答:新(xin)柱(zhu)活(huo)化(hua),實(shi)際(ji)上(shang)是(shi)一(yi)個(ge)平(ping)衡(heng)的(de)過(guo)程(cheng),除(chu)了(le)用(yong)流(liu)動(dong)相(xiang)平(ping)衡(heng)外(wai),有(you)時(shi)候(hou)還(hai)必(bi)須(xu)用(yong)所(suo)測(ce)樣(yang)品(pin)對(dui)新(xin)柱(zhu)進(jin)行(xing)平(ping)衡(heng),特(te)別(bie)是(shi)測(ce)定(ding)分(fen)子(zi)量(liang)比(bi)較(jiao)高(gao)的(de)多(duo)肽(tai),尤(you)其(qi)重(zhong)要(yao)。因(yin)為(wei)分(fen)子(zi)量(liang)高(gao)的(de)物(wu)質(zhi)分(fen)子(zi),擴(kuo)散(san)速(su)度(du)慢(man),平(ping)衡(heng)所(suo)需(xu)時(shi)間(jian)也(ye)相(xiang)應(ying)較(jiao)長(chang)。具(ju)體(ti)平(ping)衡(heng)方(fang)式(shi)也(ye)很(hen)簡(jian)單(dan),多(duo)進(jin)幾(ji)次(ci)樣(yang)品(pin),直(zhi)到(dao)峰(feng)麵(mian)積(ji)和(he)保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)穩(wen)定(ding),再(zai)進(jin)行(xing)正(zheng)式(shi)進(jin)樣(yang)測(ce)定(ding)。
如(ru)果(guo)要(yao)加(jia)快(kuai)平(ping)衡(heng)時(shi)間(jian),把(ba)前(qian)麵(mian)用(yong)來(lai)平(ping)衡(heng)的(de)進(jin)樣(yang)樣(yang)品(pin)濃(nong)度(du)加(jia)大(da),或(huo)者(zhe)不(bu)等(deng)洗(xi)脫(tuo)完(wan)成(cheng),連(lian)續(xu)進(jin)樣(yang)多(duo)針(zhen)。用(yong)待(dai)測(ce)物(wu)對(dui)新(xin)柱(zhu)平(ping)衡(heng),目(mu)的(de)是(shi)將(jiang)矽(gui)膠(jiao)基(ji)質(zhi)填(tian)料(liao)表(biao)麵(mian)具(ju)有(you)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)吸(xi)附(fu)的(de)位(wei)點(dian)的(de)吸(xi)附(fu)能(neng)力(li)飽(bao)和(he)掉(diao)。
測定多肽,一般采用什麼柱子?流動相是乙腈和水,還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽,應該怎麼選擇柱子?
答:分子量不高的多肽一般選用常規C18柱就能測定,也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。
氨基柱在進酸性樣品時,很傷柱子,如使用一段時間後,柱效降低,峰形改變,如何恢複?
答:氨基柱測酸性樣品,應該是用氨基柱的HILIC模mo式shi。酸suan的de存cun在zai可ke能neng會hui使shi略lve帶dai負fu電dian荷he的de氨an基ji官guan能neng團tuan質zhi子zi化hua,導dao致zhi使shi用yong一yi段duan時shi間jian後hou對dui於yu某mou些xie類lei的de分fen析xi物wu保bao留liu性xing質zhi有you所suo改gai變bian或huo表biao現xian在zai柱zhu效xiao下xia降jiang。建jian議yi:用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液衝洗該柱(衝洗後當然要再用不含堿的流動相洗去多餘氨),之後再進行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1%。
色譜柱的技術都有哪些?比如封尾等,這些技術在應用時都體現在哪裏?
答:sepuzhujishubaokuotianliaojishuhezhuangzhujishu,tianliaojishuzibudaiyan,tianliaodehaohuaiduisepuzhufenlixingnenghexuanzexingyoujuedingxingyingxiang。zhuangzhujishuyemeiyouxiangxiangzhongdezhemejiandan,butonggudingxiang、不同粒徑、不同柱管內徑和長度,裝柱工藝都有所不同,要裝出緊密、穩定、均一的柱床,更多是一門藝術,需要經驗積累。
國內和國外想比,我認為色譜柱的差距在於:國guo內nei公gong司si以yi前qian都dou不bu會hui自zi己ji開kai發fa填tian料liao,一yi般ban買mai國guo外wai現xian成cheng填tian料liao裝zhuang柱zhu,買mai到dao的de填tian料liao質zhi量liang控kong製zhi權quan不bu在zai自zi己ji手shou裏li。另ling外wai因yin為wei裝zhuang柱zhu曆li史shi短duan,經jing驗yan積ji累lei少shao,裝zhuang柱zhu工gong藝yi也ye沒mei有you完wan全quan達da到dao國guo外wai水shui平ping。另ling外wai,對dui色se譜pu柱zhu性xing能neng很hen關guan鍵jian的de基ji礎chu材cai料liao-----裸矽膠,國產的還不過關,在純度、粒徑和孔徑的均一性方麵和國外產品相比,差距很大。
色譜柱技術的差距在哪裏?
