快速分析作為重要技術課題一直以來都在使用,但伴隨LCMS的迅速普及,提高性價比成為迫在眉睫的問題,成為了加緊快速化的重要因素。
快速分析即縮短分析時間,通常通過縮短色譜柱或提高流動相的流量來達到目的。但是,使用常用的粒徑5μm的填充柱,使用任何方法分離性能都會明顯下降,從而使快速化失去意義。
因此,以下兩種方法得以發展:使用小粒徑的填料,通過這個方法將使快速分離成為可能。但是,由於色譜柱裏流動阻力的增加,儀器各部件和色譜柱所承受的壓力也將顯著地增加。
高溫分離
較(jiao)高(gao)的(de)溫(wen)度(du)可(ke)以(yi)加(jia)速(su)物(wu)質(zhi)的(de)擴(kuo)散(san),同(tong)時(shi)可(ke)以(yi)減(jian)小(xiao)色(se)譜(pu)柱(zhu)裏(li)的(de)流(liu)動(dong)阻(zu)力(li),也(ye)使(shi)得(de)快(kuai)速(su)分(fen)離(li)成(cheng)為(wei)可(ke)能(neng)。高(gao)溫(wen)分(fen)析(xi)在(zai)降(jiang)低(di)柱(zhu)壓(ya)方(fang)麵(mian)很(hen)有(you)效(xiao),但(dan)是(shi)高(gao)溫(wen)引(yin)起(qi)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)劣(lie)化(hua)、導致樣品分解等不足在應用時需要引起注意。
為(wei)了(le)解(jie)決(jue)背(bei)壓(ya)問(wen)題(ti),改(gai)進(jin)了(le)承(cheng)壓(ya)能(neng)力(li)的(de)專(zhuan)用(yong)儀(yi)器(qi)得(de)到(dao)發(fa)展(zhan),這(zhe)類(lei)儀(yi)器(qi)通(tong)常(chang)比(bi)較(jiao)昂(ang)貴(gui)。然(ran)而(er),這(zhe)些(xie)專(zhuan)用(yong)儀(yi)器(qi)在(zai)進(jin)樣(yang)性(xing)能(neng)和(he)靈(ling)敏(min)度(du)方(fang)麵(mian)不(bu)得(de)不(bu)做(zuo)出(chu)妥(tuo)協(xie)。並(bing)且(qie),填(tian)料(liao)過(guo)於(yu)細(xi)微(wei)化(hua)的(de)填(tian)充(chong)柱(zhu),對(dui)於(yu)硬(ying)件(jian)的(de)要(yao)求(qiu)高(gao),使(shi)用(yong)這(zhe)種(zhong)色(se)譜(pu)柱(zhu)開(kai)發(fa)的(de)分(fen)析(xi)法(fa)犧(xi)牲(sheng)了(le)通(tong)用(yong)性(xing)。因(yin)此(ci),如(ru)果(guo)把(ba)這(zhe)種(zhong)儀(yi)器(qi)用(yong)於(yu)常(chang)規(gui)的(de)HPLC分析中,其效率將會變低。
Prominence 支持快速分離
Prominence使用標準部件,可以同時滿足研究人員傳統分析和高速分析的需求,也可以支持高達85℃的(de)操(cao)作(zuo)溫(wen)度(du),從(cong)而(er)使(shi)更(geng)低(di)壓(ya)力(li)下(xia)的(de)快(kuai)速(su)分(fen)析(xi)成(cheng)為(wei)可(ke)能(neng),同(tong)時(shi)該(gai)儀(yi)器(qi)體(ti)現(xian)出(chu)的(de)分(fen)析(xi)性(xing)能(neng)和(he)通(tong)量(liang)水(shui)平(ping)即(ji)使(shi)是(shi)在(zai)更(geng)昂(ang)貴(gui)的(de)儀(yi)器(qi)配(pei)置(zhi)上(shang)也(ye)不(bu)多(duo)見(jian)。
Prominence UFLC通過以下特性支持快速分析:
小柱管和小體積的流通池降低了柱外峰展寬效應。
使用2.2μm顆粒大小的色譜柱Shim-pack XR-ODS。
Shim-pack XR-ODS是shi考kao慮lv上shang述shu填tian料liao細xi微wei化hua的de問wen題ti,從cong分fen離li效xiao率lv和he壓ya力li的de關guan係xi中zhong巧qiao妙miao找zhao到dao平ping衡heng,可ke提ti高gao或huo維wei持chi分fen離li效xiao果guo的de同tong時shi縮suo短duan分fen析xi時shi間jian的de新xin一yi代dai快kuai速su分fen析xi用yong色se譜pu柱zhu。


Chromatographic conditions; column: described above, mobile phase: water/acetonitrile (3/7,v/v), flow rate: described above, temperature: 40℃, detection: absorbance at 245 nm, sample volume: 4μL(XR-ODS), 10μL(VP-ODS).
Peaks; 1: actophenone, 2: propiophenone, 3: butyrophenone, 4: balenophenone, 5: hexanophenone, 6: heptanophenone, 7: octanophenone.
Prominence SIL-20A自動進樣器實現10秒鍾10μl的超快速進樣。


Chromatographic conditions; column: Shim-pack XR-ODS(3mm i.d.×30mm, 2.2μm), mobile phase: water/acetonitrile(4/6 to 2/8 in 0.4 min, convex gradient), flow rate: 3mL/min, temperature: 80℃, detection: absorbance at 245 nm, sample volume: 4μL(each 800 nm ol),.0.1 min delayed injection.
Peaks; 1: actophenone, 2: propiophenone, 3: butyrophenone, 4: balenophenone, 5: hexanophenone, 6: heptanophenone, 7: octanophenone.
支持高達85℃的高溫分析。
溫度與快速分析:隨著柱溫升高,理論塔板數增加,柱效增高,柱壓降低。


