一、概要
  硝基呋喃類藥物因有非常好的抗菌作用和藥動力學的特性，曾經被廣泛應用，作為禽類、水shui產chan和he豬zhu促cu生sheng長chang的de添tian加jia劑ji。但dan在zai長chang時shi間jian的de實shi驗yan研yan究jiu過guo程cheng中zhong發fa現xian，硝xiao基ji呋fu喃nan類lei藥yao物wu和he代dai謝xie物wu均jun可ke以yi使shi實shi驗yan動dong物wu發fa生sheng癌ai變bian和he基ji因yin突tu變bian，正zheng因yin為wei如ru此ci才cai導dao致zhi此ci類lei藥yao物wu禁jin止zhi在zai治zhi療liao和he飼si料liao中zhong使shi用yong
  用來檢測呋喃西林代謝物的最常用方法是LC-UV
，LC-MS和LC-MS/MS。酶聯免疫方法結合了色譜技術，采用SEM衍yan生sheng物wu的de特te異yi性xing抗kang體ti
，具ju有you很hen高gao的de精jing確que度du和he靈ling敏min度du，較jiao低di的de操cao作zuo技ji術shu要yao求qiu和he短duan暫zan的de檢jian測ce時shi間jian
，檢jian測ce樣yang品pin量liang大da等deng特te點dian在zai檢jian測ce中zhong很hen好hao的de表biao現xian出chu來lai。    
  本試劑盒是應用ELISA技術研發而成的檢測產品，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。

二、試驗原理
 本試劑盒采用間接競爭ELISA方(fang)法(fa)，在(zai)酶(mei)標(biao)板(ban)微(wei)孔(kong)條(tiao)上(shang)預(yu)包(bao)被(bei)呋(fu)喃(nan)西(xi)林(lin)代(dai)謝(xie)物(wu)抗(kang)原(yuan)，樣(yang)品(pin)殘(can)留(liu)的(de)呋(fu)喃(nan)西(xi)林(lin)代(dai)謝(xie)物(wu)和(he)微(wei)孔(kong)條(tiao)上(shang)預(yu)包(bao)被(bei)的(de)抗(kang)原(yuan)競(jing)爭(zheng)抗(kang)呋(fu)喃(nan)西(xi)林(lin)代(dai)謝(xie)物(wu)抗(kang)體(ti)
，加(jia)入(ru)酶(mei)標(biao)二(er)抗(kang)後(hou)
，經(jing)TMB底(di)物(wu)顯(xian)色(se)，樣(yang)品(pin)吸(xi)光(guang)度(du)值(zhi)與(yu)其(qi)殘(can)留(liu)物(wu)呋(fu)喃(nan)西(xi)林(lin)代(dai)謝(xie)物(wu)呈(cheng)負(fu)相(xiang)關(guan)，與(yu)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)比(bi)較(jiao)再(zai)乘(cheng)以(yi)其(qi)對(dui)應(ying)的(de)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)，即(ji)可(ke)得(de)出(chu)樣(yang)品(pin)中(zhong)呋(fu)喃(nan)西(xi)林(lin)代(dai)謝(xie)物(wu)的(de)含(han)量(liang)。
三
、適用範圍
 可定性、定量檢測動物組織（雞、豬），蜂蜜樣品中的呋喃西林代謝物的殘留量。
四、交叉反應率
呋喃西林代謝物……………………………………   100%
呋喃它酮代謝物…………………………………小於 0.1%
呋喃妥因代謝物 …………………………………小於 0.1%
呋喃唑酮代謝物………………………………………小於0.1%

五、檢測步驟
測定前應須知：
 1
、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
 2
、使用之後立即將所有試劑放回2～8℃。
 3、在ELISA分析中的再現性
，很大程度上取決於洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
 4
、在所有恒溫孵育過程中
，避免光線照射
，用蓋板膜封住微孔板。
 操作步驟：
 1、將所需試劑從冷藏環境中取出，置於室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
 2
、取出需要數量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存於2～8℃。
 3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
 4、編號：將樣品和標準品對應微孔按序編號，每個樣品和標準品做2孔平行
，並記錄標準孔和樣品孔所在的位置。
 5
、加標準品/樣本：加標準品/樣本50l/孔到對應的微孔中
，再加入呋喃西林代謝物酶標物50l/孔
，再加入呋喃西林代謝物抗試劑50ul/孔輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置25℃避光環境中反應30min。
 6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩幹，用洗滌工作液250l/孔，充分洗滌4~5次，每次間隔10s，用吸水紙拍幹（拍幹後未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
 7
、顯色：加入底物液A液50l/孔
，再加底物液B液50l/孔
，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置25℃避光環境中反應15～20min。
 8

、測定：加入終止液50l/孔
，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀於450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內讀完數據），測定每孔OD值。(若無酶標儀
，則不加終止液用目測法可進行判定)。

六
、檢測方法靈敏度、準確度

、精密度
試劑盒靈敏度：0.05ppb
檢測限：
組織、蜂蜜樣品檢測下限…………………………………0.1ppb
回收率：
水產
、肌肉

、肝髒蜂蜜組織 …………………………  80±15%
精密度：試劑盒的變異係數均小於10%

七、注意事項
 1
、室溫低於20℃或試劑及樣品沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
 2
、在洗板過程中如果出現板孔幹燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重複性不好的現象。所以洗板拍幹後應立即進行下一步操作。
 3
、每加一種試劑前需將其搖勻。
 4、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
 5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
 6、儲存條件保存試劑盒於2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
 7、試劑變質的跡象發色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小於0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。
 8、在加入底物液A液和底物液B液後，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺
，可延長反應時間到25min（或更長）
，但不得超過30min。反之
，則減短反應時間。
 9

、該試劑盒最佳反應溫度為25℃
，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。

八
、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒於2~8℃。
保存期：該產品有效期為12個月。