血清學反應是指:相應的抗原與抗體在體外一定條件下作用,可出現肉眼可見的沉澱、凝集現象。在食品微生物檢驗中,常用血清學反應來鑒定分離到的細菌,以最終確認檢測結果。
血清學反應的一般特點:
(1)抗原體的結合具有特異性,當有共同抗原體存在時,會出現交叉反應。
(2)抗原體的結合是分子表麵的結合,這種結合雖相當穩定,但是可逆的。
(3)抗原體的結合是按一定比例進行的,隻有比例適當時,才能出現可見反應。
(4)血(xue)清(qing)學(xue)反(fan)應(ying)大(da)體(ti)分(fen)為(wei)兩(liang)個(ge)階(jie)段(duan)進(jin)行(xing),但(dan)其(qi)間(jian)無(wu)嚴(yan)格(ge)界(jie)限(xian)。第(di)一(yi)階(jie)段(duan)為(wei)抗(kang)原(yuan)體(ti)特(te)異(yi)性(xing)結(jie)合(he)階(jie)段(duan),反(fan)應(ying)速(su)度(du)很(hen)快(kuai),隻(zhi)需(xu)幾(ji)秒(miao)至(zhi)幾(ji)分(fen)鍾(zhong)反(fan)應(ying)即(ji)可(ke)完(wan)畢(bi),但(dan)不(bu)出(chu)現(xian)肉(rou)眼(yan)可(ke)見(jian)現(xian)象(xiang)。第(di)二(er)階(jie)段(duan)為(wei)抗(kang)原(yuan)體(ti)反(fan)應(ying)的(de)可(ke)見(jian)階(jie)段(duan),表(biao)現(xian)為(wei)凝(ning)集(ji)、沉澱、補體結合反應等。反應速度慢,需幾分、幾十分以至更長時間。而且,在第二階段反應中,電解質、PH、溫度等環境因素的變化,都直接影響血清學反應的結果。
習慣上將經典的血清學反應分三種類別:凝集反應、沉澱反應和補體結合反應。
1.凝集反應
顆粒性抗原(細菌、紅細胞等)與相應抗體結合,在電解質參與下所形成的肉眼可見的凝集現象,稱為凝集反應(Agglutination reaction)。其中的抗原稱為凝集原,抗體稱為凝集素。在該反應中,因為單位體積抗體量大,做定量實驗時,應稀釋抗體。
(1)直接凝集反應
顆粒性抗原與相應抗體直接結合所出現的反應,稱為直接凝集反應(Direct agglution reaction)。
a.玻片凝集法。是一種常規的定性試驗方法。原理是用已知抗體來檢測未知抗原。常用於鑒定菌種、血(xue)型(xing)。如(ru)將(jiang)含(han)有(you)痢(li)疾(ji)杆(gan)菌(jun)抗(kang)體(ti)的(de)血(xue)清(qing)與(yu)待(dai)檢(jian)菌(jun)液(ye)各(ge)一(yi)滴(di),在(zai)玻(bo)片(pian)上(shang)混(hun)勻(yun),數(shu)分(fen)種(zhong)後(hou)若(ruo)出(chu)現(xian)肉(rou)眼(yan)可(ke)見(jian)的(de)凝(ning)集(ji)塊(kuai),即(ji)陽(yang)性(xing)反(fan)應(ying),證(zheng)明(ming)該(gai)菌(jun)是(shi)痢(li)疾(ji)杆(gan)菌(jun)。此(ci)法(fa)快(kuai)速(su)、簡便,但不能進行定量測定。
b.試shi管guan凝ning集ji法fa。是shi一yi種zhong定ding量liang試shi驗yan方fang法fa。多duo用yong已yi知zhi抗kang原yuan來lai檢jian測ce血xue清qing中zhong有you無wu相xiang應ying抗kang體ti及ji其qi含han量liang。常chang用yong於yu協xie助zhu診zhen斷duan某mou些xie傳chuan染ran病bing及ji進jin行xing流liu行xing病bing學xue調tiao查zha。如ru肥fei達da氏shi反fan應ying就jiu是shi診zhen斷duan傷shang寒han、付傷寒的試管凝集試驗。因為要測定抗體的含量,故將待檢查的血清用等滲鹽水倍比稀釋成不同濃度,然後加入等量抗原,37℃或56℃,2~4小時觀察,血清最高稀釋度仍有明顯凝集現象的,為該抗血清的凝集效價。
(2)間接凝集反應
將可溶性抗原(抗體)先吸附在一種與免疫無關的,顆粒狀微球表麵,然後與相應抗體(抗原)作用,在有電解質存在的條件下,即可發生凝集,稱為間接凝集反應(Indirect agglutination)。由於載體增大了可溶性抗原的反應麵積。當載體上有少量抗原與抗體結合。就出現肉眼可見的反應,敏感性很高。
2.沉澱反應