答:液ye相xiang色se譜pu柱zhu裝zhuang填tian實shi際ji上shang是shi有you一yi定ding技ji巧qiao和he程cheng序xu,可ke能neng還hai有you一yi些xie運yun氣qi。一yi般ban使shi用yong高gao壓ya勻yun漿jiang方fang法fa裝zhuang填tian。也ye就jiu是shi能neng讓rang填tian料liao在zai溶rong劑ji內nei均jun勻yun地di懸xuan浮fu。然ran後hou用yong瞬shun間jian高gao壓ya壓ya實shi,這zhe實shi際ji上shang用yong到dao了le不bu同tong比bi例li的de勻yun漿jiang液ye體ti,和he合he適shi的de壓ya力li。壓ya力li太tai大da,顆ke粒li破po碎sui,壓ya力li太tai小xiao,塔ta板ban數shu少shao。同tong時shi壓ya力li需xu要yao穩wen定ding,不bu然ran分fen布bu不bu均jun,拖tuo尾wei嚴yan重zhong。同tong時shi還hai有you頭tou上shang平ping整zheng程cheng度du。套tao上shang套tao,就jiu可ke以yi用yong了le。
zhuzizaishenmeqingkuangxiakeyiqingxiyixiashaibanne?yuanlaiyetaolunguozhegewenti,woyechaixialaiqingxiguo,danwokandaozhuqianduandewurangengshen,yushijiuyongdaopiangualegua,ranhoubaqingxihaodeshaibananzhuangshangqu。wentijiejuele,danshiyongshouminghuibuhuijianshaone?
答:zhutouwuranle,jiuquchuwurande,zaizhuangyixietianliao。yinweijiarunigualexietianliao,nameweiguandetabanshujiushaole。jiaruniguadebuduo,jinbiaomian,kenengjiushiyixiezangwu,suoyi,wentijiejue。danshijinhouhaihuiyoutongyangwenti,zaigua,namebuxiaoxingua,yingxiangzhuxiao。jianyihaishizhuangyigeyuzhu。
如果柱子取下來放置一段時間,需要做什麼保護嗎?
答:對一般的反相柱,也就是洗幹淨後放到純甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中,然後用堵頭塞緊柱兩頭,以免保存溶劑揮發,應該不需要做特殊的保護。
流動相中加入適量的四氫呋喃可以改善峰形的機理是什麼?
答:《高效液相色譜方法及應用》於世林編著的上麵說:甲醇為質子給予體、乙腈為質子接受體、四氫呋喃是偶極溶劑,應該除了極性影響,還有另外的影響因素,至於分離機理,還是比較複雜的,不能看成是個萬能方法。
關於色譜柱的填裝問題
我個人認為現在色譜柱的填裝一般有3種情況:
(1)國外生產填料並填裝完成成品賣到國內;
(2)國外生產填料,國內填裝銷售;
(3)國內生產填料,國內填裝銷售。
一般情況下,第1種情況賣的最貴,也質量最好!可是如果是填料的生產很複雜的話,那麼填裝上國內也跟不上去嗎?為什麼換在國內填裝就會出現或多或少的一些小問題呢?
答:國(guo)內(nei)填(tian)裝(zhuang)會(hui)出(chu)現(xian)質(zhi)量(liang)小(xiao)問(wen)題(ti),和(he)國(guo)內(nei)目(mu)前(qian)普(pu)遍(bian)做(zuo)事(shi)沒(mei)有(you)國(guo)外(wai)嚴(yan)謹(jin)有(you)關(guan)吧(ba)。如(ru)果(guo)工(gong)藝(yi)技(ji)術(shu)上(shang)沒(mei)有(you)問(wen)題(ti),又(you)能(neng)製(zhi)訂(ding)並(bing)切(qie)實(shi)執(zhi)行(xing)一(yi)整(zheng)套(tao)嚴(yan)格(ge)的(de)生(sheng)產(chan)質(zhi)量(liang)管(guan)理(li)措(cuo)施(shi),國(guo)內(nei)填(tian)裝(zhuang)和(he)國(guo)外(wai)填(tian)裝(zhuang)並(bing)無(wu)區(qu)別(bie)。
國產色譜柱在市場上占有比例如何啊?
