【原理】
病bing原yuan性xing葡pu萄tao球qiu菌jun能neng產chan生sheng血xue漿jiang凝ning固gu酶mei
，使shi血xue漿jiang中zhong纖xian維wei蛋dan白bai原yuan變bian為wei不bu溶rong性xing纖xian維wei蛋dan白bai，附fu於yu細xi菌jun表biao麵mian，生sheng成cheng凝ning塊kuai，因yin而er具ju有you抗kang吞tun噬shi的de作zuo用yong。凝ning固gu酶mei試shi驗yan對dui於yu判pan定ding該gai菌jun株zhu是shi否fou具ju有you致zhi病bing力li，很hen有you幫bang助zhu。葡pu萄tao球qiu菌jun凝ning固gu酶mei試shi驗yan被bei廣guang泛fan地di用yong於yu常chang規gui鑒jian定ding金jin黃huang色se葡pu萄tao球qiu菌jun與yu其qi他ta葡pu萄tao球qiu菌jun。

葡萄球菌所產生的凝固酶有兩種：結合凝固酶和遊離凝固酶。

結合凝固酶（即凝聚因子）：是shi一yi種zhong結jie合he於yu菌jun體ti細xi胞bao壁bi的de酶mei
，它ta直zhi接jie作zuo用yong於yu血xue漿jiang中zhong纖xian維wei蛋dan白bai原yuan，使shi之zhi變bian成cheng纖xian維wei蛋dan白bai，而er使shi葡pu萄tao球qiu菌jun凝ning集ji成cheng塊kuai

，玻bo片pian法fa陽yang性xing結jie果guo是shi由you此ci酶mei（凝聚因子）所致。

遊離凝固酶：是凝血酶原樣物質，不直接作用於血漿纖維蛋白原上，而被血漿中的致活劑（即凝固酶致活因子）jihuohou，bianchengnairedeningxuemeiyangwuzhi
，ciwuzhikeshixuejiangzhongdeyetaixianweidanbaiyuanbianweigutaixianweidanbai，congershixuejiangninggu。shiguanfadeyangxingjieguoweicimeisuozhi。

【方法】
（1）玻片法：在1張潔淨玻片中央加1滴9g／L氯化鈉(生理鹽水)溶液，用接種環取待檢培養物與其混合（設陽性和陰性對照） 製成菌懸液，若經10～20s 內無自凝現象發生
，則加入兔新鮮血漿1環
，與菌懸液混合，觀察結果。
（2）試管法：用生理鹽水將新鮮兔血漿4倍稀釋，取0．5 ml於試管再加0.5ml待測菌濃菌懸液（需做陽性對照及陰性對照。），混勻後置37℃水浴中
，每30min觀察1次結果。若3小時內試驗管和陽性對照管出現凝固
，陰性對照管（即濃菌液管）不凝固，為陽性；若陰性，繼續觀察到24小時
，不凝固者為陰性。

【結果判斷】
（1）玻片法：5～10s內出現凝集者為陽性。
（2）試管法：如有凝塊或整管凝集出現為陽性。4h後無上述現象出現，則放置過夜後再觀察。

【應用】
本試驗僅用於致病性葡萄球菌的鑒定。

【注意事項】
（1）玻片法：10 秒內觀察結果
，如超過10 秒可出現假陽性，因此必須用試管法驗證凝聚因子試驗。

（2）可選擇的玻片凝集試驗法還包括檢測凝集因子和蛋白A的膠乳凝集試驗。但膠乳凝集試驗和玻片凝固酶試驗的結果並不完全一致。盡管膠乳凝集試驗鑒定路鄧葡萄球菌(Staphylococcus  lugdunensis）的de可ke靠kao性xing較jiao差cha，但dan鑒jian定ding金jin黃huang色se葡pu萄tao球qiu菌jun的de特te異yi性xing和he靈ling敏min性xing均jun高gao於yu傳chuan統tong的de玻bo片pian凝ning固gu酶mei試shi驗yan。有you些xie腐fu生sheng葡pu萄tao球qiu菌jun和he鬆song鼠shu葡pu萄tao球qiu菌jun及ji某mou些xie微wei球qiu菌jun屬shu的de菌jun種zhong可ke能neng膠jiao乳ru凝ning集ji試shi驗yan陽yang性xing
，但dan玻bo片pian凝ning固gu酶mei試shi驗yan通tong常chang陰yin性xing。

