1、紫外吸收檢測器
紫外吸收(UV)檢測器是目前HPLC應用最廣泛的檢測器。其工作原理是朗伯-比(bi)爾(er)定(ding)律(lv)。這(zhe)種(zhong)檢(jian)測(ce)器(qi)靈(ling)敏(min)度(du)高(gao),線(xian)性(xing)範(fan)圍(wei)寬(kuan),對(dui)流(liu)速(su)和(he)溫(wen)度(du)變(bian)化(hua)不(bu)敏(min)感(gan),可(ke)用(yong)於(yu)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)分(fen)離(li)。紫(zi)外(wai)吸(xi)收(shou)檢(jian)測(ce)要(yao)求(qiu)被(bei)檢(jian)測(ce)樣(yang)品(pin)組(zu)分(fen)有(you)紫(zi)外(wai)-可ke見jian光guang吸xi收shou,而er使shi用yong的de流liu動dong相xiang無wu吸xi收shou,或huo在zai被bei測ce組zu分fen吸xi收shou波bo長chang處chu無wu吸xi收shou。一yi般ban選xuan擇ze在zai欲yu分fen析xi物wu有you最zui大da吸xi收shou的de波bo長chang處chu進jin行xing檢jian測ce,以yi獲huo得de最zui大da靈ling敏min度du和he抗kang幹gan擾rao能neng力li。在zai沒mei有you最zui大da吸xi收shou時shi,可ke采cai用yong末mo端duan吸xi收shou。檢jian測ce波bo長chang的de選xuan擇ze除chu取qu決jue於yu待dai測ce物wu質zhi的de成cheng分fen和he分fen子zi結jie構gou外wai,還hai必bi須xu考kao慮lv流liu動dong相xiang組zu成cheng、gongcunzufenganraodengyinsu。tebieshigezhongrongjidouyouyidingdetouguobochangxiaxianzhi,chaoguozhegebochang,rongjidexishouhuibiandehenqiang,yizhiyubunenghenhaodicechudaicewuzhidexishouqiangdu。xiabiaoliechuleHPLC中一些常用的溶劑透過波長的下限。

2、光電二極管陣列檢測器
光電二極管陣列檢測器(photodiode array detector,PDAD)又稱快速掃描紫外可見分光度計,是一種新型的光吸收檢測器。它采用光電二極管陣列作為檢測元件,形成多通道並行工作,同時它對光柵分離的所有波長的光信號進行檢測,然後將其入射到陣列接收機,然後快速掃描二極管陣列來采集數據,得到吸收值(A)是保留時間(tR)和波長(L)函han數shu的de三san維wei色se譜pu光guang譜pu圖tu。由you此ci可ke及ji時shi觀guan察cha與yu每mei一yi組zu分fen的de色se譜pu圖tu相xiang應ying的de光guang譜pu數shu據ju,從cong而er迅xun速su決jue定ding具ju有you最zui佳jia選xuan擇ze性xing和he靈ling敏min度du的de波bo長chang。計ji算suan機ji化hua的de數shu據ju處chu理li,還hai可ke進jin行xing色se譜pu峰feng光guang譜pu相xiang似si性xing比bi較jiao、峰純度檢測及利用譜圖庫對樣品進行檢索等,為定性、定量分析提供更豐富的信息。
danguangshuerjiguanzhenliejianceqi,guangyuanfachudeguangxiantongguojiancechi,tousheguangyouquanxiguangzhasesanchengduoseguang,shedaozhenlieyuanjianshang,shisuoyoubochangdeguangzaijieshouqishangtongshibeijiance。zhenlieshijieshouqishangdeguangxinhaoyongdianzixuedefangfakuaisusaomiaotiquchulai,meifutuxiangjinxuyao10 ms,遠遠超過色譜流出峰的速度,因此可隨峰掃描。
3、熒光檢測器
