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色(se)譜(pu)雙(shuang)峰(feng)指(zhi)的(de)是(shi)明(ming)明(ming)是(shi)同(tong)一(yi)種(zhong)物(wu)質(zhi)，但(dan)在(zai)色(se)譜(pu)圖(tu)中(zhong)卻(que)呈(cheng)現(xian)雙(shuang)峰(feng)，讓(rang)實(shi)驗(yan)人(ren)員(yuan)誤(wu)認(ren)為(wei)含(han)有(you)兩(liang)種(zhong)物(wu)質(zhi)。那(na)麼(me)，出(chu)現(xian)雙(shuang)峰(feng)的(de)原(yuan)因(yin)主(zhu)要(yao)有(you)哪(na)些(xie)呢(ne)？今天小編就和大家聊一聊，液相色譜出現“雙峰”的原因。
在HPLC分fen析xi中zhong，在zai色se譜pu柱zhu正zheng常chang，樣yang品pin濃nong度du適shi宜yi，分fen析xi方fang法fa合he適shi，色se譜pu峰feng在zai出chu峰feng時shi間jian較jiao短duan的de條tiao件jian下xia，峰feng型xing應ying對dui稱cheng而er尖jian銳rui。但dan在zai實shi際ji操cao作zuo中zhong，如ru果guo對dui樣yang品pin不bu了le解jie，前qian處chu理li不bu恰qia當dang或huo者zhe分fen析xi方fang法fa不bu合he理li等deng，會hui出chu現xian峰feng形xing不bu正zheng常chang的de情qing況kuang，其qi中zhong雙shuang峰feng現xian象xiang就jiu是shi液ye相xiang色se譜pu中zhong常chang見jian的de問wen題ti之zhi一yi。
出現色譜雙峰的原因一般有以下幾種原因：色譜柱的問題、溶劑、進樣量、樣品特性，以及pH。
色譜柱
如ru果guo在zai樣yang品pin分fen析xi時shi發fa現xian每mei個ge色se譜pu峰feng都dou有you雙shuang峰feng出chu現xian，尤you其qi在zai采cai用yong單dan一yi純chun物wu質zhi時shi，則ze可ke以yi確que定ding是shi色se譜pu柱zhu出chu現xian問wen題ti了le，一yi般ban是shi柱zhu頭tou受shou損sun或huo者zhe柱zhu頭tou固gu定ding相xiang汙wu染ran引yin起qi的de。
如ru果guo進jin樣yang量liang少shao，原yuan來lai色se譜pu柱zhu正zheng常chang，色se譜pu峰feng的de形xing狀zhuang多duo為wei一yi大da峰feng帶dai一yi小xiao峰feng，不bu一yi定ding拖tuo尾wei，這zhe一yi般ban應ying是shi柱zhu頭tou受shou堵du，將jiang色se譜pu柱zhu反fan過guo來lai接jie，用yong流liu動dong相xiang衝chong洗xi或huo酸suan洗xi或huo其qi它ta溶rong劑ji，將jiang堵du在zai柱zhu頭tou的de殘can留liu物wu衝chong掉diao，再zai反fan過guo來lai，一yi般ban情qing況kuang下xia就jiu行xing了le。當dang然ran不bu反fan衝chong，正zheng衝chong有you時shi也ye會hui正zheng常chang的de。
如ru果guo峰feng拖tuo尾wei，雙shuang峰feng強qiang弱ruo相xiang差cha不bu大da，柱zhu頭tou固gu定ding相xiang變bian髒zang或huo流liu失shi可ke能neng性xing更geng大da，這zhe時shi可ke以yi將jiang進jin樣yang頭tou擰ning開kai，將jiang微wei孔kong濾lv片pian超chao聲sheng，柱zhu頭tou刮gua去qu一yi部bu分fen填tian料liao，重zhong新xin填tian上shang新xin填tian料liao擰ning緊jin，不bu過guo這zhe個ge對dui技ji術shu要yao求qiu較jiao高gao且qie不bu能neng經jing常chang做zuo，否fou則ze用yong不bu了le幾ji次ci，色se譜pu柱zhu就jiu會hui應ying柱zhu效xiao降jiang低di而er報bao廢fei。
如果上述不能解決問題，可能是柱塌陷造成的，此時需要更換色譜柱。
溶劑問題
