一.明視野觀察(Bright field BF)
明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢方式,廣泛應用於病理、檢驗,用於觀察被染色的切片,所有顯微鏡均能完成此功能。
明視野

二.暗視野觀察(Dark field DF)
暗(an)視(shi)野(ye)實(shi)際(ji)是(shi)暗(an)場(chang)照(zhao)明(ming)發(fa)。它(ta)的(de)特(te)點(dian)和(he)明(ming)視(shi)野(ye)不(bu)同(tong),不(bu)直(zhi)接(jie)觀(guan)察(cha)到(dao)照(zhao)明(ming)的(de)光(guang)線(xian),而(er)觀(guan)察(cha)到(dao)的(de)是(shi)被(bei)檢(jian)物(wu)體(ti)反(fan)射(she)或(huo)衍(yan)射(she)的(de)光(guang)線(xian)。因(yin)此(ci),視(shi)場(chang)成(cheng)為(wei)黑(hei)暗(an)的(de)背(bei)景(jing),而(er)被(bei)檢(jian)物(wu)體(ti)則(ze)呈(cheng)現(xian)明(ming)亮(liang)的(de)象(xiang)。
anshiyedeyuanlishigenjuguangxueshangdedingdaoerxianxiang,weichenzaiqiangguangzhishetongguodeqingkuangxia,renyanbunengguancha,zheshiyinweiqiangguangraoshezaochengde。ruobaguangxianxiesheta,youyuguangdefanshe,weilisihuzengdaletiji,weirenyankejian。
m..m 暗(an)視(shi)野(ye)觀(guan)察(cha)所(suo)需(xu)要(yao)的(de)特(te)殊(shu)附(fu)件(jian)是(shi)暗(an)視(shi)野(ye)聚(ju)光(guang)鏡(jing)。它(ta)的(de)特(te)點(dian)是(shi)不(bu)讓(rang)光(guang)束(shu)由(you)下(xia)至(zhi)上(shang)的(de)通(tong)過(guo)被(bei)檢(jian)物(wu)體(ti),而(er)是(shi)將(jiang)光(guang)線(xian)改(gai)變(bian)途(tu)徑(jing),使(shi)其(qi)斜(xie)射(she)向(xiang)被(bei)檢(jian)物(wu)體(ti),使(shi)照(zhao)明(ming)光(guang)線(xian)不(bu)直(zhi)接(jie)進(jin)入(ru)物(wu)鏡(jing),利(li)用(yong)被(bei)檢(jian)物(wu)體(ti)表(biao)麵(mian)反(fan)射(she)或(huo)衍(yan)射(she)光(guang)形(xing)成(cheng)的(de)明(ming)亮(liang)圖(tu)象(xiang)。暗(an)視(shi)野(ye)觀(guan)察(cha)的(de)分(fen)辨(bian)率(lv)遠(yuan)高(gao)於(yu)明(ming)視(shi)野(ye)觀(guan)察(cha),最(zui)高(gao)達(da)0.02—0.004
暗視野

三.相差鏡檢法(Phase contrast PH)
在光學顯微鏡的發展過程中,相差鏡檢術的發明成功,是近代顯微鏡技術中的重要成就。我們知道,人眼隻能區分光波的波長(顏色)和振幅(亮度),對於無色通明的生物標本,當光線通過時,波長和振幅變化不大,在明場觀察時很難觀察到標本.
相(xiang)差(cha)顯(xian)微(wei)鏡(jing)利(li)用(yong)被(bei)檢(jian)物(wu)體(ti)的(de)光(guang)程(cheng)之(zhi)差(cha)進(jin)行(xing)鏡(jing)檢(jian),也(ye)就(jiu)是(shi)有(you)效(xiao)地(di)利(li)用(yong)光(guang)的(de)幹(gan)涉(she)現(xian)象(xiang),將(jiang)人(ren)眼(yan)不(bu)可(ke)分(fen)辨(bian)的(de)相(xiang)位(wei)差(cha)變(bian)為(wei)可(ke)分(fen)辨(bian)的(de)振(zhen)幅(fu)差(cha),即(ji)使(shi)是(shi)無(wu)色(se)透(tou)明(ming)的(de)物(wu)質(zhi)也(ye)可(ke)成(cheng)為(wei)清(qing)晰(xi)可(ke)見(jian)。這(zhe)大(da)大(da)便(bian)利(li)了(le)活(huo)體(ti)細(xi)胞(bao)的(de)觀(guan)察(cha),因(yin)此(ci)相(xiang)差(cha)鏡(jing)檢(jian)法(fa)廣(guang)泛(fan)應(ying)用(yong)於(yu)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)。
相差圖片

