革蘭染色法一般包括初染
、媒染、脫色
、複染等四個步驟
，具體操作方法是：塗片固定；草酸銨結晶紫染1 min，自來水衝洗；加碘液覆蓋塗麵染1 min；水洗，用吸水紙吸去水分；加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，30 S後水洗
，吸去水分；複紅染色液(稀)染30 Shou
，zilaishuichongxi。ganzao，jingjian。ransedejieguo
，gelanzhengfanyingjuntidouchengzise，fufanyingjuntidouchenghongse。danzaiwomendeshijiransejieguozhong，tebieshitongxuezaichuxueshiwangwanghuichuxianyixiecuowushiransejieguoyushijijieguobuyizhi。tongguoduoniandejiaoxueshijian，womenzongjiechukenengshiyixiajifangmiandeyinsudeyingxiang。

1 操作因素

1.1 塗片太厚 在(zai)塗(tu)片(pian)時(shi)細(xi)菌(jun)挑(tiao)的(de)太(tai)多(duo)，沒(mei)法(fa)分(fen)開(kai)，在(zai)脫(tuo)色(se)時(shi)就(jiu)不(bu)能(neng)將(jiang)第(di)一(yi)步(bu)染(ran)上(shang)的(de)結(jie)晶(jing)紫(zi)的(de)顏(yan)色(se)脫(tuo)去(qu)
，可(ke)能(neng)會(hui)使(shi)革(ge)蘭(lan)陰(yin)性(xing)菌(jun)也(ye)出(chu)現(xian)紫(zi)色(se)
，誤(wu)認(ren)為(wei)革(ge)蘭(lan)陽(yang)性(xing)菌(jun)。

1.2 脫色時間 陽性菌透性小，不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色；但(dan)這(zhe)是(shi)在(zai)固(gu)定(ding)的(de)時(shi)間(jian)條(tiao)件(jian)下(xia)的(de)結(jie)果(guo)
，如(ru)果(guo)延(yan)長(chang)脫(tuo)色(se)時(shi)間(jian)
，也(ye)會(hui)使(shi)脫(tuo)色(se)劑(ji)滲(shen)透(tou)進(jin)陽(yang)性(xing)菌(jun)的(de)細(xi)胞(bao)壁(bi)中(zhong)，使(shi)染(ran)上(shang)的(de)結(jie)晶(jing)紫(zi)脫(tuo)去(qu)顏(yan)色(se)，最(zui)後(hou)染(ran)上(shang)複(fu)紅(hong)的(de)顏(yan)色(se)
，變(bian)成(cheng)革(ge)蘭(lan)陰(yin)性(xing)菌(jun)。而(er)脫(tuo)色(se)時(shi)間(jian)太(tai)短(duan)的(de)話(hua)又(you)會(hui)使(shi)陰(yin)性(xing)菌(jun)染(ran)上(shang)的(de)結(jie)晶(jing)紫(zi)不(bu)能(neng)完(wan)全(quan)脫(tuo)色(se)，出(chu)現(xian)紫(zi)色(se)，誤(wu)認(ren)為(wei)革(ge)蘭(lan)陽(yang)性(xing)菌(jun)。

1.3 固定方法 固(gu)定(ding)不(bu)僅(jin)能(neng)殺(sha)死(si)細(xi)菌(jun)，改(gai)變(bian)細(xi)菌(jun)對(dui)染(ran)料(liao)的(de)通(tong)透(tou)性(xing)
，還(hai)能(neng)使(shi)細(xi)菌(jun)吸(xi)附(fu)在(zai)玻(bo)片(pian)上(shang)，保(bao)持(chi)原(yuan)有(you)的(de)形(xing)態(tai)結(jie)構(gou)。固(gu)定(ding)方(fang)法(fa)是(shi)將(jiang)幹(gan)燥(zao)後(hou)的(de)細(xi)菌(jun)塗(tu)片(pian)以(yi)中(zhong)等(deng)速(su)度(du)通(tong)過(guo)火(huo)焰(yan)三(san)次(ci)，以(yi)玻(bo)片(pian)觸(chu)及(ji)手(shou)背(bei)皮(pi)膚(fu)熱(re)而(er)不(bu)燙(tang)為(wei)宜(yi)。但(dan)在(zai)實(shi)際(ji)操(cao)作(zuo)中(zhong)有(you)的(de)同(tong)學(xue)將(jiang)玻(bo)片(pian)在(zai)火(huo)焰(yan)上(shang)烤(kao)的(de)太(tai)久(jiu)，改(gai)變(bian)了(le)細(xi)菌(jun)原(yuan)有(you)的(de)通(tong)透(tou)性(xing)，會(hui)使(shi)細(xi)菌(jun)的(de)染(ran)色(se)性(xing)發(fa)生(sheng)變(bian)化(hua)。影(ying)響(xiang)了(le)染(ran)色(se)的(de)結(jie)果(guo)。

