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有(you)時(shi)候(hou)你(ni)會(hui)發(fa)現(xian)好(hao)像(xiang)你(ni)用(yong)了(le)大(da)部(bu)分(fen)的(de)實(shi)驗(yan)室(shi)經(jing)費(fei)在(zai)不(bu)停(ting)的(de)買(mai)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)。為(wei)什(shen)麼(me)色(se)譜(pu)廠(chang)家(jia)不(bu)能(neng)把(ba)柱(zhu)子(zi)的(de)壽(shou)命(ming)延(yan)長(chang)一(yi)些(xie)呢(ne)？實(shi)際(ji)上(shang)，在(zai)合(he)理(li)的(de)維(wei)護(hu)下(xia)，柱(zhu)子(zi)可(ke)以(yi)成(cheng)為(wei)液(ye)相(xiang)分(fen)析(xi)花(hua)費(fei)裏(li)麵(mian)很(hen)小(xiao)的(de)一(yi)部(bu)分(fen)。舉(ju)一(yi)個(ge)例(li)子(zi)，一(yi)根(gen)典(dian)型(xing)的(de)反(fan)相(xiang)柱(zhu)子(zi)的(de)花(hua)銷(xiao)在(zai)3405-4087元之間， 如果它能進樣500-1000次，那麼每一次進樣的花費是3.4-6.8塊錢。盡管費用會隨著實驗室和特定方法不同而變化，完成一次常規的進樣分析，340塊(kuai)錢(qian)的(de)總(zong)費(fei)用(yong)是(shi)合(he)理(li)的(de)，這(zhe)也(ye)可(ke)由(you)做(zuo)委(wei)托(tuo)檢(jian)測(ce)業(ye)務(wu)的(de)第(di)三(san)方(fang)實(shi)驗(yan)室(shi)對(dui)類(lei)似(si)分(fen)析(xi)的(de)定(ding)價(jia)所(suo)確(que)認(ren)。因(yin)此(ci)，我(wo)們(men)上(shang)麵(mian)談(tan)到(dao)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)花(hua)費(fei)在(zai)總(zong)分(fen)析(xi)成(cheng)本(ben)中(zhong)隻(zhi)占(zhan)1-2%，我(wo)們(men)想(xiang)方(fang)設(she)法(fa)使(shi)柱(zhu)子(zi)的(de)壽(shou)命(ming)延(yan)長(chang)一(yi)倍(bei)，即(ji)使(shi)單(dan)根(gen)柱(zhu)子(zi)的(de)成(cheng)本(ben)還(hai)是(shi)很(hen)高(gao)，實(shi)際(ji)上(shang)這(zhe)樣(yang)做(zuo)並(bing)不(bu)能(neng)在(zai)整(zheng)個(ge)分(fen)析(xi)成(cheng)本(ben)上(shang)降(jiang)低(di)很(hen)多(duo)。個(ge)人(ren)的(de)感(gan)覺(jiao)是(shi)如(ru)果(guo)你(ni)用(yong)一(yi)根(gen)柱(zhu)子(zi)進(jin)了(le)500針，那這樣就已經很劃算了。
什麼是合理的期望值？首先，先看一下其他幾個色譜學家的經驗。Ron Majors，在他的“色譜柱觀察”專欄的某期連載文章中，已經包含了針對色譜各個方麵的用戶調查結果。他有關色譜柱壽命的大部分專欄文章是在2012年發表的，將作為我們目前討論的基礎。圖1是基於Ron Majors 2011年用戶調查數據的餅型圖。可以看到有回應的調查對象中接近四分之三的進樣壽命在500針以上，而且有近二分之一達到了至少 1000次ci的de進jin樣yang壽shou命ming。這zhe個ge結jie果guo對dui我wo來lai說shuo是shi非fei常chang吃chi驚jing的de，因yin為wei它ta包bao含han了le對dui所suo有you類lei型xing的de色se譜pu柱zhu的de壽shou命ming調tiao查zha，不bu僅jin僅jin是shi現xian代dai液ye相xiang中zhong的de最zui吃chi苦ku耐nai勞lao的de用yong得de最zui多duo的de主zhu力li色se譜pu柱zhu，4.6×150mm，5μm反相柱，相對於其它種類色譜柱，它甚至有點刀槍不入的味道。