熒光檢測器(fluorescence detector, FD)是一種高靈敏度、有(you)選(xuan)擇(ze)性(xing)的(de)檢(jian)測(ce)器(qi),可(ke)檢(jian)測(ce)能(neng)產(chan)生(sheng)熒(ying)光(guang)的(de)化(hua)合(he)物(wu)。熒(ying)光(guang)檢(jian)測(ce)器(qi)的(de)原(yuan)理(li)與(yu)熒(ying)光(guang)分(fen)析(xi)法(fa)相(xiang)同(tong),化(hua)合(he)物(wu)受(shou)紫(zi)外(wai)光(guang)激(ji)發(fa)後(hou),發(fa)射(she)出(chu)比(bi)激(ji)發(fa)光(guang)波(bo)長(chang)更(geng)長(chang)的(de)光(guang),稱(cheng)為(wei)熒(ying)光(guang)或(huo)發(fa)射(she)光(guang)。許(xu)多(duo)藥(yao)物(wu)和(he)生(sheng)命(ming)活(huo)性(xing)物(wu)質(zhi)具(ju)有(you)天(tian)然(ran)熒(ying)光(guang),能直接檢測,某些不發熒光的物質可通過化學衍生化生成熒光衍生物,然後進行熒光檢測。其最小檢測濃度可達0.1 ng/mL,適用於痕量分析。一般情況下,熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個(ge)數(shu)量(liang)級(ji),但(dan)其(qi)線(xian)性(xing)範(fan)圍(wei)不(bu)如(ru)紫(zi)外(wai)檢(jian)測(ce)器(qi)寬(kuan)。近(jin)年(nian)來(lai),采(cai)用(yong)激(ji)光(guang)作(zuo)為(wei)熒(ying)光(guang)檢(jian)測(ce)器(qi)的(de)光(guang)源(yuan)而(er)產(chan)生(sheng)的(de)激(ji)光(guang)誘(you)導(dao)熒(ying)光(guang)檢(jian)測(ce)器(qi)極(ji)大(da)地(di)增(zeng)強(qiang)了(le)熒(ying)光(guang)檢(jian)測(ce)的(de)信(xin)噪(zao)比(bi),因(yin)而(er)具(ju)有(you)很(hen)高(gao)的(de)靈(ling)敏(min)度(du),在(zai)痕(hen)量(liang)和(he)超(chao)痕(hen)量(liang)分(fen)析(xi)中(zhong)得(de)到(dao)廣(guang)泛(fan)應(ying)用(yong)。
4、示差折光檢測器
示差折光檢測器(differential refractive Index detector, RID)是一種通用的濃度檢測器,對所有溶質都有響應。某些不能用選擇性檢測器檢測的組分,如高分子化合物、糖類、脂zhi肪fang烷wan烴ting等deng,可ke用yong示shi差cha檢jian測ce器qi檢jian測ce。示shi差cha檢jian測ce器qi是shi基ji於yu連lian續xu測ce定ding樣yang品pin流liu路lu和he參can比bi流liu路lu之zhi間jian折zhe射she率lv的de變bian化hua來lai測ce定ding樣yang品pin含han量liang的de。光guang從cong一yi種zhong介jie質zhi進jin入ru另ling一yi種zhong介jie質zhi時shi,由you於yu兩liang種zhong物wu質zhi的de折zhe射she率lv不bu同tong就jiu會hui產chan生sheng折zhe射she。隻zhi要yao樣yang品pin組zu分fen與yu流liu動dong相xiang的de折zhe光guang指zhi數shu不bu同tong,就jiu可ke被bei檢jian測ce,二er者zhe相xiang差cha愈yu大da,靈ling敏min度du愈yu高gao。在zai一yi定ding濃nong度du範fan圍wei內nei檢jian測ce器qi的de輸shu出chu與yu溶rong質zhi濃nong度du成cheng正zheng比bi。
5、電化學檢測器
電化學檢測器(electrochemical detector, ECD)屬選擇性檢測器,主要有電導檢測器、安培檢測器、介電常數檢測器和電位測定檢測器等,可檢測具有電活性的化合物。電導、電位等檢測器已在離子色譜中得到了廣泛應用;介電常數檢測器性能類似於示差折光檢測器;安培檢測器可檢測氧化性物質,適用範圍很寬。
電化學探測器的優點:
①靈敏度高,檢測量一般為ng級,可以達到pg級;
②選擇性好,可測定大量非電活性物質中極痕量電活性物質;
③線性範圍寬,通常為4~5個數量級;
④設備簡單,成本較低;
⑤易於自動操作。
6、化學發光檢測器
化學發光檢測器(Chemiluminescence detector, CD)是近年來發展起來的一種快速、靈敏的新型檢測器,具有設備簡單、價格低廉、xianxingfanweikuandengyoudian。qiyuanlishijiyumouxiewuzhizaichangwenxiajinxinghuaxuefanying,shengchengchuyujifataishifanyingzhongjiantihuofanyingchanwu,dangtamencongjifataifanhuijitaishi,jiufashechuguangzi。youyuwuzhijifataidenengliangshilaizihuaxuefanying,gujiaozuohuaxuefaguang。dangfenlizufencongsepuzhuzhongxituochulaihou,lijiyushidangdehuaxuefaguangshijihunhe,yinqihuaxuefanying,daozhifaguangwuzhichanshengfushe,qiguangqiangduyugaiwuzhidenongduchengzhengbi。
