微生物實驗室最少不了的實驗儀器之一就是滅菌器,一般實驗室常用的是高壓蒸汽滅菌器。GB 4789.1-2016中要求:實驗設備應定期進行檢查和/或檢定(加貼標誌)、weihuhebaoyang,yiquebaogongzuoxingnenghecaozuoanquan。dannidemiejunqiyoumeiyouleisidejianzhane?ruguoyaozuoleisideyanzheng,youxuyaozenmezuone?jintianjiugeidajiahuizongyixiagaoyazhengqimiejunqimiejunxiaoguoyanzhengdexiangguanneirong。
高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證一般有化學指示劑法、留點溫度計法、zizhicewenguanfaheshengwuzhishijifa,meizhongfangfadeyuanlidoushixiangside,zhuyaoshitongguoyanzhengmiejunshimiejunqilidewendunengfoudadaoyaoqiu。womenkeyigenjuzijishiyanshidejutiqingkuangxuanzeqizhongyizhonghuoduozhongfangfajinxingyanzheng。
一、化學指示劑法原理:化學指示劑在一定溫度與作用時間下,會受熱變色或變形,根據這一特點來判斷是否達到需要的滅菌參數。一般實驗室常用的是3M壓(ya)力(li)滅(mie)菌(jun)指(zhi)示(shi)膠(jiao)帶(dai),這(zhe)種(zhong)指(zhi)示(shi)膠(jiao)帶(dai)是(shi)利(li)用(yong)滅(mie)菌(jun)前(qian)後(hou)膠(jiao)帶(dai)顏(yan)色(se)變(bian)化(hua)來(lai)判(pan)斷(duan)滅(mie)菌(jun)效(xiao)果(guo)。它(ta)是(shi)由(you)熱(re)敏(min)化(hua)學(xue)物(wu)質(zhi)與(yu)顯(xian)色(se)劑(ji)及(ji)漆(qi)輔(fu)料(liao)製(zhi)成(cheng)油(you)墨(mo),並(bing)將(jiang)油(you)墨(mo)以(yi)條(tiao)紋(wen)狀(zhuang)印(yin)製(zhi)在(zai)特(te)製(zhi)的(de)一(yi)麵(mian)膠(jiao)紙(zhi)帶(dai)製(zhi)成(cheng)。指(zhi)示(shi)膠(jiao)帶(dai)可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)粘(zhan)貼(tie)於(yu)包(bao)裹(guo)外(wai),長(chang)度(du)不(bu)低(di)於(yu)5cm,並輕壓膠帶以增加粘性和封包效果;在121℃持續20min或130℃持續4min後,膠帶上印有的斜行的白色指示線條會完全變黑,成為黑色線條;如變色不均勻或不徹底,可認為該包裹不符合滅菌條件。
二、留點溫度計法原理:liudianwendujifashiliyongshuiyinwendujibuhuiliudetexing,qiyuanligenchuantongtiwenjixiangsi,keyizhishimiejunqizaimiejunguochengzhongdadaodezuigaowendu。yanzhengshibashuiyinwendujifangzaishengshuidedasanjiaopingli,miejunshibasanjiaopingfangzaimiejunqideshangbuhexiabu,miejunjieshuhoukanshuiyinwendujidewenduheyaoqiuwendushifouyizhi。cifazhinengyanzhengwendu,bunengzhishimiejunshijianshifoudadaoyaoqiu,yincishimiejunqiyanzhengdezuidibiaozhun。
三、自製測溫管法原理:利li用yong一yi些xie化hua學xue藥yao品pin受shou熱re熔rong化hua後hou再zai冷leng卻que,晶jing體ti的de外wai形xing不bu同tong的de特te性xing,把ba化hua學xue藥yao品pin密mi封feng在zai小xiao玻bo璃li管guan內nei,滅mie菌jun時shi放fang在zai滅mie菌jun器qi裏li,滅mie菌jun完wan後hou觀guan察cha晶jing體ti的de形xing狀zhuang,就jiu可ke以yi判pan斷duan溫wen度du是shi否fou達da標biao。常chang用yong的de試shi劑ji是shi苯ben甲jia酸suan,苯ben甲jia酸suan的de熔rong點dian為wei121-123℃,跟gen我wo們men要yao求qiu的de滅mie菌jun器qi的de滅mie菌jun溫wen度du基ji本ben吻wen合he,因yin此ci滅mie菌jun時shi把ba固gu體ti苯ben甲jia酸suan密mi封feng在zai小xiao玻bo璃li管guan內nei放fang進jin滅mie菌jun器qi,滅mie菌jun結jie束shu就jiu可ke以yi觀guan察cha苯ben甲jia酸suan的de狀zhuang態tai來lai驗yan證zheng滅mie菌jun器qi是shi否fou達da到dao了le要yao求qiu溫wen度du。這zhe種zhong方fang法fa的de局ju限xian跟gen留liu點dian溫wen度du計ji法fa相xiang同tong,也ye隻zhi能neng指zhi示shi滅mie菌jun時shi的de溫wen度du,對dui滅mie菌jun時shi間jian是shi否fou達da到dao要yao求qiu無wu法fa判pan斷duan。
