腸杆菌科作為食品衛生指標菌在歐洲已有多年曆史，對其檢驗方法不少學者曾進行了研究。目前北歐食品分析委員會（NMKL）及ISO已製定了食品中腸杆菌科檢驗的標準方法。包括了直接增菌和前增菌的定性方法；菌落計數和帶恢複的MPN定(ding)量(liang)方(fang)法(fa)。近(jin)年(nian)來(lai)，隨(sui)著(zhe)對(dui)外(wai)貿(mao)易(yi)的(de)發(fa)展(zhan)，歐(ou)洲(zhou)一(yi)些(xie)國(guo)家(jia)已(yi)對(dui)我(wo)國(guo)出(chu)口(kou)的(de)某(mou)些(xie)食(shi)品(pin)和(he)動(dong)物(wu)飼(si)料(liao)提(ti)出(chu)了(le)檢(jian)測(ce)和(he)限(xian)量(liang)要(yao)求(qiu)。且(qie)將(jiang)其(qi)作(zuo)為(wei)國(guo)際(ji)間(jian)食(shi)品(pin)微(wei)生(sheng)物(wu)學(xue)實(shi)驗(yan)室(shi)質(zhi)量(liang)控(kong)製(zhi)
、水平測試的必測項目之一。我國大多數食品衛生檢驗人員對該項指標和檢驗方法缺乏了解
，為適應外貿發展需要
，原天津、遼寧商檢局的技術人員，采用標準菌株和自然食品樣品參照國外現有標準方法進行了研究，製定了《出口食品中腸杆菌科檢驗方法》行業標準。該行業標準有如下特點：

　　1、製zhi定ding了le兩liang種zhong定ding量liang檢jian驗yan方fang法fa
，可ke根gen據ju對dui各ge種zhong食shi品pin規gui定ding的de不bu同tong限xian量liang標biao準zhun或huo加jia工gong方fang式shi進jin行xing選xuan擇ze。菌jun落luo計ji數shu法fa適shi用yong於yu檢jian查zha未wei經jing加jia工gong處chu理li的de生sheng鮮xian食shi品pin或huo腸chang杆gan菌jun科ke計ji數shu限xian量liang>100/g的加工食品，帶恢複的MPN法適用於腸杆菌科計數≤100/g的加工食品。

　　2、采用了亞致死性損傷菌恢複步驟並成功地應用於MPN定量法中，對冷凍產品，加熱冷凍產品采用36±1℃4h恢複，對加熱幹燥等處理過的食品需用36±1℃18－24h恢複。

　　3

、將國外現有標準方法中EE肉湯作了改良

，即將原配方中的膽汁含量由20g/L降至10g/L。大大降低了對腸杆菌科細菌的抑製力
，提高了方法的靈敏度和檢出率。

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、對在分離培養基VRBGA上經36±1℃培養24h後，菌落直徑仍<0.5mm的腸杆菌科。如奇異變形杆菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌等延長培養時間至48h
，彌補了國外現有方法中僅在VRBGA 36±1℃培養24h後，挑選菌落直徑>0.5mm的腸杆菌科菌落可造成漏檢之不足。

　　5、NMKL法僅以氧化酶陰性、ISO方法以氧化酶陰性和葡萄糖瓊脂呈黃色為陽性對腸杆菌科進行確認。前法可將不發酵葡萄糖
，但可利用蛋白腖生長、氧化酶也為陰性的沃夫氏不動杆菌誤判為腸杆菌科，造成假陽性結果，使計數結果偏高
；後(hou)法(fa)則(ze)易(yi)將(jiang)葡(pu)萄(tao)糖(tang)瓊(qiong)脂(zhi)表(biao)麵(mian)變(bian)為(wei)藍(lan)色(se)的(de)陰(yin)溝(gou)腸(chang)杆(gan)菌(jun)
，產(chan)氣(qi)腸(chang)杆(gan)菌(jun)和(he)沙(sha)雷(lei)氏(shi)菌(jun)漏(lou)檢(jian)
，出(chu)現(xian)假(jia)陰(yin)性(xing)，使(shi)計(ji)數(shu)結(jie)果(guo)偏(pian)低(di)。本(ben)行(xing)業(ye)標(biao)準(zhun)采(cai)用(yong)了(le)氧(yang)化(hua)酶(mei)陰(yin)性(xing)
，葡(pu)萄(tao)糖(tang)瓊(qiong)脂(zhi)發(fa)酵(jiao)為(wei)全(quan)黃(huang)或(huo)黃(huang)色(se)底(di)層(ceng)

