一. 原理
離子交換色譜的固定相是交換劑,根據交換劑性質可分為:
陽離子交換劑和陰離子交換劑。
交jiao換huan劑ji由you固gu定ding的de離li子zi基ji團tuan和he可ke交jiao換huan的de平ping衡heng離li子zi組zu成cheng。當dang流liu動dong相xiang帶dai著zhe組zu分fen離li子zi通tong過guo離li子zi交jiao換huan柱zhu時shi,組zu分fen離li子zi與yu交jiao換huan劑ji上shang可ke交jiao換huan的de平ping衡heng離li子zi進jin行xing可ke逆ni交jiao換huan,最zui後hou達da到dao交jiao換huan平ping衡heng,陰yin陽yang離li子zi的de交jiao換huan平ping衡heng可ke表biao示shi為wei:
陽離子交換: R+Y- + X- = R+X-+ Y-
陰離子交換: R-Y+ + X+ = R-X++ Y+
R+ 、R-—為交換劑上的固定離子基團,如RSO3-或RNH3+;
Y+、Y-—為可交換的平衡離子,可以是H+、Na+或OH-、Cl-等
X+ 、X-—為組分離子。
組分離子對固定離子基團的親和力強,分配係數大,其保留時間長;反之,分配係數小,其保留時間短;因此:
離子交換色譜:是根據不同組分離子對固定離子基團的親和力的差別而達到分離的目的。
二. 固定相
離子交換色譜固定相:早(zao)期(qi)離(li)子(zi)交(jiao)換(huan)色(se)譜(pu)法(fa)采(cai)用(yong)離(li)子(zi)交(jiao)換(huan)樹(shu)脂(zhi)作(zuo)為(wei)固(gu)定(ding)相(xiang),有(you)溶(rong)脹(zhang)和(he)收(shou)縮(suo)現(xian)象(xiang),不(bu)耐(nai)高(gao)壓(ya),而(er)且(qie)表(biao)麵(mian)微(wei)孔(kong)結(jie)構(gou)影(ying)響(xiang)傳(chuan)質(zhi),柱(zhu)效(xiao)低(di),現(xian)已(yi)被(bei)離(li)子(zi)交(jiao)換(huan)鍵(jian)合(he)相(xiang)所(suo)取(qu)代(dai)。
離子交換鍵合相:是以薄殼型或全多孔微粒矽膠為載體,表麵經化學反應鍵合上各種離子交換基團。若帶上磺酸基(-SO3H 強酸性)、羧基(一COOH 弱酸性)就是陽離交換樹脂;若帶上季胺基(-NR3Cl強堿性)或胺基(-NH2弱堿性)就是陰離子交換劑。
(分離分析:核苷酸、碳水化合物、有機酸、蛋白質、酶等)
三. 流動相
離子交換色譜流動相:通常是鹽類的緩衝溶液。通過改變流動相的 pH、緩衝劑(平衡離子)的類型、離子強度以及加入有機溶劑、配位劑等都會改變交換劑的選擇性,影響樣品的分離效果。
常用的緩衝劑有:磷酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、氨水等。
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