當單色光通過厚度相同，而濃度很小的溶液時
，根據朗伯—比爾定律
，光被溶液吸收的程度，稱為吸收度，與溶液的濃度成正比，與溶液的厚度成正比，即A=εCL，式中：A為吸收度
，C為溶液的濃度
，L為溶液的厚度，ε為消光係數。

由朗伯—比爾定律得
，當一束單色光通過一溶液時，由於溶液吸收一部分光能，使光的強度減弱。若溶液的濃度（或厚度）不變，則溶液的厚度（濃度）愈大

，光線強度的減弱也愈明顯。

    用同樣的方法配製的標準溶液和待測溶液，其濃度分別為C1和C2，對同類溶液ε相同
，當厚度也相同時則：
A1=εC1L
A2=εC2L
C2=（A2/A1）*C1
    式中A1,A2可由羅維朋比色計直接讀出，C1為標準溶液的已知濃度，據此可算出待測溶液的濃度。

朗伯—比爾定律

許多化學物質的溶液具有顏色（無色的化合物也可以加顯色劑經反應生成有色物質）
，dangyouserongyederongdugaibianshi，yansedeshenqianyesuizhigaibian，nongduyuda，yanseyushen。yinci，keyiyongbijiaorongyeyanseshenqiandefangfalaicedingyouserongyedenongdu。zhezhongfangfajiaozuobisefenxifa。

一
、 朗伯—比爾定律

當(dang)一(yi)束(shu)單(dan)色(se)光(guang)通(tong)過(guo)有(you)色(se)溶(rong)液(ye)時(shi)，入(ru)射(she)光(guang)線(xian)的(de)一(yi)部(bu)分(fen)被(bei)器(qi)皿(min)反(fan)射(she)回(hui)來(lai)，一(yi)部(bu)分(fen)被(bei)溶(rong)液(ye)吸(xi)收(shou)

，另(ling)一(yi)部(bu)分(fen)則(ze)透(tou)過(guo)溶(rong)液(ye)，如(ru)圖(tu)所(suo)示(shi)。它(ta)們(men)之(zhi)間(jian)有(you)以(yi)下(xia)關(guan)係(xi)：

Io=Ia+Ir+It      1-1
式中：Io—入射光強度，Ia—吸收光強度，Ir—反射光強度，It—透過光強度

由you於yu在zai實shi際ji測ce定ding時shi

，所suo用yong的de比bi色se皿min都dou是shi同tong質zhi料liao用yong規gui格ge的de。反fan射she光guang的de強qiang度du為wei一yi定ding值zhi，不bu會hui引yin起qi測ce量liang誤wu差cha，所suo以yi反fan射she光guang的de影ying響xiang可ke以yi不bu加jia考kao慮lv。則ze上shang式shi可ke簡jian化hua為wei：
Io=Ia+It        1-2
從式1-2可知：當入射光強度Io為一定時，被吸收光強度Ia愈大，則透過光強度It愈小。也就是說：光強度的減弱僅與有色溶液對光線的吸收有關。

那麼，溶液對光線的吸收與哪些因素有關呢？實驗證明：溶液的濃度C愈大

，液層厚度L愈厚（即光線在溶液中所經過的路程愈長），則溶液對光線吸收的愈多。它們之間的關係有下式決定：
lg = KCL      1-3
這個公式就是朗伯—比爾（Lambert---Beer）定律。

公式中的K稱為吸光係數

，它表示有色溶液在單位濃度和單位厚度時的吸光度。在入射光的波長、溶液種類和溫度一定的條件下，K為定值。吸光係數是有色化合物的重要特性之一
，在比色分析中有著重要的意義。K值愈大，表示該物質對光的吸收能力愈強
，濃度改變時引起吸光度的改變愈顯著，因此比色測定時靈敏度愈高。

朗伯-比bi爾er定ding律lv即ji有you色se溶rong液ye對dui一yi定ding強qiang度du光guang的de吸xi收shou程cheng度du，與yu液ye層ceng厚hou度du和he溶rong液ye中zhong有you色se物wu質zhi濃nong度du的de乘cheng積ji成cheng正zheng比bi。其qi中zhong朗lang伯bo定ding律lv說shuo明ming吸xi收shou光guang與yu厚hou度du間jian的de關guan係xi
；比爾定律說明吸收光與濃度間的關係。

