李雪芳，戴絢麗

高效液相色譜法作為食品中防腐劑檢測的標準方法，廣泛地用於各種飲料
，食品以及各種原輔料的質量控製中[1, 2, 3 ]。但是對於基質較為複雜的樣品，如醬油、醬包、桂圓肉

、乳酸鏈球菌素等
，我們以往的預處理方法是：對於醬包/濃(nong)縮(suo)汁(zhi)，用(yong)水(shui)稀(xi)釋(shi)後(hou)，加(jia)熱(re)超(chao)聲(sheng)萃(cui)取(qu)，離(li)心(xin)去(qu)除(chu)油(you)層(ceng)後(hou)上(shang)過(guo)濾(lv)，再(zai)進(jin)樣(yang)分(fen)析(xi)。對(dui)於(yu)醬(jiang)油(you)樣(yang)品(pin)，稀(xi)釋(shi)過(guo)濾(lv)後(hou)直(zhi)接(jie)進(jin)樣(yang)分(fen)析(xi)。對(dui)於(yu)乳(ru)酸(suan)鏈(lian)球(qiu)菌(jun)素(su)，用(yong)水(shui)稀(xi)釋(shi)，超(chao)聲(sheng)
，離(li)心(xin)過(guo)濾(lv)後(hou)進(jin)樣(yang)分(fen)析(xi)。該(gai)預(yu)處(chu)理(li)方(fang)法(fa)簡(jian)單(dan)，但(dan)是(shi)由(you)於(yu)樣(yang)品(pin)中(zhong)存(cun)在(zai)色(se)素(su)
，蛋(dan)白(bai)質(zhi)
，脂(zhi)肪(fang)等(deng)多(duo)種(zhong)幹(gan)擾(rao)物(wu)質(zhi)
，上(shang)述(shu)預(yu)處(chu)理(li)方(fang)法(fa)無(wu)法(fa)將(jiang)幹(gan)擾(rao)物(wu)質(zhi)去(qu)除(chu)幹(gan)淨(jing)，使(shi)得(de)苯(ben)甲(jia)酸(suan)和(he)山(shan)梨(li)酸(suan)與(yu)存(cun)在(zai)的(de)多(duo)種(zhong)幹(gan)擾(rao)物(wu)質(zhi)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)很(hen)難(nan)分(fen)離(li)，因(yin)此(ci)很(hen)難(nan)獲(huo)得(de)滿(man)意(yi)的(de)檢(jian)測(ce)結(jie)果(guo)。同(tong)時(shi)
，大(da)量(liang)的(de)雜(za)質(zhi)對(dui)色(se)譜(pu)柱(zhu)會(hui)造(zao)成(cheng)汙(wu)染(ran)，嚴(yan)重(zhong)影(ying)響(xiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)性(xing)能(neng)[4, 5]。為此我們根據苯甲酸和山梨酸在酸性條件下能同水蒸氣一起蒸餾出來的特點[6]
，采用水蒸氣蒸餾法，用BUCHI 自動定氮儀對樣品進行預處理
，探討了不同蒸餾條件下對檢測結果的影響，建立了一種對複雜基質食品中防腐劑適用的簡單、快捷的前處理方法。

1 實驗部分
1.1 試劑與儀器
1.1.1 主要試劑
甲醇
，乙腈為色譜純
乙酸銨溶液(0.02mol/L)：稱取1.54g 乙酸銨(優級純)
，加水至1000ml，溶解，經濾膜(0.45μm)
過濾。
苯甲酸標準工作液：將1mg/ml 苯甲酸儲備液稀釋1000 倍作為工作液。
山梨酸標準工作液：將1mg/ml 山梨酸儲備液稀釋1000 倍作為工作液。
1.1.2 主要儀器
Waters 高效液相色譜儀
BUCHI 自動蒸餾儀
1.2 色譜條件
色譜柱：Aglient Zorbax Eclipse XDB-C18 4.6x150mm；
流動相：乙酸銨溶液:甲醇=90:10 流速：1.0ml/min
檢測器：二極管陣列檢測器 進樣量：20μL
檢測波長： 苯甲酸230nm 山梨酸254nm
1.3 色譜條件
準確稱取10.00g 均勻樣品，置於蒸餾管內，加磷酸1ml，無水硫酸鈉20g，水15ml
，在接受瓶中加入320μL1mol/L 氫氧化鈉

，加入少量蒸餾水。BUCHI 自動蒸餾儀蒸餾強度100%蒸餾5min
，收集餾出液，用水定容到200ml，餾份經0.45μm 濾膜過濾後進樣。
1.4 定量方法
根據保留時間定性，外標峰麵積法定量。

2 結果與分析
2.1 不同前處理方法檢測結果的比較
圖1(a)和1(b)為不同前處理方法對醬包樣品處理後所得的色譜圖。圖2(a)和1(b)為不同前處理方法對乳酸鏈球菌素樣品處理後所得的色譜圖。圖1(a)和圖2(a)的預處理方法為我們以往使用的預處理方法。圖1(b)和圖2(b)的(de)預(yu)處(chu)理(li)方(fang)法(fa)為(wei)本(ben)文(wen)提(ti)出(chu)的(de)水(shui)蒸(zheng)氣(qi)蒸(zheng)餾(liu)法(fa)。從(cong)圖(tu)中(zhong)可(ke)以(yi)看(kan)出(chu)，用(yong)以(yi)前(qian)的(de)超(chao)聲(sheng)萃(cui)取(qu)方(fang)法(fa)檢(jian)測(ce)醬(jiang)包(bao)中(zhong)的(de)苯(ben)甲(jia)酸(suan)時(shi)，由(you)於(yu)其(qi)基(ji)質(zhi)複(fu)雜(za)，幹(gan)擾(rao)成(cheng)分(fen)較(jiao)多(duo)、黏度較高，造成了進樣後雜質峰過多，色譜峰分離度無法滿足要求
，即使用200mm 色譜柱，用梯度洗脫，也無法將防腐劑與汙染物質完全分離。而采用水蒸氣蒸餾處理後，樣品能完全被淨化，基本無基質幹擾，因此用150mm 色譜柱
，5min neijiukejiangbenjiasuanheshanlisuanwanquanfenli，yincikeyimanzudapiliangyangpindekuaisuceding。lingyifangmian，youyuzhengliuhoushangjiceshideyangpinjiaoganjing
，yincizaishijidefenxiceshizhong，keyijiadajinyangliang
，jinyibujiangdifangfadejiancexian。

