bei測ce組zu分fen的de色se譜pu峰feng的de位wei置zhi相xiang近jin,或huo在zai幾ji個ge被bei測ce組zu分fen色se譜pu峰feng中zhong間jian。且qie又you不bu共gong溢yi出chu,目mu的de是shi為wei了le避bi免mian儀yi器qi的de不bu穩wen定ding性xing所suo造zao成cheng的de靈ling敏min度du的de差cha異yi;
6、選擇合適的內標物加入量,使得內標物和被分析物質二者峰麵積的匹配性大於75%,以免由於它們處在不同響應值區域而導致的靈敏度偏差。
需xu要yao指zhi出chu的de是shi,在zai少shao數shu情qing況kuang下xia,分fen析xi人ren員yuan可ke能neng比bi較jiao關guan心xin化hua台tai物wu在zai一yi個ge複fu雜za過guo程cheng中zhong所suo得de到dao的de回hui收shou率lv,此ci時shi,可ke以yi使shi用yong在zai這zhe過guo程cheng中zhong很hen容rong易yi被bei完wan全quan回hui收shou的de化hua台tai物wu作zuo內nei標biao,來lai測ce定ding感gan興xing趣qu化hua合he物wu的de百bai分fen回hui收shou率lv,而er不bu必bi遵zun循xun以yi上shang所suo說shuo的de選xuan擇ze原yuan則ze。
內標法的操作
將已知量的內標樣加入標準樣品,製成混合標樣,並配製一係列的已知濃度的工作標樣。混合標樣中標樣與內標樣的摩爾比不變。
注入色譜柱,以(標樣峰麵積/內標樣峰麵積)為響應值。
根據響應值與工作標樣濃度之間存在的線性關係,即W=f×A,製成標準曲線。
將已知量的內標樣加入未知樣品,注入色譜柱,得到欲測組分的響應值。
根據已知的係數f,即可求出欲測組分的濃度。
操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)樣(yang)品(pin)和(he)內(nei)標(biao)是(shi)混(hun)合(he)在(zai)一(yi)起(qi)注(zhu)入(ru)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de),因(yin)此(ci)隻(zhi)要(yao)混(hun)合(he)溶(rong)液(ye)中(zhong)被(bei)測(ce)組(zu)分(fen)與(yu)內(nei)標(biao)的(de)量(liang)的(de)比(bi)值(zhi)恒(heng)定(ding),上(shang)樣(yang)體(ti)積(ji)的(de)變(bian)化(hua)不(bu)會(hui)影(ying)響(xiang)影(ying)響(xiang)定(ding)量(liang)結(jie)果(guo)。內(nei)標(biao)法(fa)抵(di)消(xiao)了(le)上(shang)樣(yang)體(ti)積(ji),乃(nai)至(zhi)流(liu)動(dong)相(xiang)、檢測器的影響,因此比外標法精確。
製作內標標準曲線
zaiyongneibiaofazuosepudingliangfenxishi,xianpeizhiyidingzhongliangbidebeicezufenheneibiaoyangpindehunhewuzuosepufenxi,celiangfengmianji,zuozhongliangbihemianjibideguanxiquxian,ciquxianjiweibiaozhunquxian。zaishijiyangpinfenxishisuocaiyongdeseputiaojianyingjinkenengyuzhizuobiaozhunquxianshisuoyongdetiaojianyizhi,yinci,zaizhizuobiaozhunquxianshi,bujinyaozhumingseputiaojian(如固定相、柱溫、載氣流速等),haiyingzhumingjinyangtijiheneibiaowunongdu。zaizhizuoneibiaobiaozhunquxianshi,gedianbingbuwanquanluozaizhixianshang,cishiyingqiuchumianjibihezhongliangbidebizhiyuqipingjunweidebiaozhunpiancha,zaishiyongguochengzhongyingdingqijinxingdandianxiaozheng,ruosuodezhiyupingjunzhidepianchaxiaoyu2,曲線仍可使用,若大於2,則應重作曲線,如果曲線在鉸短時期內即產生變動,則不宜使用內標法定量。
小結
內(nei)標(biao)法(fa)是(shi)一(yi)種(zhong)間(jian)接(jie)或(huo)相(xiang)對(dui)的(de)校(xiao)準(zhun)方(fang)法(fa)。在(zai)分(fen)析(xi)測(ce)定(ding)樣(yang)品(pin)中(zhong)某(mou)組(zu)分(fen)含(han)量(liang)時(shi),加(jia)入(ru)一(yi)種(zhong)內(nei)標(biao)物(wu)質(zhi)以(yi)校(xiao)準(zhun)和(he)消(xiao)除(chu)出(chu)於(yu)操(cao)作(zuo)條(tiao)件(jian)的(de)波(bo)動(dong)而(er)對(dui)分(fen)析(xi)結(jie)果(guo)產(chan)生(sheng)的(de)影(ying)響(xiang),以(yi)提(ti)高(gao)分(fen)析(xi)結(jie)果(guo)的(de)準(zhun)確(que)度(du)。
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