國內色譜柱市場還沒有人進行過科學統計,連一年色譜柱銷售總量也眾說紛雲,更別說國內生產色譜柱所占份額了。我估計是占30%左右吧。
預柱或保護柱用還是不用的問題!yuanlaifenxizhongyaopinzhongshi,woyizhidoushiyongbaohuzhu。danlaidaoxingongsihou,faxiandajiadoumeiyoushiyong,jigeshiyanshilianbaohuzhudoumeizhaodaoyige,yejiushishuodajiaconglaidoumeiyouyongguo。houlaiwenyigelaoyuangong,shuoshiyoukenengyingxiangyaopinfenxi。xiangwen:安裝保護柱後會影響樣品分析嗎?我們做的大多是頭孢類的抗生素。
答:應(ying)該(gai)這(zhe)樣(yang)說(shuo),加(jia)上(shang)保(bao)護(hu)柱(zhu),肯(ken)定(ding)有(you)利(li)於(yu)保(bao)護(hu)色(se)譜(pu)柱(zhu)不(bu)受(shou)一(yi)些(xie)顆(ke)粒(li)物(wu)質(zhi)的(de)堵(du)塞(sai),肯(ken)定(ding)有(you)害(hai)於(yu)分(fen)離(li)度(du)和(he)柱(zhu)效(xiao),因(yin)為(wei)保(bao)護(hu)柱(zhu)中(zhong)間(jian)有(you)著(zhe)死(si)體(ti)積(ji)的(de)存(cun)在(zai)。但(dan)是(shi)如(ru)果(guo)保(bao)護(hu)柱(zhu)接(jie)得(de)好(hao),並(bing)且(qie)盡(jin)量(liang)控(kong)製(zhi)其(qi)匹(pi)配(pei)性(xing)和(he)經(jing)常(chang)更(geng)換(huan),分(fen)離(li)度(du)和(he)柱(zhu)效(xiao)應(ying)該(gai)影(ying)響(xiang)並(bing)不(bu)大(da)。頭(tou)孢(bao)類(lei)的(de)抗(kang)生(sheng)素(su)也(ye)要(yao)看(kan)到(dao)底(di)是(shi)原(yuan)料(liao)藥(yao)還(hai)是(shi)製(zhi)劑(ji)嘍(lou),有(you)些(xie)原(yuan)料(liao)藥(yao),可(ke)以(yi)根(gen)據(ju)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)損(sun)耗(hao)選(xuan)擇(ze)添(tian)加(jia)預(yu)柱(zhu)(中間是個篩板),製劑的話,如果有輔料嚴重幹擾或者流動相鹽分比較大,那還是最好配個保護柱。
用的是四元梯度泵A50%甲醇B50%水經常出現停或進氣泡這是什麼原因?
答:水/甲醇比例在55:45時,黏度和柱壓有個極大值。50:50jiejinlezhegejizhi,zhuyashibijiaogaode,danyingxiangzhuyazuidadehaishitianliaolijinghesepuzhuneijing,nizhegeshilizhongbuzhiyongdeshenmeguigedesepuzhu?xitongyaligao,kenenghuiyinrongjibengzhongdeguolvtougongyesudugenbushangerdaozhiqipaojinruxitong,tingjiyeyinggaishiyinweiqipaojinruyalixiajiangdeyuanyin,kekaolvgenghuanyetitonglianggengdadeguolvtou。 想請您具體說明一下反衝色譜柱的方法,是不連檢測器嗎? 答:反衝就是將柱子反向連到係統中。因為有汙染物反衝出來,當然不連檢測器,出液端直接接到廢液瓶就可以。
wangshangduizhuzishifoukeyifanchongyizhiyouzhenglun,nashenmeyangdezhuzikeyifanchong,shenmebukeyi。fanchonghoushizhengzheyong,haishifanzheyong。jutidaogexinghaozhuzibujinshiODS柱,其他如正向柱、氨基柱、離子交換柱等最好都有解釋。
答:一(yi)般(ban)的(de)正(zheng)相(xiang)反(fan)相(xiang)柱(zhu)應(ying)該(gai)都(dou)能(neng)反(fan)衝(chong),隻(zhi)有(you)兩(liang)端(duan)篩(shai)板(ban)孔(kong)徑(jing)不(bu)對(dui)稱(cheng)的(de)柱(zhu)子(zi)不(bu)能(neng)反(fan)衝(chong),不(bu)過(guo)目(mu)前(qian)這(zhe)樣(yang)的(de)柱(zhu)子(zi)已(yi)經(jing)比(bi)較(jiao)少(shao)見(jian)了(le)。反(fan)衝(chong)是(shi)為(wei)了(le)把(ba)柱(zhu)頭(tou)的(de)汙(wu)染(ran)物(wu)衝(chong)洗(xi)掉(diao),反(fan)衝(chong)後(hou)還(hai)是(shi)正(zheng)著(zhe)用(yong)比(bi)較(jiao)好(hao),以(yi)免(mian)柱(zhu)子(zi)的(de)兩(liang)頭(tou)都(dou)被(bei)汙(wu)染(ran)。我(wo)們(men)一(yi)直(zhi)提(ti)倡(chang)的(de)是(shi):正向使用,反向衝洗。
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