相(xiang)差(cha)顯(xian)微(wei)鏡(jing)的(de)基(ji)本(ben)原(yuan)理(li)是(shi),把(ba)透(tou)過(guo)標(biao)本(ben)的(de)可(ke)見(jian)光(guang)的(de)光(guang)程(cheng)差(cha)變(bian)成(cheng)振(zhen)幅(fu)差(cha),從(cong)而(er)提(ti)高(gao)了(le)各(ge)種(zhong)結(jie)構(gou)間(jian)的(de)對(dui)比(bi)度(du),使(shi)各(ge)種(zhong)結(jie)構(gou)變(bian)得(de)清(qing)晰(xi)可(ke)見(jian)。光(guang)線(xian)透(tou)過(guo)標(biao)本(ben)後(hou)發(fa)生(sheng)折(zhe)射(she),偏(pian)離(li)了(le)原(yuan)來(lai)的(de)光(guang)路(lu),同(tong)時(shi)被(bei)延(yan)遲(chi)了(le)1/4λ(波長),如果再增加或減少1/4λ,則光程差變為1/2λ,兩束光合軸後幹涉加強,振幅增大或減下,提高反差。在構造上,相差顯微鏡有不同於普通光學顯微鏡兩個特殊之處:
1. 環形光闌(annular diaphragm) 位於光源與聚光器之間,作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐,焦聚到標本上。
2. 相位板(annular phaseplate)在物鏡中加了塗有氟化鎂的相位板,可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種:
1. A 相板:將直射光推遲1/4λ,兩組光波合軸後光波相加,振幅加大,標本結構比周圍介質更加變亮,形成亮反差(或稱負反差)。
2. B 相板:將衍射光推遲1/4λ,兩組光線合軸後光波相減,振幅變小,形成暗反差(或稱正反差),結構比周圍介質更加變暗
相差原理

四.微分幹涉稱鏡檢術(Differential interference contrast DIC)
微分幹涉鏡檢術出現於60年(nian)代(dai),它(ta)不(bu)僅(jin)能(neng)觀(guan)察(cha)無(wu)色(se)透(tou)明(ming)的(de)物(wu)體(ti),而(er)且(qie)圖(tu)象(xiang)呈(cheng)現(xian)出(chu)浮(fu)雕(diao)壯(zhuang)的(de)立(li)體(ti)感(gan),並(bing)具(ju)有(you)相(xiang)襯(chen)鏡(jing)檢(jian)術(shu)所(suo)不(bu)能(neng)達(da)到(dao)的(de)某(mou)些(xie)優(you)點(dian),觀(guan)察(cha)效(xiao)果(guo)更(geng)為(wei)逼(bi)真(zhen)。
原理;
weifenganshechengjingjianshushiliyongtezhidewolasidunlengjinglaifenjieguangshu。fenliechulaideguangshudezhendongfangxiangxianghuchuizhiqieqiangduxiangdeng,guangshufenbiezaijulihenjindeliangdianshangtongguobeijianwuti,zaixiangweishanglveyouchabie。youyuliangguangshudeliejujixiao,erbuchuxianzhongyingxianxiang,shituxiangchengxianchulitidesanweiganjiao。
微分幹涉圖片

