這些細則要遵守
1.實驗室參加實驗的人員,必須整潔、文明、肅靜。
2.進(jin)入(ru)實(shi)驗(yan)室(shi)的(de)所(suo)有(you)人(ren)員(yuan)必(bi)須(xu)遵(zun)守(shou)實(shi)驗(yan)室(shi)的(de)規(gui)章(zhang)製(zhi)度(du),實(shi)驗(yan)室(shi)為(wei)無(wu)煙(yan)實(shi)驗(yan)室(shi),嚴(yan)禁(jin)在(zai)實(shi)驗(yan)室(shi)內(nei)吸(xi)煙(yan),不(bu)得(de)吃(chi)口(kou)香(xiang)糖(tang),不(bu)得(de)隨(sui)地(di)吐(tu)痰(tan)和(he)亂(luan)扔(reng)紙(zhi)張(zhang)。
3.canjiashiyanderenyuanzaishiyanguochengzhong,yaozhuyibaochishineiweishengjilianghaodeshiyanzhixu。shiyanjieshuhou,bixujishizuohaoqingjiezhengligongzuo,shiyanrenyuanbixujianggongzuotai、儀器設備、器qi皿min等deng清qing潔jie幹gan淨jing,並bing將jiang儀yi器qi設she備bei和he器qi皿min按an規gui定ding歸gui類lei放fang好hao,不bu能neng任ren意yi搬ban動dong和he堆dui放fang。所suo有you實shi驗yan所suo產chan生sheng的de廢fei物wu放fang入ru廢fei物wu箱xiang內nei,並bing及ji時shi處chu理li,清qing理li好hao現xian場chang。
4.在每次實驗結束後,實驗人員必須對實驗室進行清掃。
5.實驗室主任負責安排日常的衛生清掃、儀器設備的維護保養工作。實驗室成員有參加本室清掃及維護保養儀器設備的義務。
6.實驗室內各種設備、物品擺放要合理、整齊,與實驗無關的物品禁止存放在實驗室。
7.實驗室為保持室內地麵、實驗台、設備和工作環境的幹淨整潔,必須堅持每天一小掃,每周一大掃的衛生製度,每年徹底清掃1~2次。
8.實驗室內的儀器設備、各人實驗台架、凳和各種設施擺放整齊,並經常擦拭,保持無汙漬、無灰塵。
9.衛生責任人應對實驗室桌麵、地麵及時打掃。注意保持室內場地和儀器設備的整潔衛生。
10.實驗室內雜物要清理幹淨,有機溶劑、腐蝕性液體的廢液必須盛於廢液桶內,貼上標簽,統一回收處理。
11.保持室內地麵無灰塵、無積水、無紙屑等垃圾。
12.實驗室整體布局須合理有序,地麵、門窗等管道線路和開關板上無積灰與蛛網。
13.下班前必須搞好清潔衛生,關好門窗、水龍頭,斷開電源,清理場地。
14.不得將任何與實驗無關的物品帶入實驗室。
15.對於亂擺放的實驗藥品、儀器等,實驗室負責人有權沒收或當做廢品處理,實驗工作人員不得有任何異議。
清洗實驗室器皿標準操作規程
目的:去除器皿上的殘餘物,使器皿可重複使用。
範圍:化學試驗室樣品處理過程中使用的器具,如剪鉗、刀片、塑料籃、玻璃容器、陶瓷坩鍋、微波消解罐等。
樣品前處理的工具
1、yongshazhiqingqingdamodiaojinshugongjubiaomiandexiuzi,buyaoguoduyongli,yimianmodiaobaohutuceng,ranhou,yongtuozhimianzhanwushuiyichuncashi,zhituozhimianshangkanbudaowuziweizhi。
2、剪鉗,刀片,研缽使用前必須用脫脂棉蘸無水乙醇擦拭接觸樣品部位2~3遍,脫脂棉上看不到汙漬方可使用。
3、裝樣品的塑料籃每月至少用洗潔精清洗一次,如有明顯斑點、粉塵、則應立即清洗。
4、樣品拆分台麵每天定時清理,所有工具應整齊,按類別擺放,台麵用紙巾擦拭,應無黑斑。
5、玻璃容器(燒杯,試管,漏鬥,三角燒瓶,培養皿)、玻璃量器(容量瓶,量筒,移液管)、新購置的玻璃器皿應在硝酸(10%)溶液內先浸泡6小時方可使用。
6、 應把玻璃器皿內的溶液倒入廢液桶,自來水衝洗一遍後,方可收集一起浸泡,以免交叉汙染。
7、玻璃容器,玻璃量器盡可能分開用自來水浸泡,且讓水能完全進入器皿中,不應留有氣泡。
8、燒杯,試管,漏鬥,三角燒瓶,培養皿等可用瓶刷沾上洗衣粉或洗潔精刷洗,然後用自來水充分衝洗幹淨。玻璃量器不可刷洗。
9、玻璃量器(容量瓶,量筒,移液管)應用上洗衣粉或洗潔精涮洗,最好用熱水(60~70℃)。