四、生物指示劑法原理:利(li)用(yong)非(fei)致(zhi)病(bing)性(xing)的(de)嗜(shi)熱(re)脂(zhi)肪(fang)杆(gan)菌(jun)的(de)芽(ya)孢(bao)作(zuo)為(wei)指(zhi)示(shi)菌(jun),來(lai)測(ce)定(ding)熱(re)力(li)滅(mie)菌(jun)的(de)效(xiao)果(guo)。嗜(shi)熱(re)脂(zhi)肪(fang)杆(gan)菌(jun)的(de)芽(ya)孢(bao)對(dui)熱(re)的(de)抗(kang)性(xing)較(jiao)強(qiang),其(qi)耐(nai)熱(re)能(neng)力(li)與(yu)病(bing)原(yuan)微(wei)生(sheng)物(wu)肉(rou)毒(du)梭(suo)菌(jun)芽(ya)孢(bao)相(xiang)似(si),以(yi)此(ci)為(wei)指(zhi)示(shi)菌(jun),驗(yan)證(zheng)滅(mie)菌(jun)器(qi)能(neng)否(fou)達(da)到(dao)滅(mie)菌(jun)要(yao)求(qiu)。生(sheng)物(wu)指(zhi)示(shi)劑(ji)分(fen)為(wei)三(san)種(zhong):芽孢懸液、芽胞菌片、菌片和培養基混合指示管。一般放在滅菌容器的5個點:下層的前、中、後和上層、中層的中央點。滅菌後取指示劑接種到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白腖水中,55-60℃培養2-7天,若培養基澄清、顏色沒有變化即說明芽孢被殺死,滅菌器滅菌效果良好;如(ru)果(guo)培(pei)養(yang)基(ji)黃(huang)色(se)渾(hun)濁(zhuo),說(shuo)明(ming)芽(ya)孢(bao)未(wei)被(bei)殺(sha)滅(mie),滅(mie)菌(jun)器(qi)滅(mie)菌(jun)效(xiao)果(guo)不(bu)合(he)格(ge)。芽(ya)孢(bao)懸(xuan)液(ye)和(he)芽(ya)孢(bao)菌(jun)片(pian)的(de)驗(yan)證(zheng)方(fang)法(fa)均(jun)是(shi)如(ru)此(ci)。目(mu)前(qian)實(shi)驗(yan)室(shi)還(hai)常(chang)用(yong)商(shang)品(pin)化(hua)的(de)生(sheng)物(wu)指(zhi)示(shi)管(guan),其(qi)原(yuan)理(li)與(yu)芽(ya)孢(bao)懸(xuan)液(ye)和(he)芽(ya)胞(bao)菌(jun)片(pian)相(xiang)同(tong),指(zhi)示(shi)管(guan)中(zhong)有(you)嗜(shi)熱(re)脂(zhi)肪(fang)芽(ya)孢(bao)杆(gan)菌(jun)芽(ya)孢(bao)和(he)培(pei)養(yang)液(ye)玻(bo)璃(li)小(xiao)管(guan),將(jiang)指(zhi)示(shi)管(guan)放(fang)在(zai)滅(mie)菌(jun)容(rong)器(qi)內(nei)的(de)各(ge)個(ge)點(dian)上(shang),高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)後(hou),將(jiang)管(guan)中(zhong)盛(sheng)培(pei)養(yang)液(ye)的(de)玻(bo)璃(li)管(guan)擠(ji)碎(sui),培(pei)養(yang)液(ye)從(cong)內(nei)部(bu)的(de)小(xiao)管(guan)中(zhong)被(bei)放(fang)出(chu),放(fang)入(ru)56℃培養箱中培養,同時做陽性對照。若是滅菌器滅菌效果不合格,指示管內的芽孢複活後生長會改變肉湯的顏色是肉湯變為黃色;ruoshimiejunqimiejunxiaoguolianghaozeguanneiyabaobeimiehuobuzaishengchang,routangrengjiushiyuanlaidezise。duiyumiejunqidexiaoguoyanzheng,muqianbingmeiyouxiangguanbiaozhunyangedeyaoqiuyanzhengdepinci,danshishiyanshiyingdangzixingzhidingyanzhengpinciguiding,bingyangeanzhaoyaoqiujinxing。congcaozuoxingheyanzhengjielunlianggefangmianchufa,xiaobiantuijianshiyongzhishijiaodaiheshengwuzhishiguan,yinweizheliangzhongfangfacaozuojiandan,keyiduimiejunxiaoguojinxingquanmiandeyanzheng。
附:滅菌時的注意事項(一些進口的全自動滅菌鍋可不用考慮排氣)shiyonggaoyazhengqimiejunqishi,shouxianyingzhuyizaikaifangzhengqidetongshi,paichumiejunqineidelengkongqi。bixujiangqineilengkongqiquanbupaichuhou,caikeguanbipaiqikong。jiarumiejunqineirengcunliuyoubufenkongqishi,zeyalibiaoshangsuiyidadaolemouyiyalizhi,danqineizhiwendurengweidadaoxiangyingzhidushu。cunliudekongqiyueduo,zeerzhexiangchayeyueda,qineiwendubuzu,miejunzebuchedi。(很多人在做發酵法培養基滅菌時會出現小導管中有氣泡,不妨也可以嚐試多排出滅菌器內的冷空氣,有奇效哦)。
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