一、使用試管的問題

1
、試管的潔淨問題。高gao效xiao液ye相xiang色se譜pu分fen析xi法fa是shi一yi個ge很hen靈ling敏min的de分fen析xi方fang法fa，如ru果guo因yin使shi用yong不bu潔jie淨jing的de試shi管guan，便bian會hui影ying響xiang試shi驗yan結jie果guo的de準zhun確que性xing。例li如ru，在zai用yong甲jia醇chun作zuo溶rong劑ji來lai溶rong解jie樣yang品pin時shi，所suo用yong的de小xiao試shi管guan是shi用yong橡xiang膠jiao塞sai來lai做zuo蓋gai子zi的de，因yin此ci，在zai每mei次ci進jin樣yang時shi，都dou有you一yi個ge保bao留liu時shi間jian固gu定ding的de幹gan擾rao峰feng存cun在zai
，後hou經jing證zheng實shi
，此ci幹gan擾rao峰feng是shi由you甲jia醇chun浸jin泡pao橡xiang膠jiao塞sai而er溶rong下xia的de組zu分fen所suo產chan生sheng，換huan用yong玻bo璃li試shi管guan後hou
，幹gan擾rao峰feng消xiao除chu。

2、塑料試管的溶解問題。近(jin)年(nian)來(lai)，一(yi)次(ci)性(xing)塑(su)料(liao)試(shi)管(guan)給(gei)試(shi)驗(yan)人(ren)員(yuan)帶(dai)來(lai)了(le)極(ji)大(da)的(de)方(fang)便(bian)，但(dan)是(shi)，在(zai)使(shi)用(yong)過(guo)程(cheng)中(zhong)一(yi)定(ding)要(yao)注(zhu)意(yi)有(you)機(ji)溶(rong)劑(ji)對(dui)試(shi)管(guan)的(de)溶(rong)解(jie)現(xian)象(xiang)，在(zai)利(li)用(yong)此(ci)種(zhong)試(shi)管(guan)提(ti)取(qu)樣(yang)品(pin)時(shi)
，有(you)些(xie)有(you)機(ji)溶(rong)劑(ji)(如氯仿等)duiguanbiyourongjiexianxiang

，zhexiebeirongjiexialaidewuzhiyoushiyenengzaijianceqishangchanshengxinhao，congerganraoyangpindeceding。zheshi

，keyongxiangtongdeshiyantiaojianxianxingshiyanyixia，kankanbuhanbeichoutiwushi，tiquyezaijianceqishangnengfouchanshengganraoxinhao，ruqueyouganraoxinhaocunzai，jiuzhinenghuanyongnaiyoujirongjidebolishiguanle。

3、被測樣品在試管壁上的吸附問題。這個問題也應引起注意，否則也會影響測試結果的準確性，在治療藥物監測(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)zhong，youxiebeiceyaowuruemitilin，bingmiqindengyixifuzaibolishiguandeguanbishang
，yinci，caozuozhongyicaiyongjubingxiguan，weifangzhitiquzhongxifuxianxiangdefasheng，kecaiyong0.5%的已二胺已烷液做為提取劑
，可有效地防止吸附。

二
、操作進樣閥的問題

目前，在分析型高效液相色譜儀中常用的進樣閥是7725型xing進jin樣yang閥fa，其qi內nei部bu的de六liu通tong閥fa結jie構gou使shi進jin樣yang操cao作zuo非fei常chang方fang便bian，但dan是shi，如ru果guo使shi用yong不bu當dang
，也ye會hui帶dai來lai問wen題ti。例li如ru
，在zai高gao效xiao液ye相xiang色se譜pu法fa的de試shi驗yan過guo程cheng中zhong
，有you時shi會hui有you異yi常chang色se譜pu峰feng的de出chu現xian以yi及ji重zhong現xian性xing不bu好hao的de問wen題ti，這zhe主zhu要yao是shi由you於yu操cao作zuo方fang法fa不bu當dang所suo引yin起qi，要yao想xiang解jie決jue此ci類lei問wen題ti，需xu從cong以yi下xia幾ji個ge方fang麵mian入ru手shou。

1
、進樣量的控製。用進樣閥來進樣時，閥內的樣品環是定量的，(一般分析型進樣閥的樣品環體積為20ul)
，由於進樣時，注射到進樣閥內的樣品溶液在樣品環的管路中有徑向的速度梯度(即管軸處比管壁處的液流速度快)。因此，要想使樣品環中充滿樣品溶液，從而使用進樣閥來準確地定量
，則必須使進樣量大於樣品環體積的2倍。如果用注射器來控製進樣量
，則最大隻能注射樣品環體積1/2的量
，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢出從而導致定量分析的誤差。