圖1 分析柱的典型進樣次數。數據基於2011 年調查為了看清隨著時間變化情況改變的情形，我做了一個1997年到2011年四個調查結果的比較圖，見圖2。可以看到有幾個明顯的趨勢。第一，我注意到灰柱，灰柱代表的是在柱子損壞之前進樣小於1000次的百分比，從1997年的76%跌倒了2011年的53%；同時有明顯對比的是代表能進樣1000以上的黃柱高度增加很快。在上麵我有提到我把進樣500次作為柱子使用壽命的一個平衡點，我們可以發現在柱子壞之前進樣次數達不到500次的用戶的數量明顯下降，從1997年的接近一半到2011的四分之一。圖2 在LC柱子損壞之前進樣次數的比較最後我們可看到，有著可怕經曆的用戶的數量，即那些隻能做到100或者更少的進樣次數的用戶，比例基本上沒有改變，徘徊在10%附(fu)近(jin)。找(zhao)出(chu)這(zhe)種(zhong)改(gai)變(bian)的(de)原(yuan)因(yin)隻(zhi)能(neng)是(shi)出(chu)於(yu)推(tui)測(ce)，但(dan)是(shi)我(wo)很(hen)樂(le)意(yi)做(zuo)此(ci)推(tui)斷(duan)。我(wo)不(bu)認(ren)為(wei)柱(zhu)子(zi)壽(shou)命(ming)有(you)明(ming)顯(xian)的(de)提(ti)升(sheng)是(shi)因(yin)為(wei)柱(zhu)子(zi)工(gong)藝(yi)的(de)改(gai)進(jin)。不(bu)可(ke)否(fou)認(ren)，在(zai)某(mou)個(ge)時(shi)期(qi)，柱(zhu)子(zi)塌(ta)陷(xian)，或(huo)者(zhe)是(shi)柱(zhu)床(chuang)中(zhong)有(you)空(kong)腔(qiang)形(xing)成(cheng)的(de)情(qing)況(kuang)非(fei)常(chang)普(pu)遍(bian)，但(dan)是(shi)在(zai)1997年(nian)開(kai)展(zhan)調(tiao)查(zha)的(de)時(shi)間(jian)段(duan)，裝(zhuang)柱(zhu)工(gong)藝(yi)就(jiu)已(yi)經(jing)非(fei)常(chang)成(cheng)熟(shu)了(le)，由(you)於(yu)裝(zhuang)柱(zhu)工(gong)藝(yi)導(dao)致(zhi)柱(zhu)子(zi)損(sun)壞(huai)的(de)情(qing)況(kuang)很(hen)少(shao)見(jian)。我(wo)認(ren)為(wei)柱(zhu)子(zi)壽(shou)命(ming)延(yan)長(chang)的(de)主(zhu)要(yao)原(yuan)因(yin)是(shi)用(yong)戶(hu)受(shou)到(dao)更(geng)好(hao)的(de)培(pei)訓(xun)，從(cong)而(er)對(dui)樣(yang)品(pin)前(qian)處(chu)理(li)和(he)柱(zhu)子(zi)的(de)物(wu)理(li)保(bao)護(hu)更(geng)好(hao)了(le)。柱(zhu)子(zi)的(de)保(bao)護(hu)方(fang)法(fa)就(jiu)是(shi)我(wo)想(xiang)在(zai)下(xia)文(wen)著(zhe)重(zhong)說(shuo)明(ming)的(de)。我(wo)同(tong)時(shi)也(ye)推(tui)斷(duan)，進(jin)樣(yang)次(ci)數(shu)很(hen)穩(wen)定(ding)的(de)小(xiao)於(yu)100，與其說是柱子本身的原因，還不如說是實驗室操作存在問題，或者說是某些應用方法本身就是“柱子終結者”。
