黴菌菌絲比較粗大（菌絲和孢子的直徑達到3-10μm），通常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍
，因而可用低倍、高(gao)倍(bei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)。黴(mei)菌(jun)菌(jun)絲(si)細(xi)胞(bao)容(rong)易(yi)收(shou)縮(suo)變(bian)形(xing)
，孢(bao)子(zi)容(rong)易(yi)飛(fei)揚(yang)，在(zai)製(zhi)備(bei)黴(mei)菌(jun)標(biao)本(ben)時(shi)
，常(chang)用(yong)乳(ru)酸(suan)石(shi)炭(tan)酸(suan)溶(rong)液(ye)作(zuo)為(wei)介(jie)質(zhi)，具(ju)有(you)不(bu)使(shi)細(xi)胞(bao)變(bian)形(xing)，可(ke)殺(sha)菌(jun)防(fang)腐(fu)，不(bu)易(yi)幹(gan)燥(zao)
，能(neng)保(bao)持(chi)較(jiao)長(chang)時(shi)間(jian)等(deng)優(you)點(dian)。

一

、實驗目的
1. 學習並掌握觀察黴菌形態的基本方法；
2. 了解常見黴菌（根黴、毛黴、曲黴
、青黴、紅曲黴、白地黴）的基本形態特征。

二、實驗材料
1. 菌種：根黴（Rhizopus sp.）、毛黴（Mucor sp.）、曲黴（Aspergillus sp.）、青黴（Penicillium sp.）、紅曲黴（Monascus sp.）的平板培養物，白地黴（Geotrichum candidum）搖瓶培養液。
2. 培養基：土豆瓊脂培養基（PDA）或察氏培養基。
3. 溶液或試劑：乳酸石炭酸棉藍染色液。
4. 其他：無菌吸管

，平皿，載玻片
，蓋玻片，解剖針
，顯微鏡等。

三、實驗原理
黴菌菌絲比較粗大（菌絲和孢子的直徑達到3-10μm），通常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因而可用低倍
、高(gao)倍(bei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)。黴(mei)菌(jun)菌(jun)絲(si)細(xi)胞(bao)容(rong)易(yi)收(shou)縮(suo)變(bian)形(xing)，孢(bao)子(zi)容(rong)易(yi)飛(fei)揚(yang)
，在(zai)製(zhi)備(bei)黴(mei)菌(jun)標(biao)本(ben)時(shi)，常(chang)用(yong)乳(ru)酸(suan)石(shi)炭(tan)酸(suan)溶(rong)液(ye)作(zuo)為(wei)介(jie)質(zhi)，具(ju)有(you)不(bu)使(shi)細(xi)胞(bao)變(bian)形(xing)，可(ke)殺(sha)菌(jun)防(fang)腐(fu)，不(bu)易(yi)幹(gan)燥(zao)
，能(neng)保(bao)持(chi)較(jiao)長(chang)時(shi)間(jian)等(deng)優(you)點(dian)。若加入棉藍
，又具有一定的染色效果。
黴菌的有些結構在製片過程中易被破壞
，影響觀察
，可采用載片培養法。此法便於直接在顯微鏡下觀察，尤其適用於根黴的假根、曲黴的足細胞及分生孢子鏈等結構的著生和生長情況的觀察。並且還可以在同一標本上觀察到微生物發育的不同階段的形態。