Chromatographic conditions;
mobile phase: water/acetonitrile (3/7, v/v),
detection: absorbance at 245 nm.
Peaks: 1: 苯乙酮 2: 苯丙酮 3: 苯丁酮 4: 苯戊酮 5: 苯己酮 6: 苯庚酮 7: 苯辛酮
溫度對化合物的影響:高溫分析在降低柱壓方麵很有效,但是高溫引起色譜柱的劣化、導致樣品分解等不足在應用時需要引起注意。高溫分析隻是作為快速分析的輔助手段加以運用。
具備高采樣頻率的檢測器,可以實現快速的數據獲取而不會丟失信息。
專門的色譜方法轉換軟件,使常規色譜條件轉換為UFLC條件簡單易行,保證分析方法的通用性。
快速分析的重現性
在快速分離中要取得成分保留時間的重現性要比常規分析中更加困難。保留時間的重現性(RSD)和時間的平方根成反比增大,所以需要比常規分析更為嚴格的送液性能。Prominence UFLC可以保證送液分辨率 3nL/min的微衝程送液、梯度送液時控製響應為0.1秒的卓越送液能力,可以發揮極為優越的保留時間重現性。
什麼是高通量
kuaisuyexiangsepudemubiaojiushigaotongliang,yejiushishuomeitianhuomeixiaoshiyougengduodeyangpinbeifenxi。weileshixiangaotongliang,bujinyaosuoduandangeyangpinfenxishijian,erqiezhenggexunhuanjinyanghefenxishijianyebixuyouhua。zhuiqiukuaisuhuadebenyibujinshisuoduanfenxishijian,erqieshisuoduanfenxizhouqi。Prominence UFLC的樣品注入速度為10秒,使得分析周期得以大為縮短。
應用實例
PTC衍生氨基酸的UFLC分析
氨(an)基(ji)酸(suan)分(fen)析(xi)有(you)兩(liang)種(zhong)檢(jian)測(ce)方(fang)法(fa),其(qi)一(yi)是(shi)使(shi)用(yong)離(li)子(zi)交(jiao)換(huan)色(se)譜(pu)柱(zhu)分(fen)離(li)之(zhi)後(hou),進(jin)行(xing)衍(yan)生(sheng)化(hua)再(zai)檢(jian)測(ce)的(de)柱(zhu)後(hou)衍(yan)生(sheng)化(hua)法(fa),另(ling)一(yi)種(zhong)是(shi)先(xian)衍(yan)生(sheng)化(hua)後(hou),使(shi)用(yong)反(fan)相(xiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)進(jin)行(xing)分(fen)離(li)的(de)柱(zhu)前(qian)衍(yan)生(sheng)法(fa)。從(cong)快(kuai)速(su)分(fen)析(xi)的(de)角(jiao)度(du)考(kao)慮(lv),柱(zhu)前(qian)衍(yan)生(sheng)化(hua)法(fa)行(xing)之(zhi)有(you)效(xiao)。在(zai)此(ci),使(shi)用(yong)Shim-pack XR-0DS以更短的時間進行了氨基酸分析。
使用異硫氰酸苯酯進行衍生化。柱後衍生法時需要1小時,柱前衍生化法使用常規色譜柱時需要25分鍾的分析可縮短至4分鍾。
應用實例
PTC衍生氨基酸的UFLC分析
氨(an)基(ji)酸(suan)分(fen)析(xi)有(you)兩(liang)種(zhong)檢(jian)測(ce)方(fang)法(fa),其(qi)一(yi)是(shi)使(shi)用(yong)離(li)子(zi)交(jiao)換(huan)色(se)譜(pu)柱(zhu)分(fen)離(li)之(zhi)後(hou),進(jin)行(xing)衍(yan)生(sheng)化(hua)再(zai)檢(jian)測(ce)的(de)柱(zhu)後(hou)衍(yan)生(sheng)化(hua)法(fa),另(ling)一(yi)種(zhong)是(shi)先(xian)衍(yan)生(sheng)化(hua)後(hou),使(shi)用(yong)反(fan)相(xiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)進(jin)行(xing)分(fen)離(li)的(de)柱(zhu)前(qian)衍(yan)生(sheng)法(fa)。從(cong)快(kuai)速(su)分(fen)析(xi)的(de)角(jiao)度(du)考(kao)慮(lv),柱(zhu)前(qian)衍(yan)生(sheng)化(hua)法(fa)行(xing)之(zhi)有(you)效(xiao)。在(zai)此(ci),使(shi)用(yong)Shim-pack XR-0DS以更短的時間進行了氨基酸分析。
使用異硫氰酸苯酯進行衍生化。柱後衍生法時需要1小時,柱前衍生化法使用常規色譜柱時需要25分鍾的分析可縮短至4分鍾。


色素的UFLC分析
添加在食品中的色素有合成化合物和天然化合物,這些色素水溶性高,多用HPLC進行分析。但在多個色素組合使時,同時分析所需時間長。在此表示使用Shim-pack XR-ODS超快速LC進行的色素同時分析例。12種成分色素的同時分析的結果如下張色譜圖。使用常規LC所需分析時間為50分鍾,而使用超快速LC,約6分鍾便結了分析。


多環芳烴(PAHs)的UFLC分析
PAHs是一種判斷車輛等廢氣汙染大氣環境程度的化學物質。PAHs具有強致癌性,所以這些物質的大氣監測是重要的測定項目。PAHs顯示強熒光,可以利用熒光檢測器進行高靈敏分析。
對於此10種PAHs的分析,在不損失分離狀態下,相對於常規LC (分析時間50分鍾) ,UFLC實現了10倍速度的快速化分析(分析時間5分鍾)。

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