不要未處理樣品就進樣在我的LCketangzhong，wojingchangkaiwanxiaodeshuo，yanchangzhuzishoumingdezuihaofangfashibuyaodakaisepuzhudehezi。yidannikaishijinyang，jiukaishilezhuzizouxiangmiewangdedaolu。yangpinyoulianggezhuyaofangmiankeyiyingxiangsepuzhu―化學性質和物理性質。我們把樣品中不要的化學汙染物和微型顆粒清除的越好，柱子的壽命就越長。使用SPE(Solide-Phase extraction)，液液萃取和其他技術來除去化學汙染物是LCGC中“Sample Prep Perspectives”專(zhuan)欄(lan)常(chang)有(you)這(zhe)樣(yang)的(de)文(wen)章(zhang)，我(wo)就(jiu)不(bu)在(zai)這(zhe)裏(li)多(duo)說(shuo)了(le)。一(yi)言(yan)以(yi)蔽(bi)之(zhi)，越(yue)多(duo)的(de)樣(yang)品(pin)前(qian)處(chu)理(li)，越(yue)少(shao)的(de)化(hua)學(xue)汙(wu)染(ran)物(wu)進(jin)入(ru)色(se)譜(pu)柱(zhu)，柱(zhu)子(zi)壽(shou)命(ming)就(jiu)越(yue)長(chang)。你(ni)還(hai)得(de)平(ping)衡(heng)一(yi)下(xia)樣(yang)品(pin)前(qian)處(chu)理(li)費(fei)用(yong)和(he)它(ta)帶(dai)來(lai)的(de)好(hao)處(chu)。比(bi)如(ru)，你(ni)買(mai)了(le)柱(zhu)芯(xin)和(he)試(shi)劑(ji)，並(bing)加(jia)上(shang)你(ni)投(tou)入(ru)時(shi)間(jian)的(de)費(fei)用(yong)，你(ni)在(zai)每(mei)個(ge)樣(yang)品(pin)上(shang)SPE的花費會很容易超過34塊錢，這是可以承受500次進樣量的反相柱在每個樣品分析上分攤成本的5倍多，這差不多需要將色譜柱進樣次數從500次延長至2500次才扯平了。另一方麵，如果沒有做過任何處理的血漿樣品直接進樣了，柱子可能就隻能進樣10cizuoyou。niyeyaokaolvdaodanggengduodeyangpinchulibuzhoujiarudeshihoudeshujuzhiliang。wozhidao，zaiwomendeshiyanshizhong，zhexiecuoshikeyirangwomenzaidinongdudeshihoushoujidaoyouyongdeshujubingdedaoyizhidejieguo，erbushibijiaoshaodeqianchulibuzhoukenengdedaodejieguo。bulunnizuomeizuoqitaqianchulibuzhou，jihusuoyoudeyangpindouhuicongyangpinguolv，lixinhuozheliangzhezhongdedaohaochu。yangpinjingguoyigeyicixingdeguolvmoguolvlaiyichukenengduzhuzhuzijinkoushaibandexikeliwu。lvmodekongjingbunengdayuzhuzijinkoushaibandekongjing。dabufen>3μm填料顆粒的柱子用2μm孔徑的篩板，3μm填料粒徑的柱子則一般用0.5μm的篩板，填料粒徑<3-μm的柱子，比如UHPLC，一般用0.2μm的進口篩板。最常用的樣品過濾膜是0.45μm孔徑的，這個對除了亞2μm之外的其它柱子都已經足夠，亞2μm柱子，則需用0.2μm的濾膜。濾膜可作為預裝在一次性注射器中的柱芯，也作為96孔板的過濾板。即使這些過濾裝置一般是有效的，但我不是非常強烈的推薦使用。至少有4點使我不同意過濾樣品。第一，樣品過濾成本比較昂貴，上一次我比較過價格，一次性購買1000份，每份的價格都要高於3.4元，這個與柱子在每次分析中的分攤費用幾乎一樣。
第二，用0.5μm濾膜過濾很慢，而0.2μm濾膜則更慢。
disan，ruguonizaiyigejianguanyangedehuanjingzhonggongzuo，meiyigeyangpindechulibuzhoudoubixuyiyang，zhejiushishuo，ruguoniguolvleyigeyangpin，nameqitashengyudeyangpinyedouyaoguolv，wulunshijishangxubuxuyao。