四、操作步驟
（一）一般觀察法：
1. 點種培養：用接種針沾取斜麵少許孢子在無菌的察氏培養基中央穿刺接種（倒置培養皿穿刺接種），30℃下培養7-10天，形成巨大菌落培養物。
2. 直接製片：在zai載zai玻bo片pian中zhong央yang加jia一yi滴di乳ru酸suan石shi炭tan酸suan棉mian藍lan染ran色se液ye於yu潔jie淨jing，打da開kai黴mei菌jun平ping板ban培pei養yang物wu，用yong解jie剖pou針zhen從cong菌jun落luo的de邊bian緣yuan挑tiao取qu少shao量liang帶dai有you孢bao子zi的de菌jun絲si，放fang入ru載zai玻bo片pian的de染ran液ye中zhong
，細xi心xin地di把ba菌jun絲si挑tiao散san開kai
，加jia蓋gai玻bo片pian，注zhu意yi不bu要yao產chan生sheng氣qi泡pao，置zhi於yu顯xian微wei鏡jing下xia觀guan察cha，菌jun絲si呈cheng蘭lan色se
，顏yan色se的de深shen度du隨sui菌jun齡ling的de增zeng加jia而er減jian弱ruo。
觀察根黴時，注意觀察其菌絲有無橫隔、假根
、孢子囊柄、孢子囊
、囊軸、囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子。
觀察毛黴時，注意觀察其菌絲無橫隔、孢子囊柄、囊軸、孢子囊孢子及後垣孢子。
觀察曲黴時
，注意觀察其菌絲有橫隔、足細胞、分生孢子梗、頂囊、小梗（形狀、層數及著生情況）、分生孢子。
觀察青黴時
，注意觀察其菌絲有橫隔、分生孢子梗、帚狀枝（小梗的輪數及對稱性）、分生孢子。
觀察紅曲黴時，注意觀察其菌絲有橫隔、分生孢子著生情況、閉囊殼
、子囊孢子。
（二）載玻片濕室培養觀察法
也(ye)稱(cheng)載(zai)片(pian)培(pei)養(yang)法(fa)，用(yong)無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)將(jiang)培(pei)養(yang)基(ji)瓊(qiong)脂(zhi)薄(bo)層(ceng)置(zhi)於(yu)載(zai)玻(bo)片(pian)上(shang)
，接(jie)種(zhong)後(hou)蓋(gai)上(shang)蓋(gai)玻(bo)片(pian)培(pei)養(yang)
，黴(mei)菌(jun)即(ji)在(zai)載(zai)玻(bo)片(pian)和(he)蓋(gai)玻(bo)片(pian)之(zhi)間(jian)的(de)有(you)限(xian)空(kong)間(jian)內(nei)沿(yan)蓋(gai)玻(bo)片(pian)橫(heng)向(xiang)生(sheng)長(chang)。培(pei)養(yang)一(yi)定(ding)時(shi)間(jian)後(hou)
，將(jiang)載(zai)玻(bo)片(pian)上(shang)的(de)培(pei)養(yang)物(wu)置(zhi)於(yu)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)。載(zai)片(pian)培(pei)養(yang)法(fa)製(zhi)備(bei)的(de)標(biao)本(ben)片(pian)可(ke)直(zhi)接(jie)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，這(zhe)種(zhong)培(pei)養(yang)觀(guan)察(cha)方(fang)法(fa)保(bao)持(chi)了(le)黴(mei)菌(jun)的(de)自(zi)然(ran)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)，尤(you)其(qi)適(shi)用(yong)於(yu)根(gen)黴(mei)的(de)假(jia)根(gen)
、匍匐菌絲，曲黴的足細胞的觀察，並且還可在同一標本片上觀察黴菌的不同生長階段的形態。
載玻片濕室培養觀察法具體操作：
1. 準備濕室：在培養皿底部鋪一張圓形濾紙片，濾紙片上依次放上“U”形載玻片擱架
、載玻片、蓋玻片（兩片），蓋上皿蓋

，外用紙包紮
，高壓滅菌（9.8×104Pa）20分鍾後，60℃烘箱幹燥，備用。
2. 取菌接種：用(yong)接(jie)種(zhong)環(huan)挑(tiao)取(qu)少(shao)量(liang)待(dai)觀(guan)察(cha)的(de)黴(mei)菌(jun)孢(bao)子(zi)，置(zhi)於(yu)濕(shi)室(shi)的(de)載(zai)玻(bo)片(pian)上(shang)
，每(mei)張(zhang)載(zai)玻(bo)片(pian)可(ke)接(jie)同(tong)一(yi)菌(jun)種(zhong)的(de)孢(bao)子(zi)兩(liang)處(chu)。接(jie)種(zhong)時(shi)隻(zhi)要(yao)將(jiang)帶(dai)菌(jun)的(de)接(jie)種(zhong)環(huan)在(zai)載(zai)玻(bo)片(pian)上(shang)輕(qing)輕(qing)碰(peng)幾(ji)下(xia)即(ji)可(ke)。
（接種量要少，以免培養後菌絲過於稠密而影響觀察）
3. 加培養基：用無菌細口滴管吸取少許融化並冷卻至45℃的培養基
，滴加到載玻片的接種處，培養基應滴得圓而薄，直徑約為0.5cm（滴加量一般以1/2小滴為宜），注意無菌操作。
4. 加蓋玻片：在zai培pei養yang基ji未wei徹che底di凝ning固gu前qian
，用yong無wu菌jun鑷nie子zi將jiang皿min內nei的de蓋gai玻bo片pian蓋gai在zai瓊qiong脂zhi薄bo層ceng上shang
，用yong鑷nie子zi輕qing壓ya蓋gai玻bo片pian，使shi蓋gai玻bo片pian和he載zai玻bo片pian之zhi間jian的de距ju離li相xiang當dang接jie近jin，但dan不bu能neng壓ya扁bian。
（蓋玻片不能緊貼載玻片
，要彼此留有小縫隙，一是為了通氣，二是使各部分結構平行排列，易於觀察。）
5. 倒保濕劑：每皿倒入約3mL 20%的無菌甘油，使皿內濾紙完全濕潤
，以保持皿內濕度，蓋上皿蓋。製成載玻片濕室
，28℃培養。
觀察：將培養好的載玻片取出，置於顯微鏡下直接觀察。