2 細菌因素

2.1 細菌培養時間 細菌的典型形態、染(ran)色(se)性(xing)是(shi)在(zai)對(dui)數(shu)生(sheng)長(chang)期(qi)
，取(qu)這(zhe)時(shi)的(de)細(xi)菌(jun)做(zuo)革(ge)蘭(lan)染(ran)色(se)可(ke)以(yi)反(fan)應(ying)細(xi)菌(jun)的(de)真(zhen)實(shi)的(de)染(ran)色(se)性(xing)。如(ru)果(guo)細(xi)菌(jun)培(pei)養(yang)時(shi)間(jian)太(tai)長(chang)，變(bian)成(cheng)了(le)老(lao)齡(ling)菌(jun)，染(ran)色(se)性(xing)就(jiu)會(hui)發(fa)生(sheng)變(bian)化(hua)，可(ke)能(neng)會(hui)使(shi)革(ge)蘭(lan)陽(yang)性(xing)菌(jun)染(ran)成(cheng)革(ge)蘭(lan)陰(yin)性(xing)菌(jun)。

2.2 培養基的成分 一yi般ban認ren為wei革ge蘭lan陽yang性xing菌jun體ti內nei含han有you特te殊shu的de核he蛋dan白bai質zhi鎂mei鹽yan與yu多duo糖tang的de複fu合he物wu，它ta與yu碘dian和he結jie晶jing紫zi的de複fu合he物wu結jie合he很hen牢lao
，不bu易yi脫tuo色se。但dan是shi如ru果guo培pei養yang基ji中zhong缺que乏fa核he蛋dan白bai質zhi鎂mei鹽yan就jiu不bu能neng合he成cheng菌jun體ti成cheng分fen的de核he蛋dan白bai質zhi鎂mei鹽yan，細xi菌jun與yu碘dian和he結jie晶jing紫zi的de複fu合he物wu結jie合he就jiu不bu牢lao固gu，容rong易yi脫tuo色se，可ke能neng會hui使shi革ge蘭lan陽yang性xing菌jun染ran成cheng革ge蘭lan陰yin性xing菌jun。

3 染液因素

3.1 碘液 dianyezuoweimeiranjinengzengjiaranliaoyubeiranwudeqinheli。ruguodianyefangzhishijiantaichang，huojingriguangzhaosheshixiao，shiqumeiranjidezuoyong，jiukenengshijiejingziyuxijunjiehedebulaogu，rongyibeituose，shigelanyangxingjunranchenggelanyinxingjun。

3.2 結晶紫 結晶紫的濃度太高，就會使染上的顏色不容易被酒精脫色，可能會使革蘭陰性菌染成革蘭陽性菌。

3.3 酒精 酒精作為脫色劑，革蘭染色的脫色酒精濃度為95% 
，在此濃度下革蘭陽性菌染上的結晶紫不易被脫去
，保留紫色，革蘭陰性菌染上的結晶紫容易被脫去，最後呈紅色。但當酒精的濃度為70% 時，它的脫色能力最強，可能使革蘭陽性菌染上的結晶紫也被脫去，使革蘭陽性菌染成革蘭陰性菌。

綜上所述
，影響染色的其他因素，還有菌體細胞的構造和其外膜的通透性


，如細胞膜的通透性、膜孔的大小和細胞結構完整與否

，在染色上都起一定作用。此外，培養基的組成、菌齡、染色液中的電介質含量和pH、溫度

、藥(yao)物(wu)的(de)作(zuo)用(yong)等(deng)
，也(ye)都(dou)能(neng)影(ying)響(xiang)細(xi)菌(jun)的(de)染(ran)色(se)，所(suo)以(yi)我(wo)們(men)在(zai)染(ran)色(se)時(shi)要(yao)注(zhu)意(yi)當(dang)染(ran)色(se)結(jie)果(guo)與(yu)預(yu)想(xiang)的(de)結(jie)果(guo)出(chu)現(xian)不(bu)一(yi)致(zhi)時(shi)，要(yao)考(kao)慮(lv)到(dao)這(zhe)些(xie)因(yin)素(su)的(de)影(ying)響(xiang)。對(dui)同(tong)學(xue)來(lai)講(jiang)重(zhong)點(dian)強(qiang)調(tiao)操(cao)作(zuo)因(yin)素(su)的(de)影(ying)響(xiang)，使(shi)他(ta)們(men)在(zai)一(yi)開(kai)始(shi)學(xue)習(xi)革(ge)蘭(lan)染(ran)色(se)
，就(jiu)認(ren)真(zhen)對(dui)待(dai)，養(yang)成(cheng)良(liang)好(hao)的(de)學(xue)習(xi)態(tai)度(du)，嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)操(cao)作(zuo)規(gui)程(cheng)來(lai)做(zuo)
，提(ti)高(gao)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)的(de)準(zhun)確(que)性(xing)。