利用超靈敏UPLC®-MS/MS對肌肉組織中的低濃度保泰鬆進行快速檢測和定量。

 

近(jin)來(lai)調(tiao)查(zha)結(jie)果(guo)顯(xian)示(shi)，在(zai)歐(ou)洲(zhou)的(de)牛(niu)肉(rou)製(zhi)品(pin)中(zhong)發(fa)現(xian)未(wei)經(jing)申(shen)報(bao)的(de)馬(ma)肉(rou)，這(zhe)一(yi)事(shi)件(jian)的(de)發(fa)生(sheng)迫(po)切(qie)要(yao)求(qiu)相(xiang)關(guan)企(qi)業(ye)和(he)監(jian)管(guan)機(ji)構(gou)對(dui)肉(rou)類(lei)和(he)肉(rou)製(zhi)品(pin)中(zhong)存(cun)在(zai)的(de)馬(ma)肉(rou)組(zu)織(zhi)和(he)殘(can)留(liu)的(de)非(fei)甾(zai)體(ti)抗(kang)炎(yan)藥(yao)（NSAID）保泰鬆（PBZ）進行分析檢測。保泰鬆是一種獸藥
，在一些歐盟成員國
，這種藥用於為非食品用途的動物（狗和馬）緩(huan)解(jie)疼(teng)痛(tong)和(he)減(jian)輕(qing)炎(yan)症(zheng)。但(dan)是(shi)，這(zhe)種(zhong)藥(yao)物(wu)被(bei)規(gui)定(ding)不(bu)得(de)用(yong)於(yu)治(zhi)療(liao)參(can)與(yu)人(ren)類(lei)食(shi)物(wu)鏈(lian)的(de)動(dong)物(wu)。因(yin)此(ci)，任(ren)何(he)動(dong)物(wu)源(yuan)性(xing)食(shi)品(pin)中(zhong)存(cun)在(zai)此(ci)物(wu)質(zhi)通(tong)常(chang)是(shi)由(you)於(yu)非(fei)法(fa)使(shi)用(yong)經(jing)過(guo)治(zhi)療(liao)的(de)馬(ma)屍(shi)體(ti)所(suo)導(dao)致(zhi)的(de)。

 

 

本研究引用了一種已報道的從肌肉組織中提取保泰鬆的方法1，並對該方法做了較小調整。簡單來講，即取肉勻漿2 g，加入乙腈10 mL

，振搖2 min。離心後，收集上清液並用水進行稀釋。使用沃特世（Waters®） Oasis®HLB 60 mg，將第一步所得的稀釋提取物進行固相萃取(SPE)。用甲醇洗脫保泰鬆，然後用含10 mM甲酸銨(pH 3.2)的水進行稀釋。在進行固相提取及上樣之前，對提取物分別進行稀釋，這樣，無需進行蒸發和複溶操作。取100μL稀釋上樣液

，注入LC-MS/MS係統進行分析。

 

選擇並優化了兩個多重反應監測（MRM）離子對（定量和確證）對保泰鬆進行分析。所得結果已添加到QuanpediaTM數據庫以便將來使用。在本應用中，色譜分析采用2.1×100 mm HSS T3分析型色譜柱(1.7μm)，以甲醇/水（10mM甲酸銨，pH 3.2)進行梯度洗脫，梯度時間為5 min。圖1顯示了200 ng/kg保泰鬆加標提取物的MRM色譜圖。如圖1所示
，保泰鬆和內標（100 ng/kg）的信噪比高
，峰形良好。校正回收率後的工作標準曲線如圖2所示，製備基質加標樣品兩份，並進行提取，建立六點校準曲線。根據線性回歸，計算校準曲線（1/x2加權），以保泰鬆-二苯基13C12作為內標。由結果數據可知

，可輕鬆達到最低校準點(10 ng/kg)，比歐盟建議的濃度（RC)5μg/kg低500倍。在整個檢測濃度範圍內（10-500ng/kg）

，線性良好（R2 0.997）。在處理肉製品的過程中
，馬肉可能以其它途徑摻入其中，保泰鬆濃度水平可能遠低於EU RC，因此檢測靈敏度是一個重要的考慮因素。

 

ACQUITY UPLC®I-Class係統與Xevo®TQ-S聯用，並結合Waters ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱可對肉中濃度低至10 ng/ kg的保泰鬆進行分析。即使對於濃度可能很低的經混合和經處理的肉製品
，這種超靈敏的UPLC-MS/MS技術仍能確保成功檢出受汙染產品。

 

1. N. Van Hoof, K. De Wasch, S. Poelmans, H. Noppe and H. De Brabander Rapid Commun. Mass Spectrom. 2004; 18: 2823–2829