目前HPLC分析多為反相色譜，流動相多為甲醇、乙腈、shui，jiagezhongtianjiajiyigaishanfenlixingneng。yangpinyibanyongyuliudongxiangxiangrongderongjirongjie，zuijiaderongjiefangfashiyongliudongxiangrongjie。zaishijifenxizhong，youshihouweileyangpinderongjiexinghuowendingxingjiaruleyidiandehuanchongye，huanchongyedesuanjianxingkenenghuidaozhiyangpinzhuanhua，congerchanshengshuangfengxianxiang。cishixuyaogenghuanhuanchongye，tiaozhengrongjipH值，或者用流動相配置樣品。
此外，樣品要現配現用，避免樣品溶解液的有機相比例、pH值發生變化而導致的溶劑效應。
進樣量
當用溶劑極性強度大的試劑，如純甲醇、純乙腈，純乙醇，而分析體係中以水為主時，如果樣品進樣量大，如定量管為20ul，此時單一的純物質會出現雙峰，第二峰比第一峰小(每次都不太一樣)，且拖尾，保留時間會提前(相對進樣量少而言)，將jiang進jin樣yang量liang減jian少shao一yi半ban以yi上shang，峰feng型xing將jiang變bian為wei正zheng常chang。這zhe是shi樣yang品pin的de溶rong劑ji與yu流liu動dong相xiang極ji性xing相xiang差cha太tai大da，而er流liu動dong相xiang來lai不bu及ji將jiang其qi稀xi釋shi達da到dao平ping衡heng造zao成cheng的de，此ci情qing況kuang下xia需xu要yao減jian少shao進jin樣yang量liang。
另一個原因是，進樣量不一定大，但絕對量很大，色譜圖上的雙峰緊靠在一起，基本上齊高，不拖尾(如果出峰很快，也可能是色譜柱問題)。將樣品稀釋再進樣就可以了，這是由於進樣量過大，色譜柱過載造成的。
樣品特性
youxieyangpinyouyuqihuaxuejiegoudetedian，cunzaihubianyigouxianxiang，erzhezhonghubianyigoutiwufafenkai，ershiyiyigedongtaipinghengcunzai。zaisepufenxishi，zaiyigetedingdetiaojianxia(如pH值、流動相極性、溫度等)，一種物質將出現雙峰，雙峰靠的很近，基本齊高，不拖尾，條件稍一變化，尤其pH，雙峰現象將消失，如紅黴素等。
有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰，但在LC-MS下，用質譜檢測器，其質譜的總離子流圖上較明顯，如農藥啶蟲眯(吡蟲清)。
pH值
體係pH值對色譜雙峰的影響出現在各個環節上(前麵已經提到)，尤其在緩衝液流動相平衡過程中其影響更為明顯。當連續進樣時，受pH的連續變化影響會經常遇到這種雙峰的情況。另外，在樣品分析時，流動相的pH盡量遠離被分析物的等電點，否則也容易引起雙峰的產生。在用離子對試劑分析時，選擇不好條件也會容易引起雙峰的產生。
HPLC分析中，在色譜柱正常，樣品靈敏度足夠，分析方法合適，色譜峰在出峰時間較短的條件下（不包括梯度），峰(feng)型(xing)應(ying)對(dui)稱(cheng)而(er)尖(jian)銳(rui)。但(dan)是(shi)，在(zai)對(dui)樣(yang)品(pin)了(le)解(jie)程(cheng)度(du)不(bu)夠(gou)，方(fang)法(fa)不(bu)妥(tuo)，樣(yang)品(pin)處(chu)理(li)方(fang)法(fa)及(ji)進(jin)樣(yang)方(fang)式(shi)不(bu)合(he)理(li)下(xia)，會(hui)出(chu)現(xian)各(ge)種(zhong)意(yi)想(xiang)不(bu)到(dao)的(de)問(wen)題(ti)，而(er)對(dui)色(se)譜(pu)峰(feng)難(nan)以(yi)作(zuo)出(chu)合(he)理(li)的(de)解(jie)釋(shi)，尤(you)其(qi)對(dui)於(yu)新(xin)手(shou)更(geng)是(shi)如(ru)此(ci)，所(suo)以(yi)，了(le)解(jie)每(mei)種(zhong)鬼(gui)峰(feng)出(chu)現(xian)的(de)原(yuan)因(yin)對(dui)我(wo)們(men)的(de)分(fen)析(xi)工(gong)作(zuo)是(shi)非(fei)常(chang)重(zhong)要(yao)的(de)。
文章來源：藥物分析化學社
文章（文字）來源：網絡
