一、定義:
大腸埃希氏菌更習慣稱為大腸杆菌,分類於腸杆菌科,歸屬於埃希氏菌屬,並且大腸杆菌株ATCC 11775是該屬的模式菌種。大腸杆菌的不同菌株間DNA相關性為80%,而與同科的誌賀氏菌屬(除鮑氏誌賀氏菌外)的DNA相關性可達80-87%。與人類疾病有關的大腸杆菌,統稱為致瀉性大腸杆菌(此名稱不易與致病性大腸杆菌相混淆),一般包括五種:即腸毒素性大腸杆菌(ETEC)、致病性大腸杆菌(EPEC)、出血性大腸杆菌(EHEC)、侵襲性大腸杆菌(EIEC)和粘附性大腸杆菌(EAEC)。文獻報道還有幾種,象:凝集性大腸杆菌、即產VT毒素又具有侵襲性的大腸杆菌等,但目前尚未達成統一共識。
二、生物學特性:
基本形態特征:
此菌為兩端鈍圓的短小杆菌,一般大小約0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生長條件不同,個別菌體可呈近似球狀或長絲狀。此菌多單獨存在或成雙,但不呈長鏈狀排列。約有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能運動,但多數菌體隻有1-4根,一般不超過10根,故菌體動力弱;多數菌株生長有比鞭毛細、短、直且數量多的菌毛,有的菌株具有莢膜或微莢膜;不形成芽胞,對普通堿性染料著色良好,革蘭氏染色陰性。
培養特征:
由於此菌合成代謝能力強,在含無機鹽、胺鹽、葡萄糖的普通培養基上生長良好。最適生長溫度為37℃,在42-44℃條件下仍能生長,生長溫度範圍為15-46℃。在普通營養瓊脂上生長表現3種菌落形態:(1)光滑型: 菌落邊緣整齊,表麵有光澤、濕潤、光滑、呈灰色,在生理鹽水中容易分散。(2)粗糙型:菌落扁平、幹澀、邊緣不整齊,易在生理鹽水中自凝。(3)粘液型:常為含有莢膜的菌株。此菌兼性厭氧,在有氧條件下生長良好,最適生長pH為6.8-8.0,所用培養基pH為7.0-7.5,若pH值低於6.0或高於8.0則生長緩慢。
生化反應與血清學反應
大腸杆菌屬於衛生學意義的大腸菌群和糞大腸菌群的範疇,因此,必須符合大腸菌群和糞大腸菌群的有關定義,在檢測大腸菌群、糞大腸菌群的基礎上,可以應用I(吲哚)、M(甲基紅)、Vi(3羥基-2-丁酮)、C(檸檬酸)即IMViC生化試驗對大腸杆菌作進一步鑒定,其IMViC結果為++--或-+--。生化反應是鑒定大腸杆菌的主要方法之一,然而,大腸杆菌之間生化反應的差異非常常見,象:許多菌種非/遲發酵乳糖,但並不說明它們遺傳上有明顯不同,生化反應非典型的大腸杆菌菌株與典型菌株的DNA相關性在85%-100%。附表1為大腸杆菌生化反應特性表。其中H2S、脲酶、阿糖酸、吲哚、ONPG試驗常為首選生化反應,其餘為進一步的生化試驗。大腸杆菌在賴氨酸脫羧酶、粘質酸鹽、醋酸鹽生化試驗中,有一項或多項試驗陽性,且厭氧性生長弱,有動力和吲哚試驗陽性可與誌賀氏菌相鑒別。
大腸杆菌的血清學反應,往往是對經分離、鑒定、確證為大腸杆菌的 進一步分型,常不作為常規方法使用。附表2suoliezhuyaozhixiexingdachangganjundexueqingxing。duidachangganjundefenxingjiandinggongzuo,jicengjianyandanweiruoyouyaoqiushi,keyugedisuoshuchurujingjianyanjianyijushiyanshilianxi,weituojinxingxueqingxuejiandinggongzuo。
三、大腸杆菌的抵抗力:
此菌對理化因素的抵抗力,在無芽胞菌中是最強的一種,在室溫可存活數周,在土壤、水中存活數月,耐寒力強,但是在30分鍾內快速冷凍,將37℃降至4℃的過程,可殺死此菌。加熱60℃,30分鍾,此菌可滅活。對漂白粉,酚、甲醛等較敏感,水中1ppb氯可殺死此菌。此菌耐膽鹽,在一定程度上能抵抗煌綠等染料的抑菌作用,在選擇性培養基配製上,常利用此菌這一性質。
四、衛生學意義與流行學
