微wei生sheng物wu長chang期qi受shou到dao外wai界jie的de影ying響xiang
，遺yi傳chuan性xing狀zhuang必bi然ran發fa生sheng某mou些xie變bian異yi。正zheng是shi由you於yu變bian異yi的de存cun在zai才cai使shi得de生sheng物wu向xiang前qian進jin化hua。然ran而er由you於yu突tu變bian的de存cun在zai，菌jun種zhong在zai培pei養yang或huo保bao藏zang過guo程cheng中zhong，可ke能neng會hui出chu現xian某mou些xie優you良liang生sheng產chan性xing狀zhuang的de劣lie化hua、遺傳標記丟失、典型特征改變等現象，稱為菌種衰退。比如蘇雲金芽孢杆菌由於菌種衰退，導致其新生的菌體芽孢和伴孢晶體都比較小；保藏的沙門氏菌鞭毛抗原丟失
，導致H多價血清不凝固等。
 

1. 菌種衰退原因

菌種衰退的根本原因是有關基因的負突變。如果控製產量的基因發生負突變，則表現為產量下降；如果控製孢子生成的基因發生負突變，則產生孢子的能力下降。菌種在移種傳代過程中會發生自發突變。雖然自發突變的幾率很低(一般為10-6~10-9)
，youqishiduiyumouyitedingjiyinlaishuo，tubianpinlvgengdi。danshiyouyuweishengwujuyoujigaodedaixiefanzhinengli，suizhechuandaicishuzengjia
，shuaituixibaodeshumujiuhuibuduanzengjia
，zaishuliangshangzhujianzhanyoushi，zuizhongchengweiyizhushuaituiledejunzhu。ciwai，junzhongshuaituihaiyouyixiajizhongyuanyin：

1）表型延遲造成菌種衰退

表型延遲現象也會造成菌種衰退。如，在誘變育種過程中

，經常會發現某菌株初篩時產量較高，進行複篩時產量卻下降了。

2）質粒脫落導致菌種衰退

質粒脫落導致菌種衰退的情況在抗生素生產中較多，不少抗生素的合成是受質粒控製的。當菌株細胞由於自發突變或外界條件影響(如高溫)，致使控製產量的質粒脫落或者核內DNA和質粒複製不一致，即DNA複fu製zhi速su度du超chao過guo質zhi粒li，經jing多duo次ci傳chuan代dai後hou，某mou些xie細xi胞bao中zhong就jiu不bu具ju有you對dui產chan量liang起qi決jue定ding作zuo用yong的de質zhi粒li
，這zhe類lei細xi胞bao數shu量liang不bu斷duan提ti高gao達da到dao優you勢shi，則ze菌jun種zhong表biao現xian為wei衰shuai退tui。

3）連續傳代

連續傳代是加速菌種衰退的一個重要原因。一方麵，傳代次數越多
，發生自發突變(尤其是負突變)的幾率越高
；另一方麵
，傳代次數越多，群體中個別的衰退型細胞數量增加並占據優勢越快，致使群體表型出現衰退。

4）不適宜的培養和保藏條件

不適宜的培養和保藏條件是加速菌種衰退的另一個重要原因。不良的培養條件如營養成分
、溫度、濕度
、pH值、通氣量等和保藏條件如營養、含水量
、溫度、氧氣等，不僅會誘發衰退型細胞的出現，還會促進衰退細胞迅速繁殖
，在數量上大大超過正常細胞，造成菌種衰退。

2. 防止菌種衰退措施

caiyongyishuaituijunzhongjinxingshengchanhuiyingxiangshengchanxiaolv，erbayishuaituijunzhongzuoweiyangxingjunzhujinxingjianyan
，zehuiyingxiangjianyanzhengquelv。jiranbianyishibukebimiande
，namewomenyinggairuguobimianjunzhongshuaituine？

1）控製傳代次數

盡jin量liang避bi免mian不bu必bi要yao的de移yi種zhong和he傳chuan代dai，把ba必bi要yao的de傳chuan代dai減jian少shao到dao最zui低di的de水shui平ping以yi減jian少shao突tu變bian幾ji率lv。傳chuan代dai次ci數shu越yue多duo，產chan生sheng突tu變bian的de幾ji率lv就jiu越yue大da
，菌jun種zhong發fa生sheng衰shuai退tui的de機ji會hui就jiu越yue高gao。在zai實shi驗yan室shi檢jian驗yan或huo者zhe是shi生sheng產chan實shi際ji中zhong
，應ying嚴yan格ge控kong製zhi傳chuan代dai次ci數shu。中zhong國guo藥yao典dian當dang中zhong規gui定ding
，培pei養yang基ji靈ling敏min度du檢jian查zha所suo用yong的de菌jun株zhu傳chuan代dai次ci數shu不bu得de超chao過guo5代
，以防止菌株因傳代次數過多引起衰退影響檢驗。

2）利用不同類型細胞進行接種傳代

放線菌
，黴菌用菌絲進行移種比分生孢子容易衰退
，因菌絲是對核且有異核存在，所以移種黴菌適宜采用孢子。

3）良好的培養條件

不良的培養條件會衰退細胞的出現

，因此采用適宜的培養基進行菌種培養
，以減少衰退幾率

4）采用有效的菌種保藏方法

根據保存時間的長短
，選擇適宜的保存方法。

傳代培養法：複蘇後的第一代放於4℃冰箱或室溫保存，定期傳代培養。保藏時間依微生物種類而定。如，芽孢、黴菌
、酵母菌保存6個月轉一次，普通細菌1個月轉一次
，假單胞菌2周轉一次。

甘油凍存法：將複活後經過性能確認的菌株新鮮培養物（一般是第二代菌株），用0.85%的滅菌生理鹽水（約1-2ml）洗斜麵菌苔成菌懸液
；將上述菌懸液吸取適量於滅菌管（凍存管）中（如
，滅菌管容量為5ml
，則取1.5ml菌液）
，加入等體積的40%滅菌甘油，混勻，密封。保藏溫度為-20℃，一般可保存1-2年。

瓷珠保存管保存：菌株保藏管內含特製的小珠（20-25顆）和特殊溶液，隻需將培養好的菌株接入溶液中，搖勻成菌懸液
，細胞即吸附於小珠上，然後吸出溶液，將保藏管置-70℃可保存5年，置-20℃可保存2-3年。

---想了解更多資訊，微信搜索“藥物微生物檢驗”
，關注公眾號！---

---小編微信： 李老師 ---