一、引言

焦(jiao)糖(tang)色(se)素(su)是(shi)一(yi)種(zhong)允(yun)許(xu)使(shi)用(yong)的(de)著(zhe)色(se)劑(ji)，我(wo)國(guo)對(dui)焦(jiao)糖(tang)色(se)使(shi)用(yong)量(liang)的(de)規(gui)定(ding)除(chu)個(ge)別(bie)產(chan)品(pin)外(wai)均(jun)為(wei)按(an)生(sheng)產(chan)需(xu)要(yao)適(shi)量(liang)使(shi)用(yong)
，其(qi)中(zhong)規(gui)定(ding)僅(jin)有(you)亞(ya)硫(liu)酸(suan)銨(an)法(fa)生(sheng)產(chan)地(di)焦(jiao)糖(tang)色(se)允(yun)許(xu)使(shi)用(yong)在(zai)碳(tan)酸(suan)飲(yin)料(liao)中(zhong)。而(er)以(yi)加(jia)氨(an)或(huo)其(qi)銨(an)鹽(yan)製(zhi)成(cheng)的(de)焦(jiao)糖(tang)（Ⅲ類氨法焦糖和Ⅳ類亞硫酸銨法焦糖）會產生4-甲基咪唑，並且4-甲基咪唑是一種能夠誘發腫瘤的高水平的化學物質。

焦糖色素被廣泛用於食品以及飲料中
，所以4-甲基咪唑的含量監控也是必須被重視的，由於4-甲基咪唑分子極性很大，含量很低，所以如何快速、準確地檢測出其含量，就成為人們現階段研究的重點。目前我國國家標準中隻有《焦糖色中的4-甲基咪唑的測定-高效液相色譜法》
，而對於飲料中的4-甲基咪唑則沒有相關檢測方法。

沃特世（Waters®）公司所提供的整體解決方案
，同時來監控飲料中的4-甲基咪唑以及2-甲基咪唑。使用沃特世SPE的固相萃取策略來對於複雜的樣品基質進行淨化，完成對於4-甲基咪唑以及2-甲基咪唑的提取濃縮，而沃特世HILIC模式的色譜保留，對於極性分子的色譜分離提供完美的效果，最後通過UPLC® H-CLASS PDA以及UPLC/Xevo®  TQ MS的分析
，完成出色的定性定量工作。

 
二、實驗條件

樣品前處理方案

固相萃取SPE解決方案——Oasis® MCX (3cc/60mg) 小柱淨化取3g飲料樣品
，超聲5分鍾,後待淨化。

活化/平衡

3mL 甲醇 /3mL 水

上3mL樣品

清洗 A: 2%甲酸水溶液/B: 100%甲醇

洗脫 5%氨化甲醇

氮氣揮幹

乙腈:甲醇（9:1）定容

上機分析

ACQUITY UPLC H-CLASS PDA超高效液相色譜分離條件： 

色譜柱： ACQUITY UPLC®  BEH HILIC Column; 2.1x100 mm,1.7μm

流動相 A： 乙腈

流動相 B： 5mM 

甲酸銨柱溫： 35˚C

檢測波長： 215nm

進樣量： 5μL

運行時間： 3min

梯度表： Time (min)  Flow (mL/min)   %A  Curve 

                     0.00       0.5                     80    6

                      3.00      0.5                     80    6

ACQUITY UPLC Xevo TQ MS超高效液相色譜-串聯質譜分析條件：

色譜柱： ACQUITY UPLC BEH HILIC Column; 2.1x100 mm,1.7μm

流動相 A： 乙腈

流動相 B： 5mM 甲酸銨

柱溫： 35˚C

進樣量： 2μL

運行時間： 3min

梯度表： Time (min)  Flow (mL/min)  %A  Curve

                   0.00         0.5                   80     6

                   3.00         0.5                   80     6

三、實驗結果及討論

3.1 ACQUITY UPLC H-CLASS PDA分析

混合標準品色譜圖

飲料空白樣品圖

基質添加回收色譜圖

3.2 ACQUITY UPLC/Xevo TQ MS分析

混合標準品TIC

 茶飲料樣品加標與空白對比分析

 可樂樣品加標與空白對比分析 

通過分析結果可以看出，4-甲基咪唑和2-甲jia基ji咪mi唑zuo分fen子zi極ji性xing很hen大da


，一yi般ban反fan相xiang很hen難nan保bao留liu，多duo用yong離li子zi對dui試shi劑ji來lai增zeng加jia保bao留liu，但dan由you於yu離li子zi對dui色se譜pu方fang式shi平ping衡heng時shi間jian很hen長chang，增zeng加jia整zheng體ti分fen析xi周zhou期qi，同tong時shi對dui於yu色se譜pu柱zhu以yi及ji儀yi器qi的de損sun耗hao很hen大da
，最zui關guan鍵jian是shi無wu法fa進jin行xing有you效xiao的de質zhi譜pu方fang法fa分fen析xi。而er沃wo特te世shi公gong司siHILIC模式的極性分析方案可以非常好的進行極性分子的保留
，流動相簡單，優異兼容質譜條件，使4-甲基咪唑和2-甲基咪唑有非常好的分離效果以及靈敏度。

tongshiyouyumubiaohuahewujixinghenda，duiyuqianchulideyaoqiufeichanggao，fenlitiqushigenandian，erwoteshigongsideguxiangcuiqufangannengshiyangpindadaofeichanghaodejinghuaxiaoguo，tongguoOasis MCX進行保留分離，同時能夠減少樣品雜質對於色譜柱以及整個儀器係統的損害。由沃特世ACQUITY UPLC H-CLASS-PDA和ACQUITY UPLC / Xevo TQ MS所提供的超高效性能以及靈敏度，使得4-甲基咪唑和2-甲基咪唑的分析達到理想效果。

四、結論

4.1.采用ACQUITY UPLC H-CLASS-PDA和ACQUITY UPLC / Xevo TQ MS可以快速高效地對4-甲基咪唑和2-甲基咪唑的含量進行測定
，ACQUITY UPLC H-CLASS-PDA靈敏度可以達到1mg/kg，ACQUITY UPLC / Xevo TQ MS靈敏度可以達到1μg/kg。

4.2.應用沃特世固相萃取SPE解決方案配合HILIC模式色譜保留，對於大極性的小分子有很好的保留以及分離提取的作用，達到理想淨化效果以及色譜分離效果。

4.3.從樣品前處理到樣品色譜質譜分析的整體解決方案，給客戶提供一體化的服務解決樣品分析過程中可能遇到的所有問題
，幫助客戶成功！