（3）試管法：須製備濃厚的均勻菌懸液，以便觀察結果。
a.shiguanfaputaoqiujunninggumeishiyanyangxingzhe


，yingjiandaomingxiandexianweidanbainingjiaokuai
，chuxianyangmaozhuanghuoxianweizhuangchendianwubingfeizhenzhengninggu，yingpanweiyinxing。zhongjianxingputaoqiujun、豬葡萄球菌需要較長時間（4H以上）孵育，才可出現陽性。
b.如果培養時間超過4H，應考慮以下幾點：
Ⅰ.延長培養時間後，有些菌株產生的葡萄球菌激酶（溶纖維蛋白酶），可以裂解凝塊
，產生假陰性結果
；
Ⅱ.如果使用的血漿不是無菌的（或部分不是無菌的），假陽性和假陰性結果均有可能發生；
Ⅲ.所用待測菌不純，延長培養時間後
，汙染菌可能導致假陽性結果。在這點上
，含EDTA的血漿優於檸檬酸鹽血漿
，因為利用檸檬酸鹽的細菌（如一些鏈球菌）可能通過消耗檸檬酸鹽促進凝集發生。
Ⅳ.所用血漿缺乏纖維蛋白原（脫纖維血漿）。

（4）最好用EDTA 抗凝的兔血漿
，不主張用人的抗凝血
，除非經過試驗證實其中不含感染因子、沒有凝血能力和沒有抑製因子。不同種動物血漿因子不同
，凝固狀態也不同
，兔血漿凝塊結實，凝固速度快
，優於人血漿。

（5）試驗不可在高鹽培養基上的取菌落

，因為可能出現自凝或假陽性。

（6）若被檢菌為陳舊的肉湯培養物（超過18～24H），或生長不良
，凝固酶活性低的菌株可能檢測不出來。

(7)為防止玻片法檢測的假陽性反應，必須嚴格按《全國臨床檢驗操作規程》進jin行xing操cao作zuo。當dang懷huai疑yi待dai測ce菌jun是shi金jin黃huang色se葡pu萄tao球qiu菌jun時shi，對dui玻bo片pian凝ning固gu酶mei陰yin性xing的de結jie果guo應ying做zuo試shi管guan法fa凝ning固gu酶mei試shi驗yan確que證zheng。玻bo片pian法fa和he試shi管guan法fa凝ning固gu酶mei試shi驗yan的de血xue漿jiang標biao準zhun是shi:必須含有足夠濃度的凝固酶反應因子和纖維蛋白原，必須無溶纖維蛋白活性和無抑製劑。

附：
1.玻片法檢測血漿凝固酶陽性的菌有：金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、裏昂葡萄球菌（即：路鄧葡萄球菌Staphylococcus  lugdunensis）、施氏葡萄球菌凝聚亞種（Staphylococcus schleiferi ssp. coagulans）及部份中間型葡萄球菌（staphylococcus intermedius）。

2.試管法檢測血漿凝固酶陽性的菌有：金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、施氏葡萄球菌凝聚亞種（Staphylococcus schleiferi ssp. coagulans）、中間型葡萄球菌（staphylococcus intermedius）、海豚葡萄球菌(Staphylococus delphini)及部份豬葡萄球菌（staphylococcus hyicus)。

3.我做的試管法試驗圖：
左：測定管(陰性)， 右：標準金葡菌株(陽性)

4.關於路鄧葡萄球菌Staphylococcus  lugdunensis）：菌落直徑常為4～7MM，平滑

，有光澤
，可能無色素沉著或呈現奶油色至橘黃色。邊緣完整，相當扁平

，中心呈輕微圓錐狀凸起。玻片凝固酶試驗（+）。可分解海藻糖、甘露糖、麥芽糖、蔗糖且產酸，不分解甘露醇且不產酸。PYR（pyrrolidonase：吡咯烷酮基芳胺酶）(+)

、ODC（+）（培養8H觀察，此時表皮葡萄球菌為陰性。）。

5.關於施氏葡萄球菌（Staphylococcus schleiferi ssp.）：菌落直徑常為3～5MM且無色素沉著，光滑有光澤，輕微凸起，邊緣完整。玻片凝固酶試驗（+）。PYR（pyrrolidonase：吡咯烷酮基芳胺酶）(+)。可分解甘露糖，有時也分解海藻糖而產酸，但不分解甘露醇
、麥芽糖或蔗糖。