2、進樣閥的清潔問題。如果樣品環中有上次進樣時樣品的殘留，必然會汙染下次注射進的樣品，為防止這種現象的發生，應按下列步驟操作：a.進樣閥有2個位置
，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置時
，以注射器將流動相注入進樣閥內清洗幾次，每次用量大約40ul；b.然後將進樣閥板手扳至INJECT位置時
，再以流動相清洗幾次

，每次用量還是40ul
；c.最後，再將樣品注射到進樣閥裏。

按照上述的步驟操作
，可以避免由進樣閥引起的汙染，從而使幹擾峰消除並提高分析結果的準確性。

3
、進樣閥溢流管的堵塞。有you時shi，進jin樣yang閥fa的de溢yi流liu管guan會hui發fa生sheng堵du塞sai現xian象xiang，向xiang進jin樣yang閥fa內nei注zhu射she樣yang品pin時shi，注zhu射she針zhen推tui不bu動dong。此ci故gu障zhang是shi由you於yu溢yi流liu管guan的de堵du塞sai所suo致zhi。堵du塞sai的de原yuan因yin多duo半ban是shi由you於yu溶rong解jie樣yang品pin的de流liu動dong相xiang用yong的de是shi鹽yan溶rong液ye，而er其qi中zhong的de鹽yan在zai溢yi流liu管guan的de排pai空kong端duan口kou處chu結jie晶jing所suo致zhi。此ci時shi，可ke用yong小xiao燒shao杯bei盛sheng少shao量liang蒸zheng餾liu水shui對dui溢yi流liu管guan口kou稍shao加jia浸jin泡pao，端duan口kou處chu鹽yan的de結jie晶jing就jiu能neng被bei溶rong解jie掉diao
，故gu障zhang排pai除chu。如ru能neng在zai每mei次ci進jin樣yang完wan成cheng之zhi後hou，用yong蒸zheng餾liu水shui反fan複fu衝chong洗xi至zhi溢yi流liu管guan中zhong的de鹽yan分fen全quan部bu衝chong出chu
，則ze可ke避bi免mian此ci故gu障zhang的de發fa生sheng。

三、流動相(MOBLLE PHASE)的問題

甲jia醇chun和he乙yi腈jing在zai高gao效xiao液ye相xiang色se譜pu分fen析xi法fa中zhong常chang常chang被bei用yong來lai配pei製zhi流liu動dong相xiang。高gao效xiao液ye相xiang色se譜pu法fa中zhong常chang用yong的de試shi劑ji最zui好hao是shi高gao等deng級ji的de專zhuan用yong試shi劑ji，如ru色se譜pu純chun試shi劑ji。在zai要yao求qiu不bu太tai嚴yan格ge時shi，優you級ji純chun甚shen至zhi分fen析xi純chun的de試shi劑ji也ye能neng用yong。高gao效xiao液ye相xiang色se譜pu分fen析xi法fa中zhong常chang用yong的de是shi紫zi外wai檢jian測ce器qi，因yin此ci

，從cong降jiang低di基ji線xian噪zao音yin和he提ti高gao分fen析xi靈ling敏min度du上shang來lai考kao慮lv，應ying該gai使shi用yong紫zi外wai吸xi收shou小xiao且qie雜za質zhi含han量liang少shao的de色se譜pu純chun試shi劑ji。

1
、流動相的過濾。配製好的流動相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因為溶液中含有很多肉眼難以發現的微小顆粒，如果不把它們濾除掉
，就會堵塞泵口、zhutoushangdeguolvqi

，zheyangjiudusaileliudongxiangdezhengchangtongdao，shisepuzhudezulizengjia
，zhuyashenggao
，zhuxiaoxiajiang。pengdaozhezhongqingkuangshi，yaohuanyongjingguolvdeliudongxiang，bingjiangdusaidelvqichaixialaijinpaozai20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機清洗20分鍾
，以除去濾片上的堵塞物。

