隨著蛋白質研究變得更加複雜，定量方法開始發展。 1976年，布拉德福德分析是在天然溶液中研究更多蛋白質並使用清潔劑或其他還原劑來保持蛋白質可溶性的墊腳石。然後將Lowry試驗再培養至二辛可寧酸（BCA）測定（也稱為Smith測定），這使其更適合用於蛋白質研究的溶劑中。

然而
，蛋白質定量的最新創新已存在超過25年。小編將概述當前的蛋白質檢測和定量方法，並討論一種新的基於紅外的技術，用於快速準確地測量痕量蛋白質。

當前現狀

用於蛋白質和/或肽測定的一些最常用的方法包括氨基酸分析，紫外（UV）光譜
，比色測定，十二烷基硫酸鈉  -聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）和光密度測定，基於免疫學的方法和質譜法。

氨基酸分析

氨基酸分析測量蛋白質中每種氨基酸的量，並被認為是蛋白質定量的黃金標準方法。該方法可以檢測大多數氨基酸，檢測範圍為1 mg苯基硫代氨基甲酰基（PTC）和5 mg至10 mg茚三酮。該方法不像其他測定那樣廣泛使用，因為它昂貴
，緩慢且需要技術專業知識。因此

，氨基酸分析實驗室經常被用作核心設施。

紫外光譜法

紫外光譜法測量樣品中芳香族氨基酸的吸光度，是用於蛋白質檢測和定量的最常用方法。可以測量任何類型的蛋白質，範圍從205nm處的1mg至100mg和280nm處的20mg至1,000mg。紫外分光光度計相對便宜且易於使用。

比色分析法

通過顯色試劑測定蛋白質濃度的比色測定。最常見的比色測定是染料結合和熒光方法。熒光方法包括NanoOrange試劑盒（在570nm處10ng至10mg）和CBQCA（在550nm處10ng至150mg），其通常比染料結合方法更敏感
，包括Bradford（1mg至50mg）和Bicinchoninic。 。酸（BCA
； 0.2）。鎂至50毫克）。

daduoshudanbaizhicedingduirongjitiaojianmingan。youguantaojianhehuanchongzujiandegengduoxinxi
，qingfangwenzhizaoshangdewangzhan。gaixinxishiyanjiurenyuannenggoushiyongdanbaizhichendianhuoxiaoguimoningjiaoguolvquchuqianzaideganraowuzhi。

SDS-PAGE和密度測定法

SDS是(shi)一(yi)種(zhong)陰(yin)離(li)子(zi)洗(xi)滌(di)劑(ji)，可(ke)使(shi)蛋(dan)白(bai)質(zhi)線(xian)性(xing)化(hua)並(bing)用(yong)負(fu)電(dian)荷(he)覆(fu)蓋(gai)它(ta)們(men)。然(ran)後(hou)在(zai)電(dian)泳(yong)期(qi)間(jian)通(tong)過(guo)大(da)小(xiao)分(fen)離(li)蛋(dan)白(bai)質(zhi)，並(bing)且(qie)可(ke)以(yi)使(shi)用(yong)定(ding)量(liang)光(guang)密(mi)度(du)測(ce)定(ding)法(fa)測(ce)量(liang)蛋(dan)白(bai)質(zhi)。對(dui)於(yu)銀(yin)染(ran)色(se)，SDS-PAGE蛋白質測定範圍為每條1ng至5ng，對於考馬斯藍

，SDS-PAGE蛋白質測定範圍為每條40ng至50ng。

基於免疫學的方法

例如定量酶聯免疫吸附測定（ELISA），Westernyinjihebandianyinji
，shiyongyudanbaizhijianceheceliangdefeichangchangjianqielingmindeceding，qiyilaiyushiyongkangtijinxingdanbaizhibuhuo。zhexiefangfazhongshiyongdekangtizhenduigouxianghexianxingbiaowei。duiyudanbaizhiyinji
，zhongyaodeshishiyongzhenduitaihuobianxingdanbaizhichanshengdekangti，yinweiSDS使抗原變性。

質譜法

質(zhi)譜(pu)法(fa)通(tong)常(chang)用(yong)於(yu)功(gong)能(neng)蛋(dan)白(bai)質(zhi)組(zu)學(xue)
，以(yi)測(ce)量(liang)複(fu)雜(za)生(sheng)物(wu)係(xi)統(tong)中(zhong)蛋(dan)白(bai)質(zhi)豐(feng)度(du)的(de)微(wei)小(xiao)變(bian)化(hua)，以(yi)響(xiang)應(ying)疾(ji)病(bing)進(jin)展(zhan)或(huo)藥(yao)物(wu)治(zhi)療(liao)等(deng)幹(gan)擾(rao)。然(ran)而(er)
，質(zhi)譜(pu)法(fa)可(ke)能(neng)昂(ang)貴(gui)且(qie)緩(huan)慢(man)

，並(bing)且(qie)需(xu)要(yao)專(zhuan)業(ye)知(zhi)識(shi)來(lai)運(yun)行(xing)儀(yi)器(qi)。此(ci)外(wai)
，質(zhi)譜(pu)儀(yi)可(ke)能(neng)無(wu)法(fa)完(wan)全(quan)量(liang)化(hua)。

新穎的檢測方法

EMD Millipore提供基於直接檢測傅裏葉變換紅外（FTIR）光譜儀的新蛋白質/肽定量方法。該係統能夠對蛋白質鏈中的酰胺鍵進行高精度紅外（IR）測量

，而不依賴於氨基酸組成
，染料結合特性或氧化還原電位。

蛋白質在IR光譜中由9個酰胺峰表示，並代表肽鍵的不同振動模式。特別是，酰胺I和酰胺II鍵jian的de獨du特te之zhi處chu在zai於yu即ji使shi在zai複fu雜za的de混hun合he物wu，還hai原yuan劑ji和he洗xi滌di劑ji存cun在zai下xia它ta們men的de信xin號hao強qiang度du和he純chun度du也ye是shi相xiang同tong的de。因yin此ci
，這zhe些xie頻pin帶dai用yong於yu測ce量liang。該gai係xi統tong的de準zhun確que性xing與yu氨an基ji酸suan分fen析xi的de準zhun確que性xing相xiang當dang

直接檢測係統包括蛋白質檢測技術和分析工具
，包括預先安裝在軟件上的BSA標準曲線。該測定僅需要2微升樣品，沉積在無測定卡上，置於儀器中然後測量。整個過程大約需要兩到三分鍾。

danbaizhijiancehedingliangshiyaowukaifaguochengdeguanjianzuchengbufen。youduozhongfangfakegongxuanze，meizhongfangfadouyouzijideyoushihetiaozhan，bingqiezaiweimeizhongyingyongxuanzezuijiafangfashixuyaokaolvxuduoyinsu。

蛋白質定量技術已經使用了半個多世紀
，但該領域相對停滯了超過25年。開發新工具對於為研究人員提供快速，易用的蛋白質檢測和定量方法至關重要。