、藍色斜麵，產氣或不產氣作為判定標準才可對腸杆菌科進行準確的確認。

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、方法的靈敏度 

1. 菌落計數法的靈敏度為≥10/g  
2. 帶恢複的MPN法的靈敏度為≤10/g或<100/g

    四、食品中腸杆菌科的汙染情況

   　　Mossel氏等曾對103份幹蛋粉、22份椰子粉和44份動物飼料共計169份樣品進行了腸杆菌科汙染情況的調查，其檢出率分別為80%、95%和84%。PitarGaya氏等對采集於13個農場的39份鮮羊奶和采集於乳品店的120份當日羊奶的檢樣進行了腸杆菌科及其它相關菌的調研，發現鮮羊奶中的腸杆菌科/mL的幾何平均計數為4.4×10²
   ，當日羊奶為6.2×10³。

   　　原天津商檢局曾對四種食品100份樣品進行了調查，結果為：從四種食品中共檢出了腸杆菌科細菌陽性樣品63份，陽性檢出率為63％，但依食品種類而異，以凍魚片檢出率最高
   ，為83.3%。脫脂淡奶粉檢出率最低，為30.0％。在63份陽性樣品中，腸杆菌科計數>10³/g的試樣14份。占22.2％；計數<10⁸/g的試樣49份，占77.8％。其中，凍魚片為16份，占該食品陽性樣品的64.0％；速凍方便食品為15份
   ，占該食品陽性樣品的83.3％；脫水白蘿卜絲為15份
   ，占該食品陽性樣品的88.2％；脫脂淡奶粉的３份陽性樣品的腸杆菌科計數均＜10⁸/g。

   　　從四種食品中共分離出腸杆菌科中九個菌屬的十五種細菌
   ，占腸杆菌科常見的十四個菌屬的64.3％，另分離出其它菌群中的團聚腸杆菌。除脫脂淡奶粉外
   
   ，從其它三種食品中均分離出了陰溝腸杆菌；在速凍方便食品中，克雷伯氏菌為優勢菌，占鑒定出種別的腸杆菌科細菌的50％
   ；在脫水白蘿卜絲和脫脂淡奶粉中均檢出了團聚腸杆菌；而er在zai凍dong魚yu片pian中zhong，檢jian出chu的de腸chang杆gan菌jun科ke屬shu別bie較jiao多duo
   ，表biao明ming其qi汙wu染ran源yuan較jiao為wei複fu雜za。特te別bie值zhi得de注zhu意yi的de是shi在zai凍dong魚yu片pian中zhong還hai檢jian出chu了le嗜shi冷leng性xing分fen解jie脂zhi肪fang和he蛋dan白bai質zhi的de蜂feng房fang哈ha夫fu尼ni亞ya菌jun和he沙sha雷lei氏shi菌jun；在zai凍dong菜cai卷juan中zhong還hai檢jian出chu了le誌zhi賀he氏shi菌jun。目mu前qian，在zai我wo國guo仍reng廣guang泛fan采cai用yong大da腸chang菌jun群qun作zuo為wei指zhi標biao菌jun，很hen少shao以yi腸chang杆gan菌jun科ke作zuo為wei食shi品pin衛wei生sheng指zhi標biao菌jun
   ，但dan對dui歐ou洲zhou出chu口kou食shi品pin時shi有you腸chang杆gan菌jun科ke檢jian測ce計ji數shu要yao求qiu。

   五、食品中腸杆菌科檢驗方法（見SN/T0738－1997）