2、流動相的脫氣。liudongxiangzaishiyongqianbixutuoqi
，yijinkenengdechuqurongjiezailiudongxiangzhongdeqiti，fouze，zhexieqitihuishizhutianliaodexingnengjiangdi
，hainenggouduijianceqidexinhaochanshenghendadeganrao。tuoqiyouduozhongfangfa
，ruchaoshengtuoqi、真空脫氣
、氮dan氣qi脫tuo氣qi等deng。真zhen空kong脫tuo氣qi法fa和he氮dan氣qi流liu脫tuo氣qi法fa是shi目mu前qian最zui常chang用yong的de脫tuo氣qi法fa。水shui和he甲jia醇chun混hun合he後hou會hui產chan生sheng大da量liang的de氣qi泡pao

，如ru果guo不bu脫tuo氣qi就jiu使shi用yong，氣qi泡pao就jiu會hui進jin入ru色se譜pu柱zhu和he檢jian測ce器qi，並bing將jiang影ying響xiang分fen析xi工gong作zuo的de正zheng常chang進jin行xing。 

四、色譜柱的使用和保養

色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件，被(bei)測(ce)物(wu)質(zhi)能(neng)否(fou)被(bei)很(hen)好(hao)的(de)分(fen)離(li)和(he)測(ce)定(ding)
，色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)性(xing)能(neng)起(qi)著(zhe)決(jue)定(ding)性(xing)的(de)作(zuo)用(yong)。因(yin)此(ci)，在(zai)日(ri)常(chang)工(gong)作(zuo)中(zhong)
，應(ying)特(te)別(bie)注(zhu)意(yi)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)正(zheng)確(que)使(shi)用(yong)和(he)維(wei)修(xiu)保(bao)養(yang)，以(yi)延(yan)長(chang)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)使(shi)用(yong)壽(shou)命(ming)。

1、使用預柱和保護柱。預柱(pre-column)安裝於泵和進樣器之間，它給色譜柱中的流動相提供了完全的平衡
，並防止了對柱填料有破壞作用的組分或汙染物進入色譜柱。保護柱(guard column)keyizudangnenggoulaogudixifuyusepuzhushangdezufenjinrusepuzhu
，baohuzhuyingyusepuzhudetianliaoxiangtong。yuzhuhebaohuzhukeyijingchanggenghuan，erbuxuyaojingchanggenghuansepuzhu
，zhejiuyanchanglesepuzhudeshiyongshouming。

2
、防止氣體進入色譜柱。有些色譜柱(如凝膠柱)是(shi)不(bu)允(yun)許(xu)氣(qi)泡(pao)進(jin)入(ru)的(de)，否(fou)則(ze)將(jiang)會(hui)使(shi)柱(zhu)效(xiao)降(jiang)低(di)甚(shen)至(zhi)形(xing)成(cheng)微(wei)小(xiao)的(de)難(nan)以(yi)驅(qu)除(chu)的(de)氣(qi)室(shi)。因(yin)此(ci)，為(wei)了(le)防(fang)止(zhi)氣(qi)泡(pao)進(jin)入(ru)色(se)譜(pu)柱(zhu)，一(yi)定(ding)要(yao)使(shi)用(yong)經(jing)過(guo)脫(tuo)氣(qi)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)，並(bing)且(qie)要(yao)嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)下(xia)列(lie)步(bu)驟(zhou)來(lai)安(an)裝(zhuang)色(se)譜(pu)柱(zhu)。a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲，觀察是否有溶劑滲出；b.如有溶劑滲出，即可將色譜柱接到管路上
，以避免氣泡的進入；c.ruwurongjishenchushi
，biaomingsepuzhudeciduanyijingjinqukongqile
，cishi

，kejiangsepuzhudechukouduanjiedaojinyangfashang，yiliudongxianglaifanfangxiangchongxisepuzhu

，yibianjiangzhuneidekongqipaichu。zuihaoyi0.2ml/min的小流量來衝色譜柱
，如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會導致柱性能的降低
；d.如果流出的溶劑裏不含有氣泡，說明柱內的氣體已經被排出了，再將色譜柱以正確的方向接好，這樣氣泡就進不到色譜柱裏麵了。

3、色譜柱的清洗。為wei了le不bu使shi被bei測ce物wu質zhi和he雜za質zhi停ting留liu在zai色se譜pu柱zhu中zhong，在zai每mei次ci的de樣yang品pin分fen析xi工gong作zuo完wan成cheng之zhi後hou，都dou應ying及ji時shi地di清qing洗xi色se譜pu柱zhu。首shou先xian要yao用yong對dui被bei測ce樣yang品pin洗xi脫tuo能neng力li強qiang的de溶rong劑ji來lai洗xi脫tuo色se譜pu柱zhu，以yi分fen析xi工gong作zuo中zhong常chang用yong的de反fan相xiang色se譜pu分fen析xi法fa為wei例li