最後，如果你要驗證你的LC方法，就需要驗證所有的過濾步驟。在過濾的過程中，樣品會有損失――如果50μL樣品經過濾膜，得到的樣品就少於50μL。nidezhengmingyangpinbushixuanzexingdesunshi，tebieshizaigaonongduhuozhedinongdudeshihou。yinci，womenkeyikandao，yangpinguolvshixuyaohuahenduogongfuhejinqiande。danshiniyaoshibupamafanhebuyaoqiuchengben，yangpinguolvshizaidabufendeqingkuangxiadoushinengtigaozhuzideshoumingde。yangpinguolvdeyigetidaifangfa（或者是補充）是在進樣之前離心。這是一個簡單又相對便宜的方法。隻要把樣品放進離心管，Eppendorf 離心管或者一個96孔的離心板，再放到小型台式離心機裏，調整轉速到其最大速度，旋轉5-10min。zhehuishihuiyinqishaibandusaidekelichenjidaoyangpinpingdedibu，ranhoubayangpinzhuanyidaojinyangpinghuobanzhongjixujinxingfenxi。zhezhongjishuwomenzaishiyanshizhongduixuyaochendiandanbaizhideyangpinzhongyijingshiyonglehenduonian，erqiejishaochuxiankeliwuzhixiangguandewenti。wozengjingjianguozheyangdelizi，yong0.2μm的濾膜過濾之後的樣品，UHPLC進樣，這種樣品還是有一點渾濁並且引起了柱子堵塞，但是這個些微渾濁的樣品離心至澄清之後，柱子堵塞的情況就會減少很多。
使用在線過濾器我非常認同一個在線的過濾器是LC或者UHPLCzhongshiyongchengbenzuididefujiazhuangzhi，keyitigongzuidadetouzihuibao。zhezhongguolvqishiyigefeichangjiandandegaizhuangguanpeijian，qizhongbaohanleyigetedingkongjingdeshaiban，anzhuangzaizidongjinyangqihezhuzi（保護柱，如果用到的話）之間。現在最普遍的裝置是一個直徑接近37.5px，長度62.5px不鏽鋼配件，其中包含一個0.5或者0.2μm孔徑的可替換的篩板。另外一種裝置是包含相同孔徑大小篩板的PEEK手緊配件。這種PEEK過guo濾lv器qi整zheng體ti是shi一yi次ci性xing的de，但dan是shi因yin為wei它ta比bi不bu鏽xiu鋼gang過guo濾lv器qi中zhong的de一yi次ci性xing使shi用yong的de篩shai板ban要yao貴gui，使shi用yong成cheng本ben會hui比bi較jiao昂ang貴gui。這zhe種zhong在zai線xian過guo濾lv器qi孔kong徑jing會hui選xuan擇ze比bi柱zhu子zi篩shai板ban孔kong徑jing小xiao一yi點dian，因yin此ci它ta會hui在zai柱zhu子zi堵du塞sai之zhi前qian先xian被bei堵du塞sai。當dang係xi統tong壓ya力li開kai始shi增zeng加jia的de時shi候hou，你ni就jiu知zhi道dao在zai線xian過guo濾lv器qi中zhong篩shai板ban已yi經jing開kai始shi堵du了le，需xu要yao在zai完wan全quan堵du住zhu之zhi前qian替ti換huan掉diao。在zai線xian過guo濾lv器qi可ke以yi起qi到dao單dan獨du的de樣yang品pin過guo濾lv器qi一yi樣yang的de功gong能neng，但dan在zai樣yang品pin前qian處chu理li時shi，不bu需xu要yao額e外wai的de人ren力li工gong作zuo。如ru果guo你ni樣yang品pin離li心xin了le，偶ou爾er有you一yi些xie顆ke粒li沒mei有you過guo濾lv掉diao，也ye會hui被bei下xia遊you的de在zai線xian過guo濾lv器qi攔lan截jie住zhu。在zai線xian過guo濾lv器qi的de另ling一yi優you點dian是shi它ta能neng夠gou很hen便bian捷jie的de更geng換huan――如果你動手能力強，在5min內你可以關掉泵、替換篩板、打da開kai係xi統tong並bing繼ji續xu實shi驗yan。