這(zhe)種(zhong)檢(jian)測(ce)器(qi)不(bu)需(xu)要(yao)光(guang)源(yuan),也(ye)不(bu)需(xu)要(yao)複(fu)雜(za)的(de)光(guang)學(xue)係(xi)統(tong),隻(zhi)要(yao)有(you)恒(heng)流(liu)泵(beng),將(jiang)化(hua)學(xue)發(fa)光(guang)試(shi)劑(ji)以(yi)一(yi)定(ding)的(de)流(liu)速(su)泵(beng)入(ru)混(hun)合(he)器(qi)中(zhong),使(shi)之(zhi)與(yu)柱(zhu)流(liu)出(chu)物(wu)迅(xun)速(su)而(er)又(you)均(jun)勻(yun)地(di)混(hun)合(he)產(chan)生(sheng)化(hua)學(xue)發(fa)光(guang),通(tong)過(guo)光(guang)電(dian)倍(bei)增(zeng)管(guan)將(jiang)光(guang)信(xin)號(hao)變(bian)成(cheng)電(dian)信(xin)號(hao),就(jiu)可(ke)進(jin)行(xing)檢(jian)測(ce)。這(zhe)種(zhong)檢(jian)測(ce)器(qi)的(de)最(zui)小(xiao)檢(jian)出(chu)量(liang)可(ke)達(da)10~12g。
7、蒸發光散射檢測器
蒸發光散射檢測器(evaporative light—scattering detector,ELSD)是20世紀90年代出現的新型通用型質量檢測器,它適用於檢測揮發性低於流動相的組分,主要用於檢測糖類、高級脂肪酸、磷脂、維生素、氨基酸、甘(gan)油(you)三(san)酯(zhi)及(ji)甾(zai)體(ti)等(deng),並(bing)在(zai)沒(mei)有(you)標(biao)準(zhun)品(pin)和(he)化(hua)合(he)物(wu)結(jie)構(gou)參(can)數(shu)未(wei)知(zhi)的(de)情(qing)況(kuang)下(xia)檢(jian)測(ce)未(wei)知(zhi)化(hua)合(he)物(wu)。對(dui)各(ge)物(wu)質(zhi)有(you)幾(ji)乎(hu)相(xiang)同(tong)的(de)響(xiang)應(ying),但(dan)是(shi)其(qi)靈(ling)敏(min)度(du)比(bi)較(jiao)低(di),尤(you)其(qi)是(shi)有(you)紫(zi)外(wai)吸(xi)收(shou)的(de)組(zu)分(fen)。此(ci)外(wai)流(liu)動(dong)相(xiang)必(bi)須(xu)是(shi)揮(hui)發(fa)性(xing)的(de),不(bu)能(neng)含(han)有(you)緩(huan)衝(chong)鹽(yan)等(deng)。它(ta)的(de)通(tong)用(yong)檢(jian)測(ce)原(yuan)理(li)克(ke)服(fu)了(le)常(chang)見(jian)於(yu)HPLC傳統檢測方法的不足,已越來越多地應用於HPLC、超臨界色譜和逆流色譜中。不同於紫外和熒光檢測器,ELSDdexiangyingbuyilaiyuyangpindeguangxuetexing,renhehuifaxingdiyuliudongxiangdeyangpinjunnengbeijiance,bushouqiguannengtuandeyingxiang。lingmindubishichazheguangjianceqigao,duiwendubianhuabumingan,jixianwending,shiheyutiduxituoyexiangsepulianyong。
(1)ELSD檢測原理
ELSD運行有三個過程:第一是霧化過程,用惰性氣體或淨化空氣將色譜柱流出物霧化;第二是蒸發過程,在一個加熱管(漂移管)中將流動相揮發;第三是檢測過程,測定留下來的樣品顆粒的光散射。所有商品ELSD都由一種或兩種模式完成這三個過程。模式A的操作是全部柱流出物(氣溶膠)都進入直的漂移管,讓流動相在其中蒸發,模式B中zhong是shi將jiang氣qi溶rong膠jiao通tong過guo一yi個ge彎wan管guan,在zai此ci管guan中zhong大da的de顆ke粒li沉chen積ji下xia來lai流liu入ru廢fei氣qi管guan,其qi餘yu的de小xiao顆ke粒li進jin入ru螺luo旋xuan狀zhuang的de漂piao移yi管guan,在zai上shang述shu兩liang種zhong模mo式shi中zhong,樣yang品pin顆ke粒li均jun進jin入ru光guang管guan,使shi激ji光guang發fa生sheng散san射she而er得de以yi檢jian測ce。