，因yin其qi先xian流liu出chu的de物wu質zhi是shi極ji性xing大da的de物wu質zhi，此ci時shi應ying用yong100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內的極性小的物質洗脫下來
，洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動相是緩衝溶液
，則應先用蒸餾水來衝洗色譜柱，以衝掉柱內的鹽，然後再用合適的溶劑來衝洗。

凝膠濾過色譜法(Gel Filtration Chromatography)zhongsuoshiyongdeningjiaozhuchangyonghuanchongrongyezuoliudongxiang，yongwanzhihoudangranyaoyongzhengliushuilaichongxi。ruguoshilianxucaozuo，keyijianghuanchongrongyezhiyuzhuneiguoye，danzuihaoshiweichixiaoliusu(＜0.5ml/min)以防止緩衝鹽的析出，如果流動相中含有鹵化物，即使是停一夜，也必須要用蒸餾水將色譜柱衝洗幹淨

，以防止它們對柱體的腐蝕。

4、色譜柱的存放。如果色譜柱暫時不用
，存放時要注意以下幾點：

a.幾天之內的短期放置
，應先用溶劑衝洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來衝洗)，再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。

b.ruguosepuzhuchangqibuyong，jinyongshangshufangfalaichulijiubuxingle，zheshiyingshiyongsepuzhushiyongshuomingshuzhongsuozhimingderongjilaichongmansepuzhu，fanxiangzhuyibanshiyongjiachun，zhengxiangzhuzekeyongzhengyiwanhuogengwan，erningjiaozhuzebunengyongshuile，yinzhuneiruguoyouweishengwudeshengchangzehuishizhuxiaojiangdi，cishiyingyong0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)laichongxisepuzhu
，zaijiangsepuzhufengyan。sepuzhuchangqifangzhishi
，yidingyaojiangsepuzhudeliangduanfengyan
，yifangzhiyouyurongjihuifaerzaochengdezhutianliaogansuoxianxiang
，yinzhekedaozhizhuxiaodeyanzhongjiangdi。

c.色譜柱應貯存在室溫下
，如果放置於0℃以下的環境裏，柱內就會結冰，這也將導致柱效的降低。

五、色譜峰的雙峰問題

長期使用後的色譜柱

，如果有雜質進入，就會使色譜柱入口處的固定相“板結”並(bing)在(zai)流(liu)動(dong)相(xiang)所(suo)產(chan)生(sheng)的(de)高(gao)壓(ya)作(zuo)用(yong)下(xia)
，形(xing)成(cheng)柱(zhu)頭(tou)的(de)塌(ta)陷(xian)，被(bei)分(fen)析(xi)的(de)樣(yang)品(pin)組(zu)分(fen)的(de)正(zheng)常(chang)色(se)譜(pu)峰(feng)就(jiu)變(bian)成(cheng)了(le)雙(shuang)峰(feng)，這(zhe)時(shi)可(ke)按(an)下(xia)述(shu)方(fang)法(fa)來(lai)修(xiu)複(fu)色(se)譜(pu)柱(zhu)。首(shou)先(xian)將(jiang)柱(zhu)頭(tou)的(de)緊(jin)固(gu)螺(luo)母(mu)旋(xuan)下(xia)，這(zhe)時(shi)就(jiu)會(hui)發(fa)現(xian)柱(zhu)頭(tou)內(nei)的(de)固(gu)定(ding)相(xiang)已(yi)被(bei)壓(ya)縮(suo)進(jin)去(qu)了(le)，嚴(yan)重(zhong)時(shi)可(ke)縮(suo)進(jin)10mm以上。在這種情況下，我們可用針尖將流動相表層板結變黃的部分摳掉，並以相同的固定相將此塌陷區填平
、壓實，再將色譜柱的緊固螺絲上緊，修複工作即告結束。用經過修複後的色譜柱再做樣品時

，色譜峰就恢複正常了。

yishangcongjigefangmianjianjielesepuyidezhengqueshiyongjiguzhangpaichufangfa。zairichanggongzuozhong
，ruguonengduizhexieshixiangrenzhenduidai，zuodaoyouwentijishijiejue
，zehuidadayanchangyiqidezhengchangshiyongqixian，bingshiyiqidexingnengdedaozuidaxiandudefahui。