一、目的
為證實ACQUITY UPLC® I-Class係統可使柱外譜帶擴展達到最低,從而使進行高分離度及高通量UPLC®分離時的分離效果更佳。以下將通過雜質分析以及彈道梯度說明這些改善的重要性。
二、背景
已證實在多種應用中,采用填裝亞2-_m顆粒的色譜柱能夠改善色譜分離的峰容量以及分離度,從而大幅度提高分離度以及通量。
然(ran)而(er),為(wei)使(shi)一(yi)項(xiang)指(zhi)定(ding)分(fen)離(li)所(suo)可(ke)能(neng)達(da)到(dao)的(de)分(fen)離(li)度(du)達(da)到(dao)最(zui)大(da),需(xu)要(yao)使(shi)係(xi)統(tong)擴(kuo)散(san)性(xing)達(da)到(dao)最(zui)小(xiao)。屬(shu)於(yu)進(jin)樣(yang)器(qi)後(hou)係(xi)統(tong)流(liu)路(lu)的(de)任(ren)何(he)液(ye)體(ti)管(guan)路(lu)或(huo)連(lian)接(jie)均(jun)可(ke)導(dao)致(zhi)柱(zhu)外(wai)譜(pu)帶(dai)展(zhan)寬(kuan)。包(bao)括(kuo)進(jin)樣(yang)閥(fa)、溶劑預熱裝置、連接管路、配件、及光學流通池。許多供應商已嚐試改善UHPLC係統的擴散性,但收效甚微。雖然可減小擴散性,但仍無法達到最佳從而可獲得窄孔UPLC色譜柱(內徑2.1 mm)的全部優點。這些色譜柱要求較低的流速,這使得分析每份樣品時的投資回報率更高,從而可在足夠的分離度下進行高效分離。


三、解決方案
ACQUITY UPLC I-Class係統可減小柱外譜帶分布。新設計的UV檢測器流通池的光學路徑與先前的ACQUITY UPLC的光學路徑相同,可獲得同樣高的靈敏度;另ling外wai,已yi重zhong新xin設she計ji流liu體ti管guan路lu以yi及ji連lian接jie,以yi使shi譜pu帶dai擴kuo散san進jin一yi步bu減jian小xiao。必bi須xu使shi用yong溶rong劑ji預yu熱re器qi以yi使shi可ke導dao致zhi柱zhu上shang分fen散san效xiao應ying的de溫wen度du梯ti度du減jian至zhi最zui低di。因yin此ci,溶rong劑ji預yu熱re器qi的de體ti積ji應ying足zu夠gou小xiao,以yi確que保bao使shi樣yang品pin簇cu(sample plug)yizuixiaodekuosandudaodasepuzhutoubu,erqiejishizaigaowenjigaoliusuxiayeketigongjijiaderongjijiarexingneng。genjuninshiyanshidexuqiu,kezailiangzhongyangpinguanliqi(Sample Manager)中選擇一種來構成ACQUITYUPLC I-Class係統。不管是使用固定定量環式(SM-FL)還是流通針式(SM-FTN)進樣器,均已通過采用小體積的針頭端口、連接管路、及ji內nei部bu閥fa門men通tong道dao使shi由you進jin樣yang器qi所suo導dao致zhi的de擴kuo散san性xing減jian至zhi最zui低di。通tong常chang,固gu定ding環huan式shi進jin樣yang器qi的de設she計ji可ke使shi柱zhu外wai譜pu帶dai擴kuo展zhan程cheng度du更geng小xiao,這zhe是shi由you於yu其qi減jian小xiao了le注zhu射she器qi流liu動dong路lu徑jing的de體ti積ji。通tong過guo對dui每mei一yi組zu件jian進jin行xing優you化hua,已yi使shi柱zhu外wai譜pu帶dai擴kuo展zhan較jiao之zhi任ren一yi其qi他ta市shi售shouLC係統顯著降低。表1總結了在使用多種係統(包括UHPLC係統)後所獲得的譜帶擴展數值。


ACQUITY UPLC家族在保持超高效分離的整體性方麵的性能優於所有其他係統,其中ACQUITYUPLC H-Class係統的譜帶擴展減少至9 _L,而ACQUITY UPLC I-Class係統則減少至低至5.5 _L。
降低的係統擴散性可直接導致ACQUITY UPLCI-Class係統的分離度增加。分離可以達到彈道梯度,同時保持典型分析梯度中的分離度。圖2說明對丁卡因進行雜質分析的結果。
采用ACQUITY UPLC I-Class係統及購自供應商B的UHPLC係統,在相同條件下進行分離,結果ACQUITY UPLC I-Class的分離度顯著更佳。供應商B的係統按其建議安裝有光路長度為60 mm的流動池,結果發現其產生了明顯的譜帶擴展,以至於測不到肩峰。


四、小結
ACQUITY UPLC I-Class係xi統tong具ju有you不bu可ke比bi擬ni的de性xing能neng,可ke用yong於yu當dang今jin最zui具ju挑tiao戰zhan性xing的de分fen離li任ren務wu。不bu管guan您nin的de實shi驗yan室shi需xu要yao增zeng加jia分fen離li時shi的de分fen離li度du還hai是shi需xu要yao增zeng加jia樣yang品pin通tong量liang,它ta靈ling活huo的de係xi統tong構gou造zao都dou可ke使shi得deUPLC色譜柱上的柱外譜帶擴展最低,從而獲得最佳的分離性能。
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