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液相色譜儀於多數檢測人來說是很好上手的儀器，但是就算是用過幾年、經驗豐富的分析員也會習慣於一些錯誤的操作，導致挺貴的機器沒用幾次就壞了。
簡(jian)化(hua)分(fen)析(xi)過(guo)程(cheng)固(gu)然(ran)重(zhong)要(yao)，但(dan)是(shi)為(wei)了(le)省(sheng)時(shi)間(jian)而(er)忽(hu)略(lve)了(le)一(yi)些(xie)必(bi)不(bu)可(ke)少(shao)的(de)步(bu)驟(zhou)，損(sun)壞(huai)了(le)儀(yi)器(qi)就(jiu)得(de)不(bu)償(chang)失(shi)了(le)。做(zuo)分(fen)析(xi)試(shi)驗(yan)時(shi)哪(na)些(xie)操(cao)作(zuo)不(bu)能(neng)做(zuo)？哪(na)些(xie)懶(lan)不(bu)能(neng)偷(tou)！
流動相不過濾
因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。
使用後不及時清洗泵
liudongxiangbuyinghanyourenhefushixingwuzhi，hanyouhuanchongyedeliudongxiangbuyingbaoliuzaibengnei，youqishizaitingbengguoyehuogengchangshijiandeqingkuangxia。ruguojianghanhuanchongyedeliudongxiangliuzaibengnei，youyuzhengfahuoxielou，shenzhizhishiyouyurongyedejingzhi，jiukenengxichuyandeweixijingti，zhexiejingtijiangheshangshugutiweiliyiyangsunhuaimifenghuanhezhusaideng。
因此，必須泵入純水將泵充分清洗後，再換成適合於色譜柱保存和有利於泵維護的溶劑（對於反相鍵合矽膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。
流動相走空
泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完，否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環，最終產生漏液。
沒有流動相流出，又無壓力指示怎麼辦？
可能是泵內有大量氣體，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環磨損，需更換。
壓力和流量不穩了？
原因可能是氣泡，需要排除；或(huo)者(zhe)是(shi)單(dan)向(xiang)閥(fa)內(nei)有(you)異(yi)物(wu)，可(ke)卸(xie)下(xia)單(dan)向(xiang)閥(fa)，浸(jin)入(ru)丙(bing)酮(tong)內(nei)超(chao)聲(sheng)清(qing)洗(xi)。有(you)時(shi)可(ke)能(neng)是(shi)砂(sha)濾(lv)棒(bang)內(nei)有(you)氣(qi)泡(pao)，或(huo)被(bei)鹽(yan)的(de)微(wei)細(xi)晶(jing)粒(li)或(huo)滋(zi)生(sheng)的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)部(bu)分(fen)堵(du)塞(sai)，這(zhe)時(shi)，可(ke)卸(xie)下(xia)砂(sha)濾(lv)棒(bang)浸(jin)入(ru)流(liu)動(dong)相(xiang)內(nei)超(chao)聲(sheng)除(chu)氣(qi)泡(pao)，或(huo)將(jiang)砂(sha)濾(lv)棒(bang)浸(jin)入(ru)稀(xi)酸(suan)（如4mol/L硝酸）內迅速除去微生物，或將鹽溶解，再立即清洗。
壓力為啥過高或過低？
可ke能neng是shi是shi管guan路lu被bei堵du塞sai，需xu要yao清qing除chu和he清qing洗xi。壓ya力li降jiang低di的de原yuan因yin則ze可ke能neng是shi管guan路lu有you泄xie漏lou。檢jian查zha堵du塞sai或huo泄xie漏lou時shi應ying逐zhu段duan進jin行xing。在zai進jin行xing梯ti度du洗xi脫tuo時shi，由you於yu多duo種zhong溶rong劑ji混hun合he，而er且qie組zu成cheng不bu斷duan變bian化hua，因yin此ci帶dai來lai一yi些xie特te殊shu問wen題ti，必bi須xu充chong分fen重zhong視shi：
PS：（在zai液ye相xiang色se譜pu中zhong對dui組zu分fen複fu雜za的de樣yang品pin采cai用yong梯ti度du洗xi脫tuo的de方fang法fa。在zai同tong一yi個ge分fen析xi周zhou期qi中zhong，按an一yi定ding程cheng序xu不bu斷duan改gai變bian流liu動dong相xiang的de濃nong度du配pei比bi，稱cheng為wei梯ti度du洗xi脫tuo。從cong而er可ke以yi使shi一yi個ge複fu雜za樣yang品pin中zhong的de性xing質zhi差cha異yi較jiao大da的de組zu分fen能neng按an各ge自zi適shi宜yi的de容rong量liang因yin子zik達到良好的分離目的。梯度洗脫的優點：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。）
梯度洗脫的流動相選擇不當