朗伯—比爾定律在光電比色計中的應用

假定有兩種有色溶液
，其中一種是已知濃度的標準溶液，另一種是待測溶液。根據公式：
在標準溶液中：As=KsCsLs 1-4
在待測溶液中：Ax=kxCxLx 1-5
將式1-4除以式1-5可得：
= 1-6

如果上述兩種溶液的液層厚度相等、溫度相同而且是同一種物質的兩種不同濃度的溶液，測定時所選用的單色光的波長亦相同
，則有：
Ls=Lx、Ks=Kx ，代入式1-6可得：
= 1-7

由you此ci可ke見jian
，在zai上shang述shu條tiao件jian下xia，吸xi光guang度du與yu濃nong度du成cheng正zheng比bi。這zhe一yi關guan係xi式shi就jiu是shi光guang電dian比bi色se計ji的de設she計ji依yi據ju，也ye是shi比bi色se分fen析xi的de基ji本ben計ji算suan公gong式shi之zhi一yi。式shi中zhong標biao準zhun溶rong液ye的de濃nong度duCs為已知，As和Ax可用光電比色計測量出來，則待測溶液的濃度Cx即可求出：
Cx = × Cs 1-8

由於在實際測定時，標準溶液和待測溶液都要加以稀釋，而且在報告結果時
，多以100毫升（或1000毫升）中的含量來表示。因此，在實際計算時，就需要在上式中乘上稀釋因數。

求待測溶液濃度的方法有：直接比較法（計算法）、因數法和標準曲線法三種。這些方法在“生物化學及生物化學檢驗技術”課程中有介紹。

波長的選擇：
由(you)於(yu)有(you)色(se)溶(rong)液(ye)對(dui)光(guang)的(de)吸(xi)收(shou)具(ju)有(you)選(xuan)擇(ze)性(xing)，因(yin)此(ci)進(jin)行(xing)比(bi)色(se)測(ce)定(ding)時(shi)，濾(lv)光(guang)片(pian)必(bi)須(xu)加(jia)以(yi)選(xuan)擇(ze)
，否(fou)則(ze)靈(ling)敏(min)度(du)很(hen)低(di)，導(dao)致(zhi)測(ce)量(liang)結(jie)果(guo)不(bu)準(zhun)確(que)。選(xuan)擇(ze)濾(lv)光(guang)的(de)一(yi)般(ban)原(yuan)則(ze)是(shi)：濾光片最大透過的光線應該是溶液最大吸收的光線。從顏色上看

，濾光片的顏色與待測溶液的顏色應為“互補色”。

什麼叫做互補色呢？凡是兩種顏色相加後能得到白色
，則此兩種顏色就稱為“互補色”，圖中直接相對的兩種顏色，均為互補色。

為(wei)什(shen)麼(me)選(xuan)擇(ze)濾(lv)光(guang)片(pian)時(shi)
，要(yao)使(shi)濾(lv)光(guang)片(pian)的(de)顏(yan)色(se)與(yu)待(dai)測(ce)溶(rong)液(ye)的(de)顏(yan)色(se)為(wei)互(hu)補(bu)色(se)呢(ne)？這(zhe)是(shi)因(yin)為(wei)濾(lv)光(guang)片(pian)和(he)有(you)色(se)溶(rong)液(ye)具(ju)有(you)相(xiang)似(si)的(de)透(tou)光(guang)特(te)性(xing)
，與(yu)它(ta)們(men)本(ben)身(shen)顏(yan)色(se)相(xiang)同(tong)的(de)色(se)光(guang)，能(neng)夠(gou)最(zui)大(da)限(xian)度(du)地(di)透(tou)過(guo)。而(er)與(yu)它(ta)們(men)本(ben)身(shen)顏(yan)色(se)成(cheng)互(hu)補(bu)的(de)色(se)光(guang)都(dou)能(neng)被(bei)最(zui)大(da)地(di)吸(xi)收(shou)。