細胞因子(cytokine)是由細胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質的統稱。在免疫應答過程中
，細胞因子在免疫調節、炎症應答、腫瘤轉移等生理和病理過程中起重要作用。細胞因子的檢測不僅是基礎免疫研究的有較手段，同時在臨床疾病診斷
、病程觀察、療效判斷及細胞因子治療監測方麵具有重要價值。

 

danshi，youyuxibaoyinzizaitineidehanliangshenwei
，geixibaoyinzidejiancedailaikunwei，xibaoyinzidejianceshangweizailinchuangzhenduanshangguangfankaizhan
，yizhimuqiancaiyongdexibaoyinzijiancefangfajunbuwanshan，qiebutongdejiancefangfasuodedejieguochayijiaoda
，geilinchuangzhenduanyuzhiliaodailaiyidingdekunnan。yinci
，youbiyaolejiegezhongjiancefangfadetexingjiyingxiangyinsu。

 

目前，細胞因子生物學活性檢測和濃度測定方法主要有以下幾類

 

一.生物學檢測法

 

生物學檢測又稱生物活性檢測，是根據細胞因子特定的生物活性而設計的檢測法。由於各種細胞因子具有不同的活性
，例如IL-2促進淋巴細胞增殖
，TNF殺傷腫瘤細胞，CSFci 激造血細胞集落形成
，IFN保護細胞免受病毒攻擊

，因此選擇某一細胞因子獨特的生物活性
，即可對其進行檢測。生物活性檢測法又可分為以下幾類：

 

1．細胞增殖法

 

許多細胞因子具有細胞生 zhang 因子活性
，特別是白細胞介素，如IL-2 ci激t細胞生  zhang  、IL-3 ci 激肥大細胞生  zhang  、IL-6 ci 激漿細胞生  zhang  等。利用這一特性，現已篩選出一些對特定細胞因子起反應的細胞

，並建立了隻依賴於某種因子的細胞係，即依賴細胞株(簡稱依賴株)。這些依賴株在通常情況下不能存活
，隻有在加入特定因子後才能增殖。例如IL-2依賴株ctll-2在不含IL-2的培養基中很快死亡，而加入IL-2後則可右體外 zhang   期培養。在一定濃度範圍內
，細胞增殖與IL-2量呈正比，因此通過測定細胞增殖情況(如使用3h-tdr摻入法
、MTT法等)鑒定IL-2的含量。除依賴株外，還有一些短期培養的細胞，如胸腺細胞
、骨髓細胞、促有絲分裂原ci 激後的淋巴母細胞等

，均可作為靶細胞來測定某種細胞因子活性。

 

2．靶細胞殺傷法

 

是根據某些細胞因子(如TNF)能在體外殺傷靶細胞而設計的檢測方法。通常靶細胞多選擇體外zhang   期傳代的腫瘤細胞株，利用同位素釋放法或染料染色等方法判定細胞的殺傷率。

 

3．細胞因子誘導的產物分析法

 

某些細胞因子可ci激特定細胞產生生物活性物質
，如IL-2、IL-3誘導骨髓細胞合成胺
、IL-6誘導肝細胞合成α1-抗糜蛋白酶等。通過測定所誘生的相應產物，可反映細胞因子的活性。

 

4．細胞病變抑製法

 

病毒可造成靶細胞的損傷，幹擾素等則可抑製病毒所導致的細胞病變
，因此可利用細胞病變抑製法檢測這類因子。

 

二

、免疫學檢測法

 

細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)均(jun)為(wei)蛋(dan)白(bai)或(huo)多(duo)肽(tai)，具(ju)有(you)較(jiao)強(qiang)的(de)抗(kang)原(yuan)性(xing)。隨(sui)著(zhe)重(zhong)組(zu)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)的(de)出(chu)現(xian)
，可(ke)較(jiao)方(fang)便(bian)地(di)獲(huo)得(de)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)的(de)特(te)異(yi)性(xing)抗(kang)血(xue)清(qing)或(huo)單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)


，因(yin)此(ci)可(ke)利(li)用(yong)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)特(te)異(yi)性(xing)反(fan)應(ying)的(de)特(te)性(xing)，用(yong)免(mian)疫(yi)學(xue)技(ji)術(shu)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)。盡(jin)管(guan)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)種(zhong)類(lei)繁(fan)多(duo)，隻(zhi)要(yao)獲(huo)得(de)了(le)針(zhen)對(dui)某(mou)一(yi)因(yin)子(zi)的(de)特(te)異(yi)性(xing)抗(kang)體(ti)(包括多克隆抗體或單克隆抗體)均可采用相似的技術開展工作。常用的方法包括ELISA、RIA及ji免mian疫yi印yin跡ji法fa。目mu前qian，幾ji乎hu所suo有you常chang見jian細xi胞bao因yin子zi的de檢jian測ce試shi劑ji盒he均jun有you商shang品pin供gong應ying。此ci外wai還hai可ke利li用yong酶mei標biao或huo熒ying光guang標biao記ji的de抗kang細xi胞bao因yin子zi單dan克ke隆long抗kang體ti