youyudachangganjunshirenjigezhongdongwuchangdaozhongdezhengchangjijujun,changsuifenbiancongrenjidongwutipaichu,guangfansanboyuziranjie,suoyiyidanjianchudachangganjun,jiyiweizhezhijiehuojianjiedibeifenbianwuran,erzaiweishengxueshangbeiyongyuyinshui,niunaihuoshipindengdefenyuanxingwuranweishengxijunxuezhibiao;並且由於大腸杆菌在外界存活時間與一些主要腸道病原菌相近,它的出現也可能預示著某些腸道病原菌(例:沙門氏菌、誌賀氏菌)的存在,因此該細菌是國際上公認的衛生監測指示菌。近來,有些國家在執行HACCP管理中,將大腸杆菌檢測作為微生物汙染狀況的監測指標和HACCP實施效果的評估指標。
致瀉性大腸杆菌是引起人體以腹瀉症狀為主的全球性疾病,其中尤以EPEC、ETEC所占比例為大。附表3是(shi)我(wo)國(guo)部(bu)分(fen)省(sheng)市(shi)主(zhu)要(yao)腹(fu)瀉(xie)病(bing)原(yuan)體(ti)檢(jian)出(chu)率(lv)情(qing)況(kuang),盡(jin)管(guan)目(mu)前(qian)報(bao)道(dao)各(ge)地(di)主(zhu)要(yao)腹(fu)瀉(xie)病(bing)是(shi)由(you)誌(zhi)賀(he)氏(shi)菌(jun)或(huo)輪(lun)狀(zhuang)病(bing)毒(du)引(yin)起(qi)的(de),但(dan)是(shi),多(duo)年(nian)來(lai),致(zhi)瀉(xie)性(xing)大(da)腸(chang)杆(gan)菌(jun)引(yin)起(qi)的(de)腹(fu)瀉(xie)病(bing)例(li)始(shi)終(zhong)位(wei)於(yu)第(di)二(er)位(wei),可(ke)見(jian)大(da)腸(chang)杆(gan)菌(jun)腸(chang)道(dao)傳(chuan)染(ran)的(de)廣(guang)泛(fan)性(xing)。還(hai)有(you),致(zhi)瀉(xie)性(xing)大(da)腸(chang)杆(gan)菌(jun)亦(yi)可(ke)常(chang)年(nian)引(yin)發(fa)人(ren)體(ti)腹(fu)瀉(xie),以(yi)夏(xia)秋(qiu)季(ji)為(wei)高(gao)峰(feng),在(zai)患(huan)者(zhe)感(gan)染(ran)住(zhu)院(yuan)率(lv)中(zhong),嬰(ying)幼(you)兒(er)占(zhan)60%以上。近來,EHEC O157:H7為世界衛生組織(WHO)定為新的食源性致病菌,其引發的出血性腸炎的暴發或散發病例,自1983年以來在北美州(美國、加拿大)地區逐年增多,英國、日本亦有爆發和散發病例報道,我國也發現散發病例,尚未有爆發EHEC的報道。附表4為近幾年EHEC的汙染狀況。
五、大腸杆菌檢驗程序圖解:
檢 樣
↓
LST肉湯
↓37℃,48h
↓37℃,48h |
EC肉湯 BGLB肉湯管陽性 (證實大腸菌群)
EC肉湯產氣管為陽性(糞大腸菌群)
查MPN表,報告糞大腸菌群MPN/g
陽性管再培養24h
EMB平板分離
↓ 37℃,24h
LST肉湯 IMViC生化試驗 革蘭氏染色
產酸產氣 ++--/-+-- 無芽胞G-杆菌
-----------------------
大腸杆菌
按EC肉湯產氣管數,查MPN表,報告大腸杆菌MPN/g
說明:
1、由於大部分致瀉性大腸杆菌在6℃條件中可失去活力,故大腸杆菌的定性檢測比定量檢測更適宜。如果確有大腸杆菌定量檢測要求的話,可用MPN法或終點稀釋法進行。
2、基層單位如有大腸杆菌生化鑒定要求或大腸杆菌血清學分型要求,可委托屬地出入境檢驗檢疫局進行檢驗。
3、檢測大腸杆菌的MUG法和膜過濾法,可參閱有關標準說明進行。
4、國標法與FDA方法,在所用培養基、檢驗程序上略有差異,但不影響大腸杆菌檢驗結果的準確性。本章介紹的方法,可詳見SN 0169-92標準。
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