微生物培養操作及注意事項
發布日期：2022-06-13
核心提示：微生物的生長，除了受本身的遺傳特性決定外，還受到許多外界因素的影響，如營養物濃度、溫度、水分、氧氣、pH等。微生物的種類不
微生物的生長，除了受本身的遺傳特性決定外，還受到許多外界因素的影響，如營養物濃度、溫度、水分、氧氣、pH等。微生物的種類不同，培養的方式和條件也不盡相同，其貯存方法也是很有講究的，跟小編一起來看看吧。細(xi)菌(jun)和(he)其(qi)它(ta)生(sheng)物(wu)一(yi)樣(yang)，大(da)多(duo)數(shu)屬(shu)異(yi)養(yang)菌(jun)，必(bi)須(xu)從(cong)周(zhou)圍(wei)環(huan)境(jing)中(zhong)攝(she)取(qu)營(ying)養(yang)，進(jin)行(xing)新(xin)陳(chen)代(dai)謝(xie)及(ji)生(sheng)長(chang)繁(fan)殖(zhi)等(deng)生(sheng)命(ming)活(huo)動(dong)。人(ren)為(wei)的(de)提(ti)供(gong)細(xi)菌(jun)生(sheng)長(chang)繁(fan)殖(zhi)所(suo)需(xu)的(de)營(ying)養(yang)物(wu)質(zhi)（適宜的培養基）和創造適合細菌生長繁殖的有利條件如溫度、濕度、氣體等，能使細菌在體外迅速生長繁殖。
正確配製培養基是微生物培養的基礎步驟之一，實驗室使用各種基礎成分製備培養基時，應按照配方準確配製，並記錄相關信息，如：培養基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、製造商、批號、pH、培養基體積（分裝體積）、無菌措施（包括實施的方式、溫度及時間）、配置日期、人員等，以便溯源。1化學物質滅菌：藥物與微生物細胞中的成分反應，使蛋白質變性、酶失活；使用範圍：器皿、雙手和實驗室、無菌室的環境滅菌，不能用於培養基滅菌；常用的有酒精、來蘇爾等。2輻射滅菌：原理是利用高能量的電磁輻射與菌體核酸的光化學反應造成菌體死亡；常用的有紫外線、X射線和γ射線，用於室內空氣及器皿表麵滅菌。3幹熱滅菌：原理是利用高溫對微生物有氧化、蛋白質變性和電解質濃縮作用而殺滅微生物；常用灼燒和電熱箱加熱，140-180℃ 1-2小時，適於對玻璃及金屬用具及沙土管滅菌。4濕熱滅菌：原yuan理li是shi直zhi接jie用yong蒸zheng汽qi滅mie菌jun，蒸zheng汽qi在zai冷leng凝ning時shi能neng釋shi放fang出chu大da量liang潛qian熱re，蒸zheng汽qi具ju有you強qiang大da的de穿chuan透tou力li，破po壞huai菌jun體ti蛋dan白bai和he核he酸suan的de化hua學xue鍵jian，使shi酶mei失shi活huo，微wei生sheng物wu因yin代dai謝xie障zhang礙ai而er死si亡wang，水shui煮zhu常chang壓ya滅mie菌jun：100℃，或飽和蒸汽滅菌：一般121℃，30分鍾，適合培養基和發酵設備滅菌。5過濾除菌：除菌原理是利用微生物不能透過濾膜除菌，方法是使用0.01~0.45 μm孔徑濾膜，用於壓縮空氣、酶溶液及其他不耐熱化合物溶液除菌。將微生物接到適於他生長的人工培養基上或活的生物體內的過程叫做接種，接種方法有以下幾種：最常用的接種方法，即在固體培養基表麵作來回直線形的移動，就可達到接種的作用，常用的接種工具有接種環、接種針等，在斜麵接種和平板接種中常用此法在研究黴菌形態時常用此法，即把少量的微生物接種在平板表麵上，成等邊三角形的三點，讓它各自獨立形成菌落後，來觀察、研究它們的形態在(zai)保(bao)藏(zang)厭(yan)氧(yang)菌(jun)或(huo)研(yan)究(jiu)微(wei)生(sheng)物(wu)的(de)動(dong)力(li)時(shi)常(chang)采(cai)用(yong)此(ci)法(fa)，做(zuo)穿(chuan)刺(ci)接(jie)種(zhong)時(shi)，用(yong)的(de)接(jie)種(zhong)工(gong)具(ju)是(shi)接(jie)種(zhong)針(zhen)，用(yong)接(jie)種(zhong)針(zhen)蘸(zhan)取(qu)少(shao)量(liang)的(de)菌(jun)種(zhong)，沿(yan)半(ban)固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)心(xin)向(xiang)管(guan)底(