zaiweishengwujiandingzhong，gelanshiranseyinggaishizuichujiechudeyizhongqufenxijundeshiyanfangfa。tongguogelanshiransejiandinghou，qufenchugelanshiyangxingjunheyinxingjun，pingjiejieguoyizuohouxudejiandingfenlixijun。keyishuo，gelanshiransezaiweishengwuyanjiuguochengzhong，shiyigeyinggaizhangwodejishu。
1.細菌的細胞壁

要了解革蘭氏染色的原理，先了解細菌的細胞壁：

細菌的細胞壁主要由肽聚糖組成，能夠固定細胞外形和保護細胞不受損傷
，其主要功能包括：

特定的抗原性以及抵禦抗生素、噬菌體的能力；

固定細胞外形以及提高機械強度，避免外力的損傷；

是細胞生長
、分裂和運動（主要是有鞭毛的細菌）的必需構造；

阻擋大分子物質（對生命活動有危害或潛在危害的物質）進入細胞。

2.細菌細胞壁的差異

細菌細胞壁除了含有肽聚糖，還有其它組分

，這些組分是革蘭氏陽性菌和陰性菌所不同的。

革蘭氏陽性菌的細胞壁主要由60%-95%的肽聚糖組成，還有10%-30%磷壁酸；陰性菌的細胞壁與陽性菌細胞壁相比較

，雖然厚度相對薄，但是成分複雜，除了肽聚糖外，還有一層由脂多糖、磷脂和若幹外膜蛋白組成的外膜結構。

革蘭氏陽性菌與陰性菌細胞壁的主要差異如下：

肽聚糖層：陽性菌的較厚且層次多，陰性菌的為單層且薄
；

外膜：隻有陰性菌存在外膜結構，包括了脂多糖和類脂；

磷壁酸：多數陽性菌都有磷壁酸，陰性菌不存在磷壁酸；

對機械力的抗性：陽性菌抗機械力的能力強於陰性菌
；

抗溶菌酶的能力：陰性菌抗溶菌酶的能力優於陽性菌。

3.革蘭氏染色的機製

革ge蘭lan氏shi染ran色se以yi細xi菌jun細xi胞bao壁bi化hua學xue成cheng分fen的de差cha異yi引yin起qi脫tuo色se能neng力li的de不bu同tong為wei基ji礎chu，即ji，細xi菌jun能neng否fou將jiang染ran色se劑ji阻zu礙ai在zai細xi胞bao壁bi中zhong的de原yuan理li，進jin行xing區qu分fen陽yang性xing菌jun和he陰yin性xing菌jun
，其qi結jie果guo為wei：陽性菌的細胞壁能夠將染色劑結晶紫阻留而染成紫色；陰性菌的細胞壁不能將染色劑阻留，經過複染後形成紅色。

經過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成結晶紫與碘的複合物
，該複合物不溶於水。陽性菌因為細胞壁較厚、肽聚糖層多和交聯致密，且不含類脂，當乙醇/丙酮進行脫色處理時
，肽聚糖網層結構因失水導致網孔變小，結晶紫與碘的複合物就被阻留在細胞壁中。

陰性菌因為細胞壁較薄，且外膜層類脂物質含量高，受到乙醇/丙(bing)酮(tong)作(zuo)用(yong)
，細(xi)胞(bao)壁(bi)結(jie)構(gou)發(fa)生(sheng)改(gai)變(bian)
，外(wai)膜(mo)的(de)類(lei)脂(zhi)溶(rong)解(jie)，肽(tai)聚(ju)糖(tang)網(wang)層(ceng)不(bu)能(neng)夠(gou)將(jiang)結(jie)晶(jing)紫(zi)與(yu)碘(dian)的(de)複(fu)合(he)物(wu)阻(zu)留(liu)
，重(zhong)新(xin)恢(hui)複(fu)為(wei)無(wu)色(se)的(de)狀(zhuang)態(tai)，然(ran)後(hou)經(jing)過(guo)沙(sha)黃(huang)等(deng)紅(hong)色(se)染(ran)劑(ji)的(de)複(fu)染(ran)形(xing)成(cheng)紅(hong)色(se)。

4.革蘭氏染色的操作

革蘭氏染色的基本步驟如下：

固定：塗片幹後加熱固定，火焰固定時塗片膜朝上，以中等速度越過火焰3次，或使用乙醇/甲醇固定
；

初染：滴加結晶紫染液

，1分鍾，清水洗去染液；

媒染：加碘液，1分鍾
，水洗；

脫色：加脫色液
，搖動10-30秒

，至無紫色脫落
，水洗；

複染：加複染液，30秒，水洗；

鏡檢：塗片幹後鏡檢。