可溶性抗原與相應抗體結合,在有適量電解質存在下,經過一定時間,形成肉眼可見的沉澱物,稱為沉澱反應(Precipitation)。反(fan)應(ying)中(zhong)的(de)抗(kang)原(yuan)稱(cheng)為(wei)沉(chen)澱(dian)原(yuan),抗(kang)體(ti)為(wei)沉(chen)澱(dian)素(su)。由(you)於(yu)在(zai)單(dan)位(wei)體(ti)積(ji)內(nei)抗(kang)原(yuan)量(liang)大(da),為(wei)了(le)不(bu)使(shi)抗(kang)原(yuan)過(guo)剩(sheng),故(gu)應(ying)稀(xi)釋(shi)抗(kang)原(yuan),並(bing)以(yi)抗(kang)原(yuan)的(de)稀(xi)釋(shi)度(du)作(zuo)為(wei)沉(chen)澱(dian)反(fan)應(ying)的(de)效(xiao)價(jia)。
(1)環狀沉澱反應:是shi一yi種zhong定ding性xing試shi驗yan方fang法fa,可ke用yong已yi知zhi抗kang體ti檢jian測ce未wei知zhi抗kang原yuan。將jiang已yi知zhi抗kang體ti注zhu入ru特te製zhi小xiao試shi管guan中zhong,然ran後hou沿yan管guan壁bi徐xu徐xu加jia入ru等deng量liang抗kang原yuan,如ru抗kang原yuan與yu抗kang體ti對dui應ying,則ze在zai兩liang液ye界jie麵mian出chu現xian白bai色se的de沉chen澱dian圓yuan環huan。
(2)絮狀沉澱反應:將已知抗原與抗體在試管(如凹玻片)內混勻,如抗原抗體對應,而又二者比例適當時,會出現肉眼可見的絮狀沉澱,此為陽性反應。
(3)瓊脂擴散試驗:利li用yong可ke溶rong性xing抗kang原yuan抗kang體ti在zai半ban固gu體ti瓊qiong脂zhi內nei擴kuo散san,若ruo抗kang原yuan抗kang體ti對dui應ying,且qie二er者zhe比bi例li合he適shi,在zai其qi擴kuo散san的de某mou一yi部bu分fen就jiu會hui出chu現xian白bai色se的de沉chen澱dian線xian。每mei對dui抗kang原yuan抗kang體ti可ke形xing成cheng一yi條tiao沉chen澱dian線xian。有you幾ji對dui抗kang原yuan抗kang體ti,就jiu可ke分fen別bie形xing成cheng幾ji條tiao沉chen澱dian線xian。瓊qiong脂zhi擴kuo散san可ke分fen為wei單dan向xiang擴kuo散san和he雙shuang向xiang擴kuo散san兩liang種zhong類lei型xing。單dan向xiang擴kuo散san是shi一yi種zhong定ding量liang試shi驗yan。可ke用yong於yu免mian疫yi蛋dan白bai含han量liang的de測ce定ding。而er雙shuang向xiang擴kuo散san多duo用yong於yu定ding性xing試shi驗yan。由you於yu方fang法fa簡jian便bian易yi行xing,常chang用yong於yu測ce定ding分fen析xi和he鑒jian定ding複fu雜za的de抗kang原yuan成cheng分fen。 3、補體結合反應
補體結合反應(Complement fixation reaction)shizaibuticanyuxia,yimianyanghongxibaoherongxuesuzuoweizhishixitongdekangyuankangtifanying。butiwuteyixing,nengyurenheyizukangyuankangtifuhewujieheeryinqifanying。ruguobutiyumianyanghongxibao、溶血素的複合物結合,就會出現溶血現象,如果與細菌及相應抗體複合物結合,就會出現溶菌現象。因此,整個試驗需要有補體、待檢係統(已知抗體或抗原、未知抗原或抗體)及指示係統(綿羊細胞和溶血素)五wu種zhong成cheng份fen參can加jia。其qi試shi驗yan原yuan理li是shi補bu體ti不bu單dan獨du和he抗kang原yuan或huo抗kang體ti結jie合he。如ru果guo出chu現xian溶rong菌jun,是shi補bu體ti與yu待dai檢jian係xi統tong結jie合he的de結jie果guo,說shuo明ming抗kang原yuan抗kang體ti是shi相xiang對dui應ying的de,如ru果guo出chu現xian溶rong血xue,說shuo明ming抗kang原yuan抗kang體ti不bu相xiang對dui應ying。此ci反fan應ying操cao作zuo複fu雜za,敏min感gan性xing高gao,特te異yi性xing強qiang,能neng測ce出chu少shao量liang抗kang原yuan和he抗kang體ti,所suo以yi應ying用yong範fan圍wei較jiao廣guang。
手機版