di)做(zuo)支(zhi)線(xian)穿(chuan)刺(ci)將待接的微生物先放入培養皿中，然後再倒入冷卻至45℃左右的固體培養基，迅速輕輕搖勻，這樣菌液就達到稀釋的目的；待平板凝固之後，置合適溫度下培養，就可長出單個的微生物菌落與yu澆jiao混hun接jie種zhong略lve有you不bu同tong，就jiu是shi先xian倒dao好hao平ping板ban，讓rang其qi凝ning固gu，然ran後hou再zai將jiang菌jun液ye倒dao入ru平ping板ban上shang麵mian，迅xun速su用yong塗tu布bu棒bang在zai表biao麵mian作zuo來lai回hui左zuo右you的de塗tu布bu，讓rang菌jun液ye均jun勻yun分fen布bu，就jiu可ke長chang出chu單dan個ge的de微wei生sheng物wu的de菌jun落luo從cong固gu體ti培pei養yang基ji中zhong將jiang菌jun洗xi下xia，倒dao入ru液ye體ti培pei養yang基ji中zhong，或huo者zhe從cong液ye體ti培pei養yang物wu中zhong，用yong移yi液ye管guan將jiang菌jun液ye接jie至zhi液ye體ti培pei養yang基ji中zhong，或huo從cong液ye體ti培pei養yang物wu中zhong將jiang菌jun液ye移yi至zhi固gu體ti培pei養yang基ji中zhong，都dou可ke稱cheng為wei液ye體ti接jie種zhong該(gai)法(fa)是(shi)用(yong)注(zhu)射(she)的(de)方(fang)法(fa)將(jiang)待(dai)接(jie)的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)轉(zhuan)接(jie)至(zhi)活(huo)的(de)生(sheng)物(wu)體(ti)內(nei)，如(ru)人(ren)或(huo)其(qi)它(ta)動(dong)物(wu)中(zhong)，常(chang)見(jian)的(de)疫(yi)苗(miao)預(yu)防(fang)接(jie)種(zhong)，就(jiu)是(shi)用(yong)注(zhu)射(she)接(jie)種(zhong)，接(jie)入(ru)人(ren)體(ti)，來(lai)預(yu)防(fang)某(mou)些(xie)疾(ji)病(bing)活(huo)體(ti)接(jie)種(zhong)是(shi)專(zhuan)門(men)用(yong)於(yu)培(pei)養(yang)病(bing)毒(du)或(huo)其(qi)它(ta)病(bing)原(yuan)微(wei)生(sheng)物(wu)的(de)一(yi)種(zhong)方(fang)法(fa)，因(yin)為(wei)病(bing)毒(du)必(bi)須(xu)接(jie)種(zhong)於(yu)活(huo)的(de)生(sheng)物(wu)體(ti)內(nei)才(cai)能(neng)生(sheng)長(chang)繁(fan)殖(zhi)，所(suo)用(yong)的(de)活(huo)體(ti)可(ke)以(yi)是(shi)整(zheng)個(ge)動(dong)物(wu)、某個離體活組織、發育的雞胚，接種的方式是注射、拌料喂養等根據微生物的菌種生理、生化特性，在人工創造的條件下盡量降低微生物細胞的代謝強度， 使細胞基本處於休眠狀態，生長繁殖受到抑製但又不至於死亡，以減低菌種的變異率；低溫、幹燥、缺氧、缺乏營養等環境條件都有抑製微生物的代謝作用。4定期對保藏菌種進行檢查，觀察是否發生變化，若有變化，須改變保藏方法；保藏期滿 應及時進行移種將經常使用的菌種的典型菌落接種在斜麵（某些特殊菌種可用液體培養基）上，按規定的溫度和時間培養，待充分生長後，把培養好的新鮮菌種用牛皮紙包好，放在4℃左右的冰箱中保藏，每隔2~3個月移種一次，繼續進行保藏。若用半固體高層培養基穿刺培養，一般可保藏半年～一年，有的甚至更長時間將菌種接種於斜麵或穿刺於0.3~ 0.5 %瓊脂半固體高層培養基中，培養好備用。取液體石蠟裝在試管中，121℃高壓滅菌30min，取出置37℃溫箱或110~ 170 ℃烤箱中1 ~ 2 h或幹燥器內除去液體石蠟中的水分，將上述液體石蠟加入培養好的菌種試管內，液體石蠟液麵以高出培養基最上端 1cm為宜，將試管直立，放入4℃冰箱中保藏
編輯：songjiajie2010
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