在生物藥肽圖分析、蛋白質修飾分析、蛋白質組學研究等諸多工作中
，蛋白質的變性與酶解是樣品處理的必經之路。RapiGestTM SF正是在這個實驗步驟中
，用以輔助蛋白酶解的變性試劑[1,2,3]。RapiGest SF有以下優點：

■ 綜合水相
、有機相溶液條件下

，最高效的輔助酶解變性劑。

■ 作用過程中，不對蛋白造成副反應化學修飾。

■ 操作簡單
、全麵適應液質分析方法。

■ 常規操作濃度對胰蛋白酶活性無抑製。

■ 可大大縮短酶解反應時間。

■ 對各種蛋白酶
、肽-N糖苷酶等多種酶解過程都適用。
 

在zai蛋dan白bai質zhi質zhi譜pu分fen析xi的de大da部bu分fen工gong作zuo中zhong，常chang常chang需xu要yao將jiang蛋dan白bai質zhi酶mei解jie為wei多duo肽tai進jin行xing分fen析xi。但dan蛋dan白bai質zhi結jie構gou是shi以yi三san維wei結jie構gou的de形xing式shi存cun在zai的de，為wei了le將jiang蛋dan白bai高gao級ji結jie構gou內nei部bu的de酶mei切qie位wei點dian暴bao露lu於yu蛋dan白bai酶mei的de作zuo用yong下xia，首shou先xian需xu要yao對dui蛋dan白bai進jin行xing變bian性xing，使shi蛋dan白bai舒shu展zhan開kai。John R. Yates教授領導的團隊對各種變性劑中的輔助酶切效果進行了充分比較，其中RapiGest SF的表現最為（圖1）[4]。仔細觀察圖1還hai可ke以yi發fa現xian
，在zai實shi驗yan結jie果guo中zhong，較jiao為wei常chang用yong的de尿niao素su輔fu助zhu酶mei切qie效xiao率lv較jiao差cha。這zhe是shi由you於yu尿niao素su對dui胰yi蛋dan白bai酶mei活huo性xing的de抑yi製zhi作zuo用yong較jiao大da。實shi驗yan人ren員yuan有you時shi會hui采cai取qu使shi用yong尿niao素su進jin行xing蛋dan白bai後hou
，將jiang反fan映ying溶rong液ye稀xi釋shi10倍，再加入胰蛋白酶的方法，以降低尿素濃度到1Myixia
，jianshaoqiduiyidanbaimeideyizhi。danshi，mianduiweiliangdeshengwudanbaiyangben，xishihoudetixi
，huidafudujiangdiyangpinnongdu，xianzhilehouxudefenxigongzuo。ciwai

，niaosuzaiduidanbaibianxingdeguochengzhong
，haihuiduidanbaijinxingyidingdehuaxuexiushi，ruanjijiaxianhua。fufanyingdefashengduiyuduotaijianding

、組學水平蛋白定量會造成一定的影響與誤差。而使用RapiGest SF無副反應的問題，正常使用濃度下(0.1%)對胰蛋白酶活

性也無影響（表1）。

圖1. Tris水相緩衝體係下各種變性劑的輔助酶切效果比較。樣品為mammalian cell lysate cytoplasmic fraction蛋白。

不同變性劑對胰蛋白酶活性影響對比

檢測基於胰蛋白酶誘導N-α-苯甲酰-L-精氨酸乙基乙酯（BAEE）水解。將0.5微克胰蛋白酶加入1mL 50mM的碳酸氫銨溶液中（pH 7.9，0.2 mM BAEE）。檢測△BAEE在253 nm下的吸收值（5分鍾內的斜率）。

RapiGest SF雖然是一種表麵活性劑，但其全麵適應液質分析的要求。在使用RapiGest SF作為變性劑完成蛋白酶切後
，如果隻進行色譜分析，則可無需對RapiGest SF進行處理。如進行液質聯用分析，則通過簡單的加酸步驟就可將RapiGest SF去除。而酸性溶液環境又恰恰是液質分析所需的樣品溶液環境。事實上
，RapiGest SF是酸性不穩定表麵活性劑
，在酸性條件下（pH2）極易水解。RapiGestSF的結構及其水解產物見圖2。酸化後RapiGest SF降解為兩個產物：2-十二酮和3-羥（2,3-二羥基丙基）丙磺酸鈉。前者與水不能互溶，通過離心去除。後者在水溶液中溶解度很高，在反相LC模式下不保留。因此，酶消解後的水溶液可直接進行LC-MS或MALDI-MS分析。

 

圖3為Ra piGest SF輔助的人單抗酶解的實例。通過BiopharmaLynxTM軟件分析，其序列覆蓋度為98%。而且LC/MS

分析中沒有發現錯誤酶切的多肽或完整未被酶切的蛋白。2%序列未發現的原因是由於此部分序列為2個氨基酸的超短肽或單個氨基酸（R或K）

，其無法在反相柱上保留。

圖 3.LC-MS分析RapiGest SF輔助下的人單抗胰蛋白酶酶解多肽。
 

由於其表麵活性劑的屬性，RapiGest SF可以非常快速地對蛋白完成變性，從而縮短酶解實驗時間。圖4顯示，RapiGest SF輔助下，完全酶解馬肌紅蛋白隻需要5分鍾。而由於肌紅蛋白屬球蛋白
，其在不充分變性的情況下將難以酶解。在對照反應中，單純與胰蛋白酶孵育條件下，即使到9小時後，仍隻有少量的蛋白被酶解；而使用了RapiGest SF試劑的體係，酶解效率顯著提升。

圖 4.有無RapiGest SF輔助下，馬肌紅酶解效果對比。
 

RapiGest SF自2002年推出以來
，已經過10年的使用
，它良好的性能被廣泛認可，對各種蛋白酶、肽-N糖苷酶

等多種酶解過程都適用[5]。RapiGest SF已經成為大部分生物質譜科學家的常規必備試劑。