要yao注zhu意yi溶rong劑ji的de互hu溶rong性xing，不bu相xiang混hun溶rong的de溶rong劑ji不bu能neng用yong作zuo梯ti度du洗xi脫tuo的de流liu動dong相xiang。有you些xie溶rong劑ji在zai一yi定ding比bi例li內nei混hun溶rong，超chao出chu範fan圍wei後hou就jiu不bu互hu溶rong，使shi用yong時shi更geng要yao引yin起qi注zhu意yi。
當有機溶劑和緩衝液混合時，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。
忽略的空白梯度洗脫
tiduxituosuoyongderongjichunduyaoqiugenggao，yibaozhenglianghaodezhongxianxing。jinxingyangpinfenxiqianbixujinxingkongbaitiduxituo，yibianrenrongjizazhifeng，yinweiruorongjizhongdezazhifujizaisepuzhutouhouhuibeiqiangrongjixituoxialai。yongyutiduxituoderongjixuchedituoqi，yifangzhihunheshichanshengqipao。
忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化
混hun合he溶rong劑ji的de粘zhan度du常chang隨sui組zu成cheng而er變bian化hua，因yin而er在zai梯ti度du洗xi脫tuo時shi常chang出chu現xian壓ya力li的de變bian化hua。例li如ru甲jia醇chun和he水shui粘zhan度du都dou較jiao小xiao，當dang二er者zhe以yi相xiang近jin比bi例li混hun合he時shi粘zhan度du增zeng大da很hen多duo，此ci時shi的de柱zhu壓ya大da約yue是shi甲jia醇chun或huo水shui為wei流liu動dong相xiang時shi的de兩liang倍bei。因yin此ci要yao注zhu意yi防fang止zhi梯ti度du洗xi脫tuo過guo程cheng中zhong壓ya力li超chao過guo輸shu液ye泵beng或huo色se譜pu柱zhu能neng承cheng受shou的de最zui大da壓ya力li。
關於六通閥的正確使用和維護
①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。
②轉動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。
③為防止緩衝鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結束後應衝洗進樣閥。通常可用水衝洗，或先用能溶解樣品的溶劑衝洗，再用水衝洗。
關於色譜柱的使用和維護
色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
調節流速太快
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會衝動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩（如前所述）。
反衝色譜柱
一般說來色譜柱不能反衝，隻有生產者指明該柱可以反衝時，才可以反衝除去留在柱頭的雜質。否則反衝會迅速降低柱效。
預柱和保護柱
選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），yibimiangudingxiangbeipohuai。youshikeyizaijinyangqiqianmianlianjieyiyuzhu，fenxizhushijianheguijiaoshi，yuzhuweiguijiao，keshiliudongxiangzaijinrufenxizhuzhiqianyuxianbeiguijiao“飽和”，避免分析柱中的矽膠基質被溶解。
避(bi)免(mian)將(jiang)基(ji)質(zhi)複(fu)雜(za)的(de)樣(yang)品(pin)尤(you)其(qi)是(shi)生(sheng)物(wu)樣(yang)品(pin)直(zhi)接(jie)注(zhu)入(ru)柱(zhu)內(nei)，需(xu)要(yao)對(dui)樣(yang)品(pin)進(jin)行(xing)預(yu)處(chu)理(li)或(huo)者(zhe)在(zai)進(jin)樣(yang)器(qi)和(he)色(se)譜(pu)柱(zhu)之(zhi)間(jian)連(lian)接(jie)一(yi)保(bao)護(hu)柱(zhu)。保(bao)護(hu)柱(zhu)一(yi)般(ban)是(shi)填(tian)有(you)相(xiang)似(si)固(gu)定(ding)相(xiang)的(de)短(duan)柱(zhu)。保(bao)護(hu)柱(zhu)可(ke)以(yi)而(er)且(qie)應(ying)該(gai)經(jing)常(chang)更(geng)換(huan)。
液相使用中四大關鍵因素
1.液相色譜儀本身
對(dui)於(yu)儀(yi)器(qi)本(ben)身(shen)一(yi)般(ban)不(bu)會(hui)有(you)問(wen)題(ti)，特(te)別(bie)是(shi)剛(gang)買(mai)回(hui)來(lai)的(de)新(xin)儀(yi)器(qi)。