10、boliqiminjingxidihou,ruoneibideshuishijunyunfenbuchengyiboceng,biaoshiyougouwanquanxijing,ruoguayoushuizhu,zehaixuyongxidiyejinpaoshuxiaoshi,ranhouzaiyongzilaishuichongfenchongxi。
洗滌液的配製與使用
洗滌液的配製洗滌液分濃溶液與稀溶液兩種,配方如下:
①濃溶液:
重鉻酸鈉或重鉻酸鉀(分析純)50g
自來水 150mL
濃硫酸(分析純) 800mL
②稀溶液:
重鉻酸鈉或重鉻酸鉀(分析純) 50g
自來水 850mL
濃硫酸(分析純) 100mL
配(pei)法(fa)都(dou)是(shi)將(jiang)重(zhong)鉻(ge)酸(suan)鈉(na)或(huo)重(zhong)鉻(ge)酸(suan)鉀(jia)先(xian)溶(rong)解(jie)於(yu)自(zi)來(lai)水(shui)中(zhong),可(ke)慢(man)慢(man)加(jia)溫(wen),使(shi)溶(rong)解(jie),冷(leng)卻(que)後(hou)徐(xu)徐(xu)加(jia)入(ru)濃(nong)硫(liu)酸(suan),邊(bian)加(jia)邊(bian)攪(jiao)動(dong)。配(pei)好(hao)後(hou)的(de)洗(xi)滌(di)液(ye)應(ying)是(shi)棕(zong)紅(hong)色(se)或(huo)桔(ju)紅(hong)色(se)。貯(zhu)存(cun)於(yu)有(you)蓋(gai)容(rong)器(qi)內(nei)。
daihaochangxiangjiaoshoutao,chuquqiminneideshui,manmandaoruxidiye,zhuandongqimin,shixiyechongfenjinrunbuganjingdeqibi,shufenzhonghoubaxiyedaohuixiyepingzhong,yongzilaishuichongxiqimin。ruoqibishangzhanyoushaoliangcanzha,kexianjiangxidiyejiare,加入少量洗液浸泡殘渣。
注意: 本操作有危險性!
1.洗滌液中的硫酸具有強腐蝕作用,千萬別忘記將器皿取出衝洗;洗滌液若沾汙衣服和皮膚應立即用水洗,再用蘇打水或氨液洗;如果濺在桌椅上,應立即用水洗去或濕布抹去;
2.玻璃器皿投入前,應盡量幹燥,避免洗滌液稀釋;
3.此液的使用僅限於玻璃和瓷質器皿,不適用於金屬和塑料器皿;
4.有(you)大(da)量(liang)有(you)機(ji)質(zhi)的(de)器(qi)皿(min)應(ying)先(xian)行(xing)擦(ca)洗(xi),然(ran)後(hou)再(zai)用(yong)洗(xi)滌(di)液(ye),這(zhe)是(shi)因(yin)為(wei)有(you)機(ji)質(zhi)過(guo)多(duo),會(hui)加(jia)快(kuai)洗(xi)滌(di)液(ye)失(shi)效(xiao)。此(ci)外(wai),洗(xi)滌(di)液(ye)雖(sui)為(wei)很(hen)強(qiang)的(de)去(qu)汙(wu)劑(ji),但(dan)也(ye)不(bu)是(shi)所(suo)有(you)的(de)汙(wu)跡(ji)都(dou)可(ke)清(qing)除(chu);
5.盛洗滌液的容器應始終加蓋,以防氧化變質;
6.洗滌液可反複使用,但當其變為墨綠色時即已失效,不能再用。
經洗滌過的玻璃容器倒置,至無水滴滴下用硝酸(10%)溶液浸泡至少12小時,用水涮洗後方可使用。浸泡溶液每星期檢測一次Pb Cr Cd Hg含量,超過1ppm則更換溶液。
玻璃量器(容量瓶,量筒,移液管) 用硝酸(30%)溶液浸泡至少12小時後,用DI水涮洗後,在無塵處倒置晾幹水分,自然幹燥。
玻璃容器(燒杯,試管,漏鬥,三角燒瓶,培養皿) 放在電烘箱中烘幹,烘箱溫度為105℃,保持通風烘1~2h即可。
清洗好的玻璃儀器要分門別類地存放,以便取用。
1 塑料器皿
塑料漏鬥參照玻璃漏鬥清洗步驟,可與玻璃漏鬥一同清洗。
聚四氟乙烯燒杯和微波消解罐須與玻璃器皿分開處理,先用自來水衝洗幹淨後,再用配製好的酸液浸泡至少12h。
酸液配製方法:500mL硝酸+100mL冰乙酸,水定容於1000mL容量瓶。
酸液每半個月檢測一次Pb,超過5ppm則更換溶液
注意:勿用毛刷刷洗塑料器皿!
