在進行梯度洗脫時，由於多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此必然帶來一些特殊的問題
，我們必須充分地重視。

 

1、要(yao)注(zhu)意(yi)溶(rong)劑(ji)的(de)互(hu)溶(rong)性(xing)，不(bu)相(xiang)混(hun)溶(rong)的(de)溶(rong)劑(ji)不(bu)能(neng)用(yong)作(zuo)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)。有(you)些(xie)溶(rong)劑(ji)在(zai)一(yi)定(ding)的(de)比(bi)例(li)內(nei)互(hu)溶(rong)，超(chao)出(chu)一(yi)定(ding)的(de)範(fan)圍(wei)後(hou)就(jiu)不(bu)會(hui)互(hu)溶(rong)。例(li)如(ru)：乙腈和1mol/L的醋酸銨（pH5.16）做梯度洗脫
，乙腈含量超過70%時就會出現不溶，甲醇和已烷混合，甲醇含量高於30%時就會分層等。當有機溶劑和緩衝溶液混合時還可能析出鹽的結晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。

 

2、梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)所(suo)用(yong)的(de)溶(rong)劑(ji)純(chun)度(du)要(yao)求(qiu)更(geng)高(gao)
，以(yi)保(bao)證(zheng)好(hao)的(de)重(zhong)現(xian)性(xing)。進(jin)行(xing)樣(yang)品(pin)分(fen)析(xi)前(qian)必(bi)須(xu)進(jin)行(xing)空(kong)白(bai)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)，以(yi)辯(bian)認(ren)溶(rong)劑(ji)雜(za)質(zhi)峰(feng)，因(yin)為(wei)弱(ruo)溶(rong)劑(ji)中(zhong)的(de)雜(za)質(zhi)富(fu)集(ji)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)頭(tou)上(shang)後(hou)會(hui)被(bei)強(qiang)的(de)溶(rong)劑(ji)洗(xi)脫(tuo)出(chu)來(lai)。用(yong)於(yu)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)的(de)溶(rong)劑(ji)需(xu)徹(che)底(di)脫(tuo)氣(qi)

，以(yi)防(fang)止(zhi)溶(rong)劑(ji)混(hun)合(he)時(shi)產(chan)生(sheng)氣(qi)泡(pao)。

 

3
、混(hun)合(he)溶(rong)劑(ji)的(de)粘(zhan)度(du)常(chang)隨(sui)組(zu)成(cheng)而(er)變(bian)化(hua)，因(yin)此(ci)在(zai)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)時(shi)常(chang)會(hui)出(chu)現(xian)壓(ya)力(li)變(bian)化(hua)
，例(li)如(ru)純(chun)水(shui)或(huo)甲(jia)醇(chun)的(de)粘(zhan)度(du)都(dou)比(bi)較(jiao)小(xiao)，但(dan)是(shi)當(dang)二(er)者(zhe)以(yi)相(xiang)近(jin)的(de)比(bi)例(li)混(hun)合(he)時(shi)粘(zhan)度(du)會(hui)增(zeng)大(da)很(hen)多(duo)
，此(ci)時(shi)的(de)柱(zhu)壓(ya)是(shi)純(chun)水(shui)或(huo)甲(jia)醇(chun)為(wei)流(liu)動(dong)相(xiang)時(shi)的(de)兩(liang)倍(bei)。因(yin)此(ci)要(yao)注(zhu)意(yi)防(fang)止(zhi)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)壓(ya)力(li)超(chao)過(guo)輸(shu)液(ye)泵(beng)或(huo)色(se)譜(pu)柱(zhu)所(suo)能(neng)承(cheng)受(shou)的(de)最(zui)大(da)壓(ya)力(li)。

 

4、每次梯度洗脫之後必須對色譜柱進行再生處理，使其恢複到初始的狀態。需讓10～30倍柱容積的初始流動相流經色譜柱，使固定相與初始流動相達到完全平衡。