一、目的

掌握還原糖和總糖測定的基本原理，學習比色法測定還原糖的操作方法和分光光度計的使用。

二
、原理

還(hai)原(yuan)糖(tang)的(de)測(ce)定(ding)是(shi)糖(tang)定(ding)量(liang)測(ce)定(ding)的(de)基(ji)本(ben)方(fang)法(fa)。還(hai)原(yuan)糖(tang)是(shi)指(zhi)含(han)有(you)自(zi)由(you)醛(quan)基(ji)或(huo)酮(tong)基(ji)的(de)糖(tang)類(lei)，單(dan)糖(tang)都(dou)是(shi)還(hai)原(yuan)糖(tang)，雙(shuang)糖(tang)和(he)多(duo)糖(tang)不(bu)一(yi)定(ding)是(shi)還(hai)原(yuan)糖(tang)，其(qi)中(zhong)乳(ru)糖(tang)和(he)麥(mai)芽(ya)糖(tang)是(shi)還(hai)原(yuan)糖(tang)
，蔗(zhe)糖(tang)和(he)澱(dian)粉(fen)是(shi)非(fei)還(hai)原(yuan)糖(tang)。利(li)用(yong)糖(tang)的(de)溶(rong)解(jie)度(du)不(bu)同(tong)，可(ke)將(jiang)植(zhi)物(wu)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)單(dan)糖(tang)
、雙(shuang)糖(tang)和(he)多(duo)糖(tang)分(fen)別(bie)提(ti)取(qu)出(chu)來(lai)，對(dui)沒(mei)有(you)還(hai)原(yuan)性(xing)的(de)雙(shuang)糖(tang)和(he)多(duo)糖(tang)，可(ke)用(yong)酸(suan)水(shui)解(jie)法(fa)使(shi)其(qi)降(jiang)解(jie)成(cheng)有(you)還(hai)原(yuan)性(xing)的(de)單(dan)糖(tang)進(jin)行(xing)測(ce)定(ding)，再(zai)分(fen)別(bie)求(qiu)出(chu)樣(yang)品(pin)中(zhong)還(hai)原(yuan)糖(tang)和(he)總(zong)糖(tang)的(de)含(han)量(liang)（還原糖以葡萄糖含量計）。

還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產物，3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定範圍內，還原糖的量與棕紅色物質顏色的深淺成正比關係，利用分光光度計，在540nm波bo長chang下xia測ce定ding光guang密mi度du值zhi，查zha對dui標biao準zhun曲qu線xian並bing計ji算suan


，便bian可ke求qiu出chu樣yang品pin中zhong還hai原yuan糖tang和he總zong糖tang的de含han量liang。由you於yu多duo糖tang水shui解jie為wei單dan糖tang時shi
，每mei斷duan裂lie一yi個ge糖tang苷gan鍵jian需xu加jia入ru一yi分fen子zi水shui
，所suo以yi在zai計ji算suan多duo糖tang含han量liang時shi應ying乘cheng以yi0.9。


 

三、實驗材料、主要儀器和試劑

1. 實驗材料

小麥麵粉；精密pH 試紙。

2. 主要儀器

（1）具塞玻璃刻度試管：20mL×11

（2）大離心管：50mL×2

（3）燒杯：100mL×1

（4）三角瓶：100mL×1

（5）容量瓶：100mL×3

（6）刻度吸管：1mL×1
；2mL×2；10mL×1

（7）恒溫水浴鍋

（8）沸水浴

（9）離心機

（10）扭力天平

（11）分光光度計

3. 試劑

（1）1mg/mL 葡萄糖標準液

準確稱取80℃烘至恒重的分析純葡萄糖100mg
，置於小燒杯中，加少量蒸餾水溶解後
，轉移到100mL 容量瓶中
，用蒸餾水定容至100mL，混勻


，4℃冰箱中保存備用。

（2）3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑

將6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加5g結晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻後加蒸餾水定容至1000mL
，貯於棕色瓶中備用。

（3）碘-碘化鉀溶液：稱取5g碘和10g碘化鉀，溶於100mL蒸餾水中。

（4）酚酞指示劑：稱取0.1g酚酞，溶於250mL70%乙醇中。

（5）6M HCl 和6M NaOH各100mL。

四、操作步驟

1. 製作葡萄糖標準曲線

取7支20mL 具塞刻度試管編號，按表1分別加入濃度為1mg/mL 的葡萄糖標準液
、蒸餾水和3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑
，配成不同葡萄糖含量的反應液。

                             表1 葡萄糖標準曲線製作

2. 樣品中還原糖和總糖的測定

（1）還原糖的提取

準確稱取3.00g 食用麵粉，放入100mL 燒杯中，先用少量蒸餾水調成糊狀
，然後加入50mL 蒸餾水，攪勻
，置於50℃恒溫水浴中保溫20min，使還原糖浸出。將浸出液（含沉澱）轉移到50mL 離心管中
，於4000r/min下離心5min,沉澱可用20mL 蒸餾水洗一次
，再離心，將二次離心的上清液收集在100mL容量瓶中
，用蒸餾水定容至刻度，混勻，作為還原糖待測液。

（2）總糖的水解和提取

準確稱取1.00g食用麵粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸餾水及10mL 6M HCl，置沸水浴中加熱水解30min（水解是否完全可用碘-碘化鉀溶液檢查）。待三角瓶中的水解液冷卻後，加入1 滴酚酞指示劑，用6mol/LNaOH 中和至微紅色，用蒸餾水定容在100mL容量瓶中，混勻。將定容後的水解液過濾，取濾液10mL

，移入另一100mL容量瓶中定容
，混勻，作為總糖待測液。

（3）顯色和比色

取4支20mL 具塞刻度試管，編號
，按表2 所示分別加入待測液和顯色劑，空白調零可使用製作標準曲線的0號管。加熱、定容和比色等其餘操作與製作標準曲線相同。

五
、結果與計算：

計算出7、8號管光密度值的平均值和9

、10管光密度值的平均值，在標準曲線上分別查出相應的還原糖毫克數
，按下式計算出樣品中還原糖和總糖的百分含量。