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標準曲線的製作要求
按GB/T22554-2010《基於標準樣品的線性校準》推薦：1、標準曲線的濃度範圍應覆蓋正常操作條件下的被測量範圍；2、標準樣品的組分盡量與被測樣品組分一致；3、標準樣品的濃度值應等距離的分布在被測量範圍；4、標準樣品的個數至少應有3個濃度；5、每個標準點至少重複2次，這個重複是指從稀釋開始；如果國家標準有相應的濃度係列推薦，盡量按國家標準，如果你要偷懶，比如我要減少標準點，至少要有理論標準支撐，比如至少要3個濃度。工作中我們經常采用線性校準，因為線性方程最為簡潔。
標準曲線的作法
(1)標準液濃度的選擇：在製備標準曲線時，標準液濃度選擇一般應能包括待測樣品的可能變異最低與最高值，一般可選擇5種濃度。濃度差距最好是成倍增加或等級增加，並應與被測液同樣條件下顯色測定。
(2)標準液的測定：在比色時，讀取光密度至少讀2-3次，求其平均值，以減少儀器不穩定而產生的誤差。
(3)標準曲線圖的繪製：一般常用的是光密度--濃度標準曲線。
①用普通方格紙作圖。圖紙最好是正方形(長：寬=l：1)或長方形(長：寬=3 ：2)，以橫軸為濃度，縱軸為光密度，一般濃度的全距占用了多少格，光密度的全距也應占用相同的格數。
在適當範圍內配製各種不同濃度的標準液，求其光密度，繪製標準曲線，以濃度位置向上延長，光密度位置向右延長、交點即為此座標標點。然後，將各坐標點和原點聯成一條線，若符合Lambert-Beer氏定律，則係通過原點的直線。
②若各點不在一直線，則可通過原點，盡可能使直線通過更多點，使不在直線上的點盡量均勻地分布在直線的兩邊。
③標準曲線繪製完畢以後，應在座標紙上注明實驗項目的名稱，所使用比色計的型號和儀器編號、濾光片號碼或單色光波長以及繪製的日期、室溫。
④繪製標準曲線：一般應作二次或三次以上的平行測定，重複性良好曲線方可應用。
⑤繪製好的標準曲線隻能供以後在相同條件下操作測定相同物質時使用。當更換儀器、移動儀器位置、調換試劑及室溫有明顯改變時，標準曲線需重新繪製。
⑥標準曲線橫坐標的標度：從標準液的含量換算成待測液的濃度。
標準曲線的核心問題要解決
1、能找到確切濃度的標準物質或標準品。
2、標biao準zhun係xi列lie和he待dai測ce物wu質zhi一yi定ding要yao有you相xiang同tong和he一yi致zhi的de基ji體ti，因yin為wei樣yang品pin基ji體ti可ke能neng會hui幹gan擾rao儀yi器qi的de響xiang應ying，從cong這zhe個ge意yi義yi上shang講jiang，樣yang品pin的de前qian處chu理li實shi際ji就jiu是shi提ti供gong標biao準zhun和he樣yang品pin同tong樣yang的de基ji體ti環huan境jing，盡jin量liang祛qu除chu幹gan擾rao基ji體ti。所suo以yi最zui好hao的de標biao準zhun係xi列lie應ying該gai是shi樣yang品pin基ji體ti匹pi配pei的de標biao準zhun係xi列lie。
標準曲線的製作注意事項
對於分析定量來說，如果標線沒有做好，那麼即使前處理做的再好，回收率再好，也會使你的結論失去一定的參考價值！也失去了與其他人員測試數據的可比性！要做好定量工作除了儀器正常外，我們也要配製好一條好的標線：
1.首先盡量選取有證書的標準物質，不管是直接要用的母液還是要配置成母液的其他物質（如固體，粉末等）！選取有證書的標準物質是為了大家都有一個共同的基準（量值溯源）！如果實在是在沒有有證書的母液條件下，就用有證書的其他物質來配置！如果有就最好用有證書的物質，因為自己配置的母液會帶來一定的誤差！
2.在配置時要把所有要用到的工具（容量瓶、移液槍、移液管等）進行校正，最好拿到國家計量中心或有資質的部門校正！有校正能力的實驗室也可自己校正！
3.防止汙染！要洗淨所要用到的工具！對於離子色譜來說，主要使用去離子水清洗！
4.配製好標液後，及時上機，避免有的物質不穩定或易被汙染！
