2、染色菌的選擇 

菌jun齡ling對dui革ge蘭lan氏shi染ran色se結jie果guo的de影ying響xiang是shi十shi分fen大da的de。我wo們men染ran色se過guo程cheng中zhong選xuan擇ze的de菌jun應ying該gai是shi處chu於yu活huo躍yue生sheng長chang期qi，這zhe樣yang的de細xi菌jun活huo性xing強qiang，生sheng理li特te征zheng明ming顯xian，所suo以yi染ran色se的de結jie果guo準zhun確que度du高gao，一yi般ban情qing況kuang下xia不bu會hui出chu現xian誤wu差cha。培pei養yang時shi間jian較jiao長chang的de革ge蘭lan氏shi陽yang性xing菌jun，由you於yu細xi胞bao老lao化hua，甚shen至zhi有you部bu分fen菌jun在zai染ran色se之zhi前qian就jiu已yi經jing死si亡wang或huo者zhe自zi行xing溶rong解jie了le
，造zao成cheng細xi胞bao壁bi通tong透tou性xing增zeng加jia，就jiu會hui呈cheng現xian出chu假jia陰yin性xing。以yi金jin黃huang色se葡pu萄tao球qiu菌jun為wei例li
，金jin葡pu是shi典dian型xing的de革ge蘭lan氏shi陽yang性xing菌jun，有you人ren曾zeng經jing統tong計ji過guo培pei養yang至zhi不bu同tong時shi間jian的de金jin葡pu的de革ge蘭lan氏shi染ran色se結jie果guo，結jie果guo表biao明ming，在zai金jin葡pu活huo躍yue期qi的de22h-26h之間，染色結果的準確率基本可以達到100%，而超過26h之後
，準確率就開始下降，培養至36h時
，準確率大概會下降30%左右。所以我們在染色時，一定要選擇處於活躍期
、活性較強的菌落
，在檢測過程中一定要嚴格的在國標要求的時間段內進行染色試驗，不能提前或者延後。

3、塗菌的狀態

在zai染ran色se最zui初chu的de塗tu布bu中zhong，在zai挑tiao取qu菌jun體ti後hou應ying該gai在zai無wu菌jun水shui上shang塗tu成cheng薄bo薄bo的de菌jun膜mo。而er在zai塗tu布bu過guo程cheng中zhong

，若ruo是shi菌jun體ti堆dui積ji，也ye會hui極ji大da影ying響xiang染ran色se結jie果guo的de準zhun確que性xing。菌jun落luo堆dui積ji過guo多duo，往wang往wang菌jun體ti之zhi間jian變bian得de毫hao無wu縫feng隙xi
，而er其qi細xi胞bao壁bi的de成cheng分fen影ying響xiang造zao成cheng了le脫tuo色se的de情qing況kuang不bu佳jia，容rong易yi產chan生sheng假jia陽yang性xing的de結jie果guo。同tong時shi，在zai初chu染ran、