對(dui)於(yu)儀(yi)器(qi)本(ben)身(shen)最(zui)重(zhong)要(yao)的(de)就(jiu)是(shi)儀(yi)器(qi)的(de)校(xiao)驗(yan)，剛(gang)買(mai)回(hui)來(lai)的(de)儀(yi)器(qi)一(yi)般(ban)都(dou)是(shi)由(you)賣(mai)家(jia)先(xian)對(dui)儀(yi)器(qi)做(zuo)係(xi)統(tong)的(de)確(que)認(ren)工(gong)作(zuo)（包括IQ、PQ、OQ），確(que)認(ren)順(shun)利(li)通(tong)過(guo)後(hou)，再(zai)請(qing)國(guo)家(jia)或(huo)省(sheng)級(ji)儀(yi)器(qi)檢(jian)定(ding)局(ju)的(de)來(lai)校(xiao)驗(yan)，檢(jian)定(ding)合(he)格(ge)後(hou)就(jiu)可(ke)以(yi)放(fang)心(xin)使(shi)用(yong)了(le)，除(chu)此(ci)之(zhi)外(wai)，一(yi)些(xie)做(zuo)得(de)好(hao)的(de)公(gong)司(si)每(mei)半(ban)年(nian)會(hui)對(dui)儀(yi)器(qi)進(jin)行(xing)一(yi)次(ci)的(de)內(nei)部(bu)校(xiao)驗(yan)，目(mu)的(de)就(jiu)是(shi)為(wei)了(le)保(bao)證(zheng)儀(yi)器(qi)的(de)正(zheng)常(chang)可(ke)運(yun)行(xing)狀(zhuang)態(tai)。
2.色譜條件
色譜條件一般包括流動相、色譜柱、檢測波長、流速及進樣量。
流動相就涉及到配製流動相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大於18.2兆歐級別，試劑試液要求用色譜級別的，原因為防止水和試劑試液中的雜質對色譜結果的幹擾。
sepuzhuhuiyinbutongdepinzhongeryoubutongdeyaoqiu，danmeigensepuzhudouyoutadeqingxiyaoqiu，zhegezaisepuzhushuomingshushangdoukeyizhaodao，yidingyaogenjushangmiandeyaoqiujinxing，fouzehuizaochengsepuzhuxiaoxiajianghesepuzhudeshiyongshoumingsuoduan，jiancebochangyehuiyinpinzhongdebutongyoubutongdeyaoqiu，zhelixuyaozhichudeshiyaozhuyiguanchajianceqidaodengnengliangdebianhua，birujixianbodongda，huoxingchengfendexiangyingzhituranbianxiaodeng，douyoukenengshidaodengdenengliangbuzusuoyinqide，daodengyibanjianyishiyong800小時，但實際上使用時間不止，可根據實際情況更換。
流速也因品種的不同而不同，一般為1.0ml/min，流速是不可隨意改動的，特別是作為QCrenyuan，danshizuoweiyanfarenyuan，youshiweilemosuotiaojianhuojinxingfangfanaiyongxingyanzheng，huiduiliusujinxinggaibianyipingjiafangfadeshiyongxing。duiyujinyangliangyinbutongdepinzhongyeyoubutongguiding，jinyangliangzhekuaixianzaidoushiyongzidongjinyang，suoyijinyangjingmidudouhenhao，buxuqiangtiaoshenme。
3.操作人員
首shou先xian，作zuo為wei液ye相xiang操cao作zuo人ren員yuan，一yi定ding要yao認ren真zhen學xue習xi液ye相xiang的de說shuo明ming書shu，掌zhang握wo液ye相xiang硬ying件jian和he軟ruan件jian的de操cao作zuo，掌zhang握wo日ri常chang的de維wei護hu保bao養yang，掌zhang握wo最zui基ji礎chu故gu障zhang的de排pai除chu和he維wei修xiu。
一(yi)般(ban)液(ye)相(xiang)的(de)操(cao)作(zuo)規(gui)程(cheng)也(ye)是(shi)有(you)操(cao)作(zuo)人(ren)員(yuan)起(qi)草(cao)的(de)，所(suo)以(yi)隻(zhi)要(yao)嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)操(cao)作(zuo)要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)，一(yi)般(ban)不(bu)會(hui)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，當(dang)然(ran)啫(啫)喱(li)需(xu)要(yao)特(te)別(bie)指(zhi)出(chu)的(de)是(shi)對(dui)於(yu)液(ye)相(xiang)的(de)日(ri)常(chang)維(wei)護(hu)保(bao)養(yang)很(hen)重(zhong)要(yao)，比(bi)如(ru)流(liu)動(dong)相(xiang)的(de)過(guo)濾(lv)、脫氣、泵密封墊的清洗、係統管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅持，很容易導致色譜柱堵塞、係統壓力過大、色譜峰異常等不必要的故障，浪費時間。
其次，操作人員在配製液相分析用樣品溶液時，最好由同一個人單獨完成，以免不必要的偶然誤差。
4.液相安裝環境
液相色譜儀應盡量安裝於水平、遠離振動、dianciganraodewuneidetaimianshang，youtiaojiandehuajinliangjiangyexiangshujuchulixitongfengekai，yigeshifangzhisepujixianzaoyinpianda，jixianbuwendeng，yigeshiweijianshaoduirentideweihai。
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