(2)ELSD檢測的優點及缺點
優點:
①具有較好的通用性,任何揮發性低於流動相的樣品均能被檢測;
②在相同色譜條件下,物理性質相似的物質可給出一致的響應;
③能與梯度洗脫方式相容;
④靈敏度高於示差折光檢測器、紫外末端吸收檢測法;
⑤在ELSD上開發的實驗方法移植到質譜上則無需修改。
ELSD檢測的不足之處主要是:
①靈敏度不夠理想;
②流動相的選擇受限;
③某些樣品線性範圍較窄等。
(3)影響ELSD檢測性能的基本因素
①操作模式選擇,選擇合適的操作模式可提高方法的靈敏度,操作模式的選擇取決於樣品的揮發性、流動相的組成及其流速。
②流動相組成及流速選擇,流動相的揮發性越好,方法的靈敏度越高。流動相的流速越低,相應的信號越強。
③漂移管溫度對基線水平和噪音的影響並無明顯規律性。最優溫度應為在流動相基本揮發基礎上,產生可接受噪音的最低溫度。
④載氣流速是影響檢測性能的一個很重要因素。最優載氣流速應是在可接受噪音的基礎上(例如0.5mV),產生最大檢測響應值時的最低流速。
(4)ELSD檢測時的數據處理模式
ELSD檢測最常采用的數學模型是lgy=algx+b (y為響應值,x為進樣量或樣品濃度,a、b為回歸常數),也有采用二次曲線模型的(y=ax2+bx+c)。由於響應值(y)與進樣量(x)之間並非線性關係,故其數據處理不同於紫外檢測方法。ELSDcedingyizhiwuzhidehanliangshi,yibanyingyongsuixingbiaozhunquxianfaerfeiwaibiaofa,yinweixiaozhengxianxingfangchengdejiejubingbuweiling。xinyaojizhunpindejianli,chuleduizhaopinweilingwaiyizhonghanliangyizhi、結構相似的物質外,數據處理方式同上相似。ELSD測(ce)定(ding)物(wu)質(zhi)純(chun)度(du)時(shi),由(you)於(yu)響(xiang)應(ying)值(zhi)與(yu)進(jin)樣(yang)量(liang)間(jian)並(bing)非(fei)線(xian)性(xing)關(guan)係(xi),多(duo)通(tong)過(guo)繪(hui)製(zhi)其(qi)中(zhong)的(de)一(yi)種(zhong)或(huo)數(shu)種(zhong)物(wu)質(zhi)的(de)隨(sui)行(xing)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)來(lai)加(jia)以(yi)校(xiao)正(zheng)。多(duo)組(zu)分(fen)物(wu)質(zhi)的(de)分(fen)析(xi),除(chu)了(le)隨(sui)行(xing)校(xiao)正(zheng)曲(qu)線(xian)的(de)線(xian)性(xing)範(fan)圍(wei)有(you)所(suo)區(qu)別(bie)外(wai),數(shu)據(ju)處(chu)理(li)同(tong)上(shang)類(lei)似(si)。盡(jin)管(guan)存(cun)在(zai)一(yi)些(xie)不(bu)足(zu)之(zhi)處(chu),但(dan)是(shi)ELSD作(zuo)為(wei)一(yi)種(zhong)新(xin)型(xing)的(de)通(tong)用(yong)型(xing)質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)器(qi),具(ju)有(you)許(xu)多(duo)獨(du)特(te)的(de)優(you)勢(shi),例(li)如(ru)它(ta)的(de)通(tong)用(yong)性(xing),響(xiang)應(ying)因(yin)子(zi)的(de)一(yi)致(zhi)性(xing)以(yi)及(ji)與(yu)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)相(xiang)容(rong)等(deng),將(jiang)在(zai)無(wu)特(te)征(zheng)紫(zi)外(wai)吸(xi)收(shou)物(wu)質(zhi)的(de)分(fen)析(xi)方(fang)麵(mian)發(fa)揮(hui)越(yue)來(lai)越(yue)重(zhong)要(yao)的(de)作(zuo)用(yong)。
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