2.2 前處理條件的優化
2.2.1 蒸餾強度的選擇
蒸餾強度對苯甲酸和山梨酸的蒸發程度存在一定影響，本實驗考察了不同蒸餾強度對苯甲酸和山梨酸回收率的影響，結果如表1。

隨著蒸餾強度的增大

，苯甲酸和山梨酸的蒸出率不斷增大。因此，選擇選擇蒸餾強度100%。

2.2.2 無水硫酸鈉加入量的影響
加(jia)入(ru)無(wu)水(shui)硫(liu)酸(suan)鈉(na)的(de)目(mu)的(de)是(shi)使(shi)樣(yang)品(pin)溶(rong)液(ye)的(de)沸(fei)點(dian)升(sheng)高(gao)
，從(cong)而(er)使(shi)苯(ben)甲(jia)酸(suan)和(he)山(shan)梨(li)酸(suan)盡(jin)可(ke)能(neng)蒸(zheng)餾(liu)出(chu)來(lai)。加(jia)入(ru)不(bu)同(tong)量(liang)的(de)無(wu)水(shui)硫(liu)酸(suan)鈉(na)做(zuo)加(jia)標(biao)回(hui)收(shou)試(shi)驗(yan)，結(jie)果(guo)見(jian)表(biao)2。

從上表可以看出，無水硫酸鈉的加入量對回收率有較大的影響，但當無水硫酸鈉的加入量達到20g 後，苯甲酸和山梨酸的回收率增加不明顯。 因此選擇無水硫酸鈉的加入量為20g。

2.2.3 磷酸加入量對回收率的影響
山梨酸和苯甲酸可能以山梨酸鹽和苯甲酸鹽的形式存在於樣品中,jiarulinsuandemudeshishiyangpinsuanhua
，shifangfujicongyandexingshiwanquanzhuanhuaweisuandexingshicongernengsuishuizhengqizhengliuchulai。kaochalebutongtijidelinsuanjiaruliangduijieguodeyingxiang
，jieguojianbiao3。

在實驗中發現，加入磷酸的量增加,山梨酸和苯甲酸的回收率增加,當加入磷酸量增加到1ml後
，進一步增加酸度山梨酸和苯甲酸的回收率增加不明顯。

2.2.4 氫氧化鈉吸收液加入量的選擇
調節接受液的pH 值會影響苯甲酸和山梨酸的在水中的吸收效率。實驗考察了接受瓶中加入不同量1mol/L 氫氧化鈉溶液對苯甲酸和山梨酸回收率的影響，結果見表4。

隨著氫氧化鈉加入量的增加，吸收液的PH 升高
，苯甲酸和山梨酸的吸收效率增加
，當氫氧化鈉加入量到320 ul 時，回收率可達到要求，因此選擇加入1mol/L 氫氧化鈉320 ul。

2.3 方法的定量限，重現性及回收率考察
取樣品按本方法進行預處理後測定，以信躁比10，確定了該方法的定量限分別為苯甲酸0.035mg/L；山梨酸0.01mg/L。
對同一樣品按本方法平行測定6 次
，測定結果如表5 所示。

從表中結果可以看出
，采用該方法，苯甲酸和山梨酸測定的相對標準偏差均小於10%
，這一結果說明了本方法具有很好的重現性
，測定結果可靠。
用水蒸氣蒸餾法處理乳酸鏈球菌素，計算回收率
，測定結果如表6 所示。


3 結論
本(ben)研(yan)究(jiu)針(zhen)對(dui)複(fu)雜(za)樣(yang)品(pin)中(zhong)防(fang)腐(fu)劑(ji)測(ce)定(ding)過(guo)程(cheng)中(zhong)存(cun)在(zai)的(de)基(ji)質(zhi)嚴(yan)重(zhong)幹(gan)擾(rao)的(de)問(wen)題(ti)，采(cai)用(yong)在(zai)酸(suan)性(xing)條(tiao)件(jian)下(xia)水(shui)蒸(zheng)氣(qi)蒸(zheng)餾(liu)法(fa)進(jin)行(xing)前(qian)處(chu)理(li)，對(dui)樣(yang)品(pin)進(jin)行(xing)淨(jing)化(hua)，建(jian)立(li)了(le)高(gao)效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)測(ce)定(ding)複(fu)雜(za)基(ji)質(zhi)樣(yang)品(pin)中(zhong)防(fang)腐(fu)劑(ji)的(de)方(fang)法(fa)。通(tong)過(guo)實(shi)驗(yan)確(que)立(li)了(le)最(zui)佳(jia)的(de)前(qian)處(chu)理(li)條(tiao)件(jian)以(yi)及(ji)色(se)譜(pu)條(tiao)件(jian)。該(gai)方(fang)法(fa)簡(jian)便(bian)、快速

，且重現性好
，回收率可達到80%以上，能夠用於日常分析檢測。