但在常規實驗室中也隻有常規分析的時候，相對比較容易些，而現目前不少實驗項目均要求檢測ppb級含量的物質，IC是很容易引入汙染的（Cl、Na等）。跨越幾個數量級時，線性係數雖然很好，但是RSD值卻很大，痕量分析的定量誤差是相當的大。
5.選取合適的方程。根據物質的和檢測器的特性，選取合適的線性方程。（比如是否要強製過原點，是直線還是二次方程等）
6.檢查線性是否合格。除線性本身的一些參數：RSD值是否小於一定值比如（5%），線(xian)性(xing)相(xiang)關(guan)係(xi)數(shu)是(shi)否(fou)達(da)到(dao)比(bi)如(ru)四(si)個(ge)九(jiu)以(yi)上(shang)，如(ru)果(guo)不(bu)是(shi)強(qiang)行(xing)過(guo)原(yuan)點(dian)的(de)一(yi)次(ci)方(fang)程(cheng)的(de)節(jie)距(ju)是(shi)否(fou)合(he)理(li)等(deng)外(wai)，還(hai)要(yao)檢(jian)查(zha)濃(nong)度(du)的(de)準(zhun)確(que)性(xing)，因(yin)為(wei)一(yi)定(ding)濃(nong)度(du)的(de)母(mu)液(ye)，按(an)一(yi)定(ding)比(bi)例(li)稀(xi)釋(shi)都(dou)可(ke)成(cheng)一(yi)定(ding)線(xian)性(xing)的(de)，但(dan)濃(nong)度(du)就(jiu)不(bu)一(yi)定(ding)就(jiu)是(shi)所(suo)需(xu)要(yao)的(de)！所以光看線性好，是不能代表所做的標線就是合格的。
7.標線的準確性除儀器自身的回收率、響應值等相關外，另外我們可以做到：
⑴不同的人員配置標線和QC；
⑵防止母液是否有問題，要做標液的新舊對比或者不同的牌子的有證標準物質（參考物質）進行監控和或使用或次級標準物質（參考物質）開展內部質量控製；
⑶參加實驗室間的比對或能力驗證；
⑷使用相同或不同方法進行重複檢測或校準；
⑸對存留物品進行再檢測或再校準。
8.標線合格後，還要通過QC等觀察標線的使用壽命！
常見問題：
1.標準曲線需要人為的增加（0,0）點嗎？
不能。通常的標準係列多是配製0,1,2,3mg/L係列這樣的說法，沒做實驗人為添加（0,0）很不妥，因為很多時候0管進入儀器可能也有響應值，這也是我們考察試劑空白的一個重要步驟。這個0管在某些時候非常重要，比如全血鉛測定，我們采用牛血清來基體匹配標準係列，如果此時你用酸做空白或沒做實驗人為添加（0,0），那你就很難做好標準曲線。所以標準曲線的0管也是做好標準曲線的重要考慮點。
2.標準曲線需要減掉試劑空白來做嗎？
不需要。儀器測出來標準係列的響應值可以減掉試劑空白或減掉0管的響應值來做，工作中我們也常用0管來做儀器調零。其實沒有必要那麼麻煩，即使空白或0管有響應值，在構建標準曲線時，我們已經認為該響應值就是0濃度，也就是扣除了這個空白的。
3.什麼時候用Y=bX和二次曲線呢？
標準曲線我們通常采用的是Y=a+bX，曲線擬合完必須要做統計檢驗，且要做統計完備的線性檢驗和失擬檢驗，然後再做a與0的差別檢驗，如果a與0的統計學上無差異，你就可以考慮用Y=bX的擬合曲線，擬合出來後同樣做線性檢驗和失擬檢驗，如果線性檢驗合格（P<0.05）且失擬檢驗合格（p>0.05）此時你就可以采用Y=bX。二次曲線的采用同樣是這樣的道理，如果你Y=a+bX時擬合不合格，你就考慮用Y=a+bX+cX2，同樣做失擬檢驗，考察擬合的符合情況。如果Y=a+bX 和Y=a+bX+cX2都滿足擬合檢驗和失擬檢驗合格，則采用Y=a+bX形式，這樣符合統計學上參數最少的統計簡潔性原則。
4.標準曲線去查含量時是先減空白信號算樣品含量還是先算出空白含量相減呢？