DIC顯微鏡的物理原理完全不同於相差顯微鏡,技術設計要複雜得多。DIC利用的是偏振光,有四個特殊的光學組件:偏振器(polarizer)、DIC棱鏡、DIC滑行器和檢偏器(analyzer)。偏振器直接裝在聚光係統的前麵,使光線發生線性偏振。在聚光器中則安裝了偌瑪斯斯棱鏡,即DIC棱鏡,此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光(x和y),二(er)者(zhe)成(cheng)一(yi)小(xiao)夾(jia)角(jiao)。聚(ju)光(guang)器(qi)將(jiang)兩(liang)束(shu)光(guang)調(tiao)整(zheng)成(cheng)與(yu)顯(xian)微(wei)鏡(jing)光(guang)軸(zhou)平(ping)行(xing)的(de)方(fang)向(xiang)。最(zui)初(chu)兩(liang)束(shu)光(guang)相(xiang)位(wei)一(yi)致(zhi),在(zai)穿(chuan)過(guo)標(biao)本(ben)相(xiang)鄰(lin)的(de)區(qu)域(yu)後(hou),由(you)於(yu)標(biao)本(ben)的(de)厚(hou)度(du)和(he)折(zhe)射(she)率(lv)不(bu)同(tong),引(yin)起(qi)了(le)兩(liang)束(shu)光(guang)發(fa)生(sheng)了(le)光(guang)程(cheng)差(cha)。在(zai)物(wu)鏡(jing)的(de)後(hou)焦(jiao)麵(mian)處(chu)安(an)裝(zhuang)了(le)第(di)二(er)個(ge)偌(ruo)瑪(ma)斯(si)斯(si)棱(leng)鏡(jing),即(ji)DIC滑行器,它把兩束光波合並成一束。
這時兩束光的偏振麵(x和y)仍然存在。最後光束穿過第二個偏振裝置,即檢偏器。在光束形成目鏡DIC影像之前,檢偏器與偏光器的方向成直角。檢偏器將兩束垂直的光波組合成具有相同偏振麵的兩束光,從而使二者發生幹涉。x和y波的光程差決定著透光的多少。光程差值為0時,沒有光穿過檢偏器;guangchengchazhidengyubochangyibanshi,chuanguodeguangdadaozuidazhi。yushizaihuisedebeijingshang,biaobenjiegouchengxianchuliangancha。weileshiyingxiangdefanchadadaozuijiazhuangtai,ketongguotiaojieDIC滑行器的縱行微調來改變光程差,光程差可改變影像的亮度。調節DIC滑hua行xing器qi可ke使shi標biao本ben的de細xi微wei結jie構gou呈cheng現xian出chu正zheng或huo負fu的de投tou影ying形xing象xiang,通tong常chang是shi一yi側ce亮liang,而er另ling一yi側ce暗an,這zhe便bian造zao成cheng了le標biao本ben的de人ren為wei三san維wei立li體ti感gan,類lei似si大da理li石shi上shang的de浮fu雕diao
微分幹涉原理圖

五.偏光顯微鏡(Polarizing microscope POL )
偏光顯微鏡的特點
pianguangxianweijingshijiandingwuzhixiweijiegouguangxuexingzhideyizhongxianweijing。fanjuyoushuangzheshedewuzhi,zaipianguangxianweijingxiajiunengfenbiandeqingchu,dangranzhexiewuzhiyekeyongransefalaijinxingguancha,danyouxiezebukeneng,erbixuliyongpianguangxianweijing。
偏光顯微鏡的特點,就是將普通改變為偏光進行鏡檢的方法,以鑒別某一物質是單折射(各向同行)或雙折射性(各向異性)。
雙折射性是晶體的基本特性。因此,偏光顯微鏡被廣泛地應用在礦物,化學等領域。在生物學和植物學也有應用。
六.浮雕相襯顯微鏡(RC HMC )
1975年,Robert Hoffman 博士發明
2002年,專利到期,各顯微鏡廠家紛紛推出采用以自己名義命名的RC技術產品
原理
斜射光照射到標本產生折射、衍射,光線通過物鏡光密度梯度調節器產生不同陰影,從而使透明標本表麵產生明暗差異,增加觀察對比度
特點
提高未染色標本的可見性和對比度;
圖象顯示陰影或近似三維結構而不會產生光暈;
可檢測雙折射物質(岩石切片、水晶、骨頭) ;
可檢測玻璃,塑料等培養皿中的細胞,器官和組織;
聚光鏡的工作距離可以設計的更長;
RC物鏡也可用於明場,暗場和熒光觀察
七:熒光顯微鏡(Fluorescence Microscopy FL)
熒光鏡檢術是用短波長的光線照射用熒光素染色過的被檢物體,使之受激發後而產生長波長的熒光,然後觀察。
熒光圖象

優點:
檢出能力高(放大作用)
對細胞的刺激小(可以活體染色)
能進行多重染色
用途:
物體構造的觀察——熒光素
熒光的有無、色調比較進行物質判別——抗體熒光等
發熒光量的測定對物質定性、定量分析
熒光原理圖

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