yabaoransefashiliyongxijundeyabaohejuntiduiranliaodeqinhelibutongdeyuanli

，yongbutongranliaojinxingzhese，shiyabaohejuntichengbutongdeyanseerbianyuqubie。yabaobihou、透性低，著色
、脫色均較困難，因此，當先用一弱堿性染料，如孔雀綠（malachite green）或堿性品紅（basicfuchsin）在(zai)加(jia)熱(re)條(tiao)件(jian)下(xia)進(jin)行(xing)染(ran)色(se)時(shi)，此(ci)染(ran)料(liao)不(bu)僅(jin)可(ke)以(yi)進(jin)入(ru)菌(jun)體(ti)，而(er)且(qie)也(ye)可(ke)以(yi)進(jin)入(ru)芽(ya)孢(bao)，進(jin)入(ru)菌(jun)體(ti)的(de)染(ran)料(liao)可(ke)經(jing)水(shui)洗(xi)脫(tuo)色(se)
，而(er)進(jin)入(ru)芽(ya)孢(bao)的(de)染(ran)料(liao)則(ze)難(nan)以(yi)透(tou)出(chu)，若(ruo)再(zai)用(yong)複(fu)染(ran)液(ye)（如番紅液）或襯托溶液（如黑色素溶液）處理，則菌體和芽孢易於區分。

二
、器材

　　枯草芽孢杆菌，蠟狀芽孢杆菌（Bacillus cereus），生孢梭菌（Clostridium sporogenes）；

　　孔雀綠染液，番紅水溶液，苯酚品紅溶液
，黑色素溶液等。

三
、操作步驟

方法1、

（1）將培養24小時左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作塗片、幹燥、固定。

（2）滴加3—5滴孔雀綠染液於已固定的塗片上。

（3）用yong木mu夾jia夾jia住zhu載zai玻bo片pian在zai火huo焰yan上shang加jia熱re，使shi染ran液ye冒mao蒸zheng汽qi但dan勿wu沸fei騰teng

，切qie忌ji使shi染ran液ye蒸zheng幹gan，必bi要yao時shi可ke添tian加jia少shao許xu染ran液ye。加jia熱re時shi間jian從cong染ran液ye冒mao蒸zheng汽qi時shi開kai始shi計ji算suan約yue4—5分鍾。這一步也可不加熱，改用飽和的孔雀綠水溶液（約7．6％）染10分鍾。

（4）傾去染液，待玻片冷卻後水洗至孔雀綠不再褪色為止。

（5）用番紅水溶液複染1分鍾，水洗。

（6）待幹燥後
，置油鏡觀察，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。

方法2、

（1）取二支潔淨的小試管，分別加入0．2ml無菌水
，再往一管中加入1—2接種環的蠟狀芽孢杆菌的菌苔
，另一管中加入1—2接種環的生孢梭菌的菌苔，兩管各自充分混合成濃厚的菌懸液。

（2）在菌懸液中分別加入0．2ml苯酚品紅溶液，充分混合後，於沸水浴中加熱3—5分鍾。

（3）用接種環分別取上述混合液2—3環於兩片載玻片上，塗薄，風幹後，將載玻片稍傾斜於燒杯上
，用95％乙醇衝洗至無紅色液流出。

（4）再用自來水衝洗，濾紙吸幹。

（5）取1—2接種環黑色素溶液於塗片處，立即展開塗薄，自然幹燥後
，油鏡觀察

，在淡紫灰色背景的襯托下，菌體為白色，菌體內的芽孢為紅色。

四、實驗報告