，原yuan位wei檢jian測ce因yin子zi在zai細xi胞bao內nei的de合he成cheng及ji分fen布bu情qing況kuang
，如ru近jin來lai來lai發fa展zhan起qi來lai的de細xi胞bao內nei染ran色se法fa和he酶mei聯lian免mian疫yi斑ban點dian(ELISPOT)技術等。免疫學檢測法可直接測定樣品中特定細胞因子的含量(用ng/ml表示)，為wei大da規gui模mo檢jian測ce臨lin床chuang病bing人ren血xue清qing中zhong細xi胞bao因yin子zi的de含han量liang提ti供gong了le方fang便bian。本ben法fa僅jin測ce定ding細xi胞bao因yin子zi的de抗kang原yuan性xing

，與yu該gai因yin子zi活huo性xing不bu一yi定ding相xiang平ping行xing，因yin此ci要yao了le解jie細xi胞bao因yin子zi的de生sheng物wu學xue效xiao應ying
，必bi須xu結jie合he生sheng物wu學xue檢jian測ce法fa。

 

三、分子生物學方法

 

這(zhe)是(shi)一(yi)類(lei)利(li)用(yong)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)的(de)基(ji)因(yin)探(tan)針(zhen)檢(jian)測(ce)特(te)定(ding)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)基(ji)因(yin)表(biao)達(da)的(de)技(ji)術(shu)。目(mu)前(qian)所(suo)有(you)公(gong)認(ren)的(de)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)的(de)基(ji)因(yin)均(jun)已(yi)克(ke)隆(long)化(hua)，故(gu)能(neng)較(jiao)容(rong)易(yi)地(di)得(de)到(dao)某(mou)一(yi)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)的(de)cDNA探針或根據已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。利用基因探針檢測細胞因子mRNA表達的方法多種多樣，常使用斑點雜交
、Northern blot、逆轉錄PCR，細胞或組織原位雜交等。實驗的關鍵在於製備高質量的核酸探針和獲得合格的待測物(提取的mRNA樣品或細胞/組織標本)。核酸探針是指一段用放射性同位素或其他標記物(如生物素、地高辛等)標記並與目的基因互補的DNA  片段或單鏈DNA、RNA。根據其來源可分為cDNA探針
、寡核核苷酸探針、基因組基因探針及DNA探針等。其中cDNA探針和人工合成寡核苷酸探針常用於斑點雜交及Northern blot，而RNA探針因穿透性好更適用於原位雜交。核酸探針技術的應用已經程序化
，以cDNA探針為例主要包括：①質粒DNA的提取；②靶DNA  片段的分離；③靶DNA  片段標記；④待測樣品mrna的提取；⑤標記cDNA探針對待檢樣品的雜交；⑥放射自顯影或顯色分析。近年來出現的RT-PCR檢測特異性mRNA的方法也廣泛用於細胞因子研究領域。該法具有靈敏、快速等優點
，甚至從1～10個細胞中就可檢出其中的特異mRNA。

 

上shang述shu三san種zhong方fang法fa，各ge有you優you缺que點dian
，可ke互hu相xiang彌mi補bu，在zai實shi際ji應ying用yong中zhong，可ke根gen據ju各ge自zi的de實shi驗yan目mu的de和he實shi驗yan室shi條tiao件jian進jin行xing選xuan擇ze。生sheng物wu學xue檢jian測ce法fa比bi較jiao敏min感gan，又you可ke直zhi接jie測ce定ding生sheng物wu學xue功gong能neng，是shi最zui可ke靠kao的de方fang法fa
，適shi用yong於yu各ge種zhong實shi驗yan目mu的de，是shi科ke研yan部bu門men最zui常chang用yong的de技ji術shu，但dan需xu要yao  zhang   期培養依賴性細胞株，檢測耗時  zhang  ，步(bu)驟(zhou)繁(fan)雜(za)，影(ying)響(xiang)因(yin)素(su)多(duo)，不(bu)容(rong)易(yi)熟(shu)練(lian)掌(zhang)握(wo)。免(mian)疫(yi)學(xue)檢(jian)測(ce)法(fa)比(bi)較(jiao)簡(jian)單(dan)，迅(xun)速(su)，重(zhong)複(fu)性(xing)好(hao)，但(dan)所(suo)測(ce)定(ding)的(de)隻(zhi)代(dai)表(biao)相(xiang)應(ying)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)的(de)量(liang)而(er)不(bu)代(dai)表(biao)活(huo)性(xing)，同(tong)時(shi)敏(min)感(gan)度(du)也(ye)低(di)於(yu)生(sheng)物(wu)活(huo)性(xing)檢(jian)測(ce)法(fa)(約低10～100倍)。fenzishengwuxuefazhinengjiancejiyinbiaodaqingkuang，bunengzhijietigongyouguanyinzidenongdujihuoxingdengziliao，zhuyaoyongyujizhitantao。zaijiancexibaoyinzishi

，bixukaolvdaoxibaoyinzidezuoyongjuyouwangluoxingdetedian，renmenxumingquejiancefangfasuocedingdexibaoyinzichengfen，bingkaolvqiyizhijihekerongxingshoutideshuiping，jianggezhongjieheshiyong，youkenengdedaojiaoweikekaodejieguo。