工gong作zuo中zhong我wo們men常chang要yao減jian掉diao空kong白bai得de到dao樣yang品pin含han量liang，現xian有you國guo家jia標biao準zhun方fang法fa有you的de推tui薦jian先xian算suan出chu空kong白bai含han量liang，用yong樣yang品pin含han量liang相xiang減jian，也ye有you推tui薦jian先xian用yong樣yang品pin信xin號hao減jian空kong白bai信xin號hao然ran後hou去qu標biao準zhun曲qu線xian推tui算suan含han量liang。而er且qie這zhe兩liang種zhong算suan法fa常chang常chang差cha距ju很hen大da。其qi實shi這zhe種zhong差cha距ju往wang往wang是shi低di含han量liang水shui平ping時shi才cai出chu現xian，在zai低di含han量liang水shui平ping通tong過guo標biao準zhun曲qu線xian推tui算suan含han量liang時shi，本ben身shen不bu確que定ding度du就jiu很hen大da。這zhe兩liang種zhong方fang法fa都dou可ke以yi。個ge人ren推tui薦jian先xian用yong樣yang品pin信xin號hao減jian空kong白bai信xin號hao然ran後hou去qu標biao準zhun曲qu線xian推tui算suan含han量liang，因yin為wei這zhe樣yang出chu來lai的de含han量liang不bu確que定ding度du要yao小xiao一yi些xie，而er先xian算suan出chu空kong白bai含han量liang再zai相xiang減jian就jiu增zeng加jia了le1次標準曲線推算含量時的不確定度，因為好的測量永遠是不確定度小的測量。
標準曲線法和標準加入法區別？
1.標準曲線法：
也稱外標法或直接比較法，是一種簡便、快速的定量方法。與分光光度分析中的標準曲線法相似，首先用欲測組分的標準樣品繪製標準曲線。
具體方法是：yongbiaozhunyangpinpeizhichengbutongnongdudebiaozhunxilie，zaiyudaicezufenxiangtongdeseputiaojianxia，dengtijizhunquejinyang，celianggefengdefengmianjihuofenggao，yongfengmianjihuofenggaoduiyangpinnongduhuizhibiaozhunquxian，cibiaozhunquxianyingshitongguoyuandiandezhixian。ruobiaozhunquxianbutongguoyuandian，zeshuomingcunzaixitongwucha。biaozhunquxiandexielvjiweijueduixiaozhengyinzi。
在(zai)測(ce)定(ding)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)組(zu)分(fen)含(han)量(liang)時(shi)，要(yao)用(yong)與(yu)繪(hui)製(zhi)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)完(wan)全(quan)相(xiang)同(tong)的(de)色(se)譜(pu)條(tiao)件(jian)作(zuo)出(chu)色(se)譜(pu)圖(tu)，測(ce)量(liang)色(se)譜(pu)峰(feng)麵(mian)積(ji)或(huo)峰(feng)高(gao)，然(ran)後(hou)根(gen)據(ju)峰(feng)麵(mian)積(ji)和(he)峰(feng)高(gao)在(zai)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)上(shang)直(zhi)接(jie)查(zha)出(chu)注(zhu)入(ru)色(se)譜(pu)柱(zhu)中(zhong)樣(yang)品(pin)組(zu)分(fen)的(de)濃(nong)度(du)。
標準曲線法的優點是：繪製好標準工作曲線後測定工作就變得相當簡單，可直接從標準工作曲線上讀出含量，因此特別適合於大量樣品的分析。