你ni可ke能neng想xiang要yao重zhong新xin進jin一yi針zhen係xi統tong適shi應ying性xing樣yang品pin來lai檢jian查zha一yi下xia係xi統tong有you沒mei有you出chu問wen題ti，使shi用yong在zai線xian過guo濾lv器qi不bu需xu要yao大da量liang的de調tiao節jie和he校xiao準zhun，而er這zhe些xie在zai更geng換huan保bao護hu柱zhu時shi都dou需xu要yao重zhong新xin做zuo過guo。在zai線xian過guo濾lv器qi的de最zui後hou一yi個ge好hao處chu是shi可ke以yi過guo濾lv掉diao泵beng密mi封feng件jian和he進jin樣yang閥fa因yin磨mo損sun產chan生sheng的de顆ke粒li物wu。我wo強qiang烈lie建jian議yi在zai每mei一yi個geLC係統中都安裝一個在線過濾器，即使你已經在使用保護柱了。
保護柱保護柱（也叫做預柱）是一種很短的裝在分析柱上遊的色譜柱。這種柱子長度一般為10-20mm，包(bao)含(han)與(yu)分(fen)析(xi)柱(zhu)一(yi)樣(yang)的(de)填(tian)料(liao)，使(shi)用(yong)不(bu)大(da)於(yu)分(fen)析(xi)柱(zhu)篩(shai)板(ban)孔(kong)徑(jing)的(de)入(ru)口(kou)篩(shai)板(ban)和(he)出(chu)口(kou)篩(shai)板(ban)。保(bao)護(hu)柱(zhu)有(you)雙(shuang)重(zhong)功(gong)能(neng)，第(di)一(yi)，入(ru)口(kou)篩(shai)板(ban)攔(lan)截(jie)可(ke)能(neng)堵(du)塞(sai)分(fen)析(xi)柱(zhu)的(de)顆(ke)粒(li)物(wu)，第(di)二(er)，填(tian)料(liao)與(yu)分(fen)析(xi)柱(zhu)相(xiang)同(tong)，它(ta)可(ke)以(yi)捕(bu)抓(zhua)住(zhu)那(na)些(xie)可(ke)能(neng)會(hui)強(qiang)烈(lie)或(huo)者(zhe)不(bu)可(ke)逆(ni)附(fu)著(zhe)在(zai)分(fen)析(xi)柱(zhu)填(tian)料(liao)上(shang)的(de)物(wu)質(zhi)。總(zong)所(suo)周(zhou)知(zhi)，保(bao)護(hu)柱(zhu)會(hui)延(yan)長(chang)分(fen)析(xi)柱(zhu)的(de)壽(shou)命(ming)，然(ran)而(er)，保(bao)護(hu)柱(zhu)有(you)幾(ji)個(ge)潛(qian)在(zai)的(de)問(wen)題(ti)。第(di)一(yi)，他(ta)們(men)比(bi)較(jiao)貴(gui)――價格高出分析柱的40%甚至更多，考慮到增加的成本時，你柱子的壽命是否有足夠的延長？
第(di)二(er)，保(bao)護(hu)柱(zhu)到(dao)底(di)能(neng)持(chi)續(xu)多(duo)長(chang)時(shi)間(jian)？你(ni)得(de)知(zhi)道(dao)更(geng)換(huan)柱(zhu)子(zi)的(de)時(shi)間(jian)，在(zai)保(bao)護(hu)柱(zhu)上(shang)的(de)化(hua)學(xue)汙(wu)染(ran)物(wu)積(ji)累(lei)太(tai)多(duo)之(zhi)前(qian)，就(jiu)要(yao)想(xiang)辦(ban)法(fa)避(bi)免(mian)汙(wu)染(ran)物(wu)進(jin)入(ru)到(dao)分(fen)析(xi)柱(zhu)中(zhong)。因(yin)此(ci)，需(xu)要(yao)對(dui)進(jin)樣(yang)次(ci)數(shu)計(ji)數(shu)或(huo)者(zhe)做(zuo)一(yi)個(ge)係(xi)統(tong)適(shi)應(ying)性(xing)實(shi)驗(yan)來(lai)決(jue)定(ding)什(shen)麼(me)時(shi)候(hou)更(geng)換(huan)保(bao)護(hu)柱(zhu)。
第三，你要判斷怎麼來清洗保護柱。為了防止把汙染物衝洗到分析柱中，保護柱和分析柱需要分開來清洗嗎？