2 陶瓷坩鍋
可參照聚四氟乙烯燒杯和微波消解罐清洗方法。
若依然不能清洗幹淨,將陶瓷坩鍋置於電熱板上加熱至無水份後,放入馬氟爐中,保持800℃烤2h,取出冷卻。
清洗好的陶瓷坩鍋內壁應潔白無深色斑點。
3 臨床基因擴增(PCR)檢驗實驗室規範
為避免汙染,必須嚴格遵循《臨床基因擴增檢驗實驗室設置標準》設置臨床基因擴增檢驗實驗室。
4 試劑貯存和準備區
貯存試劑和用於標本製備的材料應直接運送至試劑貯存和準備區,不能經過產物分析區。
含反應混合液的離心管或試管在冰凍前都應快速離心數秒。
主反應混合液的組成成份尤其是聚合酶的適用性和穩定性通過預試驗來檢查,評價結果必須有書麵報告。
在整個本區的實驗操作過程中,操作者必須戴手套,並經常更換。
嚴禁用嘴吸取液體,加樣器和吸頭等必須經高壓處理。
工作結束後必須立即對工作區進行清潔。
5 標本製備區
正確使用加樣器。由於在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的汙染,所以應避免在本區內不必要的走動。
用過的加樣器吸頭必須放入專門的消毒容器內。實驗室桌椅表麵每次工作後都要清潔,實驗材料如出現外濺,分別處理並作記錄。
對實驗台適當的紫外照射(254nm波長,與工作台麵近距離)適合於滅活去汙染。可移動紫外線管燈可用來確保工作後對實驗台麵的充分照射。
樣本處理對核酸擴增有很大影響,必須使用有效的核酸提取方法,可在開展臨床標本檢測前對提取方法進行評價。
用於RNA擴增檢測的樣本製備好以後,應立即進行cDNA合成,因為cDNA鏈較RNA穩定,保存相對容易。為保證逆轉錄反應的需要,應在標本製備區設置一個以上的溫育裝置。
6 cDNA合成的理想溫度依所使用的酶而定,傾向於使用一步法:
即使用在擴增反應緩衝液條件下具有逆轉錄活性的熱穩定的DNA聚合酶進行逆轉錄,其較cDNA合成後再開蓋以調節緩液或加入聚合酶進行擴增發生汙染的可能性降低。
待測RNA的cDNA拷貝須保存在標本製備區,不得在本區對樣本進行PCR擴增。
7 擴增區
不能從本區再進入任何“上遊”區域,可降低本區的氣壓以避免氣溶膠從本區漏出。
為避免氣溶膠所致的汙染,應盡量減少在本區內的走動。如有加樣則應在超淨台內進行。
打開預處理過的反應混合液時必須防止液體濺出,尤其是在巢式擴增步驟之間。一個簡單的方法是在打開反應管前快速離心數秒。
完成操作及每天工作後都必須對實驗室台麵進行清潔和消毒,紫外照射方法與前麵區域相同。如有溶液濺出,必須處理並作出記錄。
8擴增產物分析區
下述操作在本區內進行:擴增片段的測定。
核酸擴增後產物的分析方法多種多樣(如,膜上或微孔板上探針雜交方法、瓊脂糖凝膠電泳等)
目前國內的商品試劑盒絕大部分均采用非同位素標記的微孔板上探針雜交方法,PCR-ELISA方法,也有膜上探針雜交方法。
注:本區是最主要的擴增產物汙染來源,因此必須注意避免通過本區的物品及工作服將擴增產物帶出。
小結
嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)實(shi)驗(yan)室(shi)清(qing)潔(jie)衛(wei)生(sheng)要(yao)求(qiu)開(kai)展(zhan)各(ge)類(lei)實(shi)驗(yan),是(shi)保(bao)證(zheng)實(shi)驗(yan)有(you)效(xiao)運(yun)行(xing)與(yu)實(shi)驗(yan)員(yuan)安(an)全(quan)工(gong)作(zuo)的(de)前(qian)提(ti)。要(yao)不(bu)斷(duan)完(wan)善(shan)實(shi)驗(yan)室(shi)衛(wei)生(sheng)管(guan)理(li)體(ti)係(xi),加(jia)強(qiang)實(shi)驗(yan)員(yuan)的(de)安(an)全(quan)意(yi)識(shi),保(bao)護(hu)員(yuan)工(gong)的(de)人(ren)身(shen)安(an)全(quan),確(que)保(bao)實(shi)驗(yan)室(shi)工(gong)作(zuo)在(zai)清(qing)潔(jie)、安全、有序的條件下進行。
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