標準曲線法的缺點是：每次樣品分析的色譜條件（檢測器的響應性能，柱溫，流動相流速及組成，進樣量，柱效等）很難完全相同，因此容易出現較大誤差。此外，標準工作曲線繪製時，一般使用欲測組分的標準樣品（或已知準確含量的樣品），而實際樣品的組成卻千差萬別，因此必將給測量帶來一定的誤差。
2.標準加入法，又名標準增量法：
是一種被廣泛使用的檢驗儀器準確度的測試方法。這種方法尤其適用於檢驗樣品中是否存在幹擾物質。
具體方法是：將(jiang)一(yi)定(ding)量(liang)已(yi)知(zhi)濃(nong)度(du)的(de)標(biao)準(zhun)溶(rong)液(ye)加(jia)入(ru)待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)中(zhong)，測(ce)定(ding)加(jia)入(ru)前(qian)後(hou)樣(yang)品(pin)的(de)濃(nong)度(du)。加(jia)入(ru)標(biao)準(zhun)溶(rong)液(ye)後(hou)的(de)濃(nong)度(du)將(jiang)比(bi)加(jia)入(ru)前(qian)的(de)高(gao)，其(qi)增(zeng)加(jia)的(de)量(liang)應(ying)等(deng)於(yu)加(jia)入(ru)的(de)標(biao)準(zhun)溶(rong)液(ye)中(zhong)所(suo)含(han)的(de)待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)的(de)量(liang)。如(ru)果(guo)樣(yang)品(pin)中(zhong)存(cun)在(zai)幹(gan)擾(rao)物(wu)質(zhi)，則(ze)濃(nong)度(du)的(de)增(zeng)加(jia)值(zhi)將(jiang)小(xiao)於(yu)或(huo)大(da)於(yu)理(li)論(lun)值(zhi)。
總(zong)的(de)來(lai)說(shuo)，標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)法(fa)適(shi)用(yong)於(yu)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)的(de)基(ji)體(ti)和(he)樣(yang)品(pin)的(de)基(ji)體(ti)大(da)致(zhi)相(xiang)同(tong)的(de)情(qing)況(kuang)，優(you)點(dian)是(shi)速(su)度(du)快(kuai)，缺(que)點(dian)是(shi)當(dang)樣(yang)品(pin)基(ji)體(ti)複(fu)雜(za)時(shi)不(bu)正(zheng)確(que)。標(biao)準(zhun)加(jia)入(ru)法(fa)可(ke)以(yi)有(you)效(xiao)克(ke)服(fu)上(shang)麵(mian)所(suo)說(shuo)的(de)缺(que)點(dian)，因(yin)為(wei)他(ta)是(shi)把(ba)樣(yang)品(pin)和(he)標(biao)準(zhun)混(hun)在(zai)一(yi)起(qi)同(tong)時(shi)測(ce)定(ding)的(de)，但(dan)他(ta)也(ye)有(you)缺(que)點(dian)就(jiu)是(shi)速(su)度(du)很(hen)慢(man)。標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)法(fa)可(ke)在(zai)樣(yang)品(pin)很(hen)多(duo)的(de)時(shi)候(hou)使(shi)用(yong)，先(xian)做(zuo)出(chu)曲(qu)線(xian)，然(ran)後(hou)從(cong)曲(qu)線(xian)上(shang)找(zhao)點(dian)，那(na)樣(yang)方(fang)便(bian)。標(biao)準(zhun)加(jia)入(ru)法(fa)，適(shi)合(he)數(shu)量(liang)少的時候用。