最後，你可能期望將一個20mm長的保護柱加裝到150mm長的分析柱上，使柱效提高10%，danshizhezhongqingkuanghenshaochuxian。yuanyinshijieruyigenbaohuzhuhou，xitongguanluzhonghuizengjialianggezhutoulianjiejianheyiduanguanlu，erqiebaohuzhumeiyoufenxizhuzhuangzhunamerongyianzhuang，yishanglianggefangmiandouhuijiangdixitongxingneng。jieguojiushiruguoniyunqihaodehua，nihuidedaoyiyangdeliluntabanshu，danchangjiandeqingkuangshizhuxiaohuishaoyoujiangdi。yaobuyaoyongbaohuzhudexuanzequanzaini。baohuzhuqueshinengyanchangfenxizhudeshouming，danshiwogerenrenweizaidaduoshuqingkuangxia，zhebingbuzhide。ruguonixuanzeshiyongbaohuzhu，wohaishituijianzaizidongjinyangqihebaohuzhuzhijianlianjieshiyongyigezaixianguolvqi。guolvqideqianzhiyoubaohuzhudelingtou，tahainengyanchangbaohuzhudeshiyongshouming，jiuxiangtanengyanchangfenxizhushoumingyiyang。
總結盡管你不能讓你的分析柱壽命無限延長，但還是能用一些非常簡單的方法來延長色譜柱這個係統中比較昂貴部件的壽命。
首(shou)先(xian)，按(an)照(zhao)要(yao)求(qiu)對(dui)樣(yang)品(pin)進(jin)行(xing)前(qian)處(chu)理(li)。樣(yang)品(pin)前(qian)處(chu)理(li)的(de)最(zui)後(hou)一(yi)步(bu)必(bi)須(xu)是(shi)過(guo)濾(lv)或(huo)者(zhe)離(li)心(xin)。其(qi)次(ci)，使(shi)用(yong)在(zai)線(xian)過(guo)濾(lv)器(qi)來(lai)保(bao)護(hu)保(bao)護(hu)柱(zhu)和(he)分(fen)析(xi)柱(zhu)，免(mian)於(yu)被(bei)樣(yang)品(pin)中(zhong)或(huo)者(zhe)係(xi)統(tong)其(qi)它(ta)部(bu)分(fen)產(chan)生(sheng)的(de)顆(ke)粒(li)物(wu)堵(du)塞(sai)。再(zai)次(ci)，如(ru)果(guo)保(bao)護(hu)柱(zhu)對(dui)你(ni)的(de)應(ying)用(yong)有(you)意(yi)義(yi)的(de)話(hua)，則(ze)使(shi)用(yong)保(bao)護(hu)柱(zhu)來(lai)保(bao)護(hu)分(fen)析(xi)柱(zhu)。最(zui)後(hou)，在(zai)每(mei)批(pi)樣(yang)品(pin)分(fen)析(xi)之(zhi)後(hou)，使(shi)用(yong)強(qiang)溶(rong)劑(ji)來(lai)衝(chong)洗(xi)柱(zhu)子(zi)，除(chu)去(qu)在(zai)柱(zhu)子(zi)上(shang)的(de)任(ren)何(he)強(qiang)保(bao)留(liu)物(wu)質(zhi)。此(ci)文(wen)章(zhang)主(zhu)要(yao)是(shi)針(zhen)對(dui)柱(zhu)子(zi)汙(wu)染(ran)問(wen)題(ti)，但(dan)色(se)譜(pu)柱(zhu)壽(shou)命(ming)也(ye)取(qu)決(jue)於(yu)檢(jian)測(ce)品(pin)種(zhong)的(de)方(fang)法(fa)耐(nai)用(yong)性(xing)，如(ru)果(guo)是(shi)難(nan)度(du)很(hen)大(da)的(de)項(xiang)目(mu)， 譬如化學藥品有多個有關物質測定，或中藥的指紋譜圖，往往方法耐用性 （robustness）較差，柱子壽命也會受到影響。挑選不同選擇性的色譜柱來改善分離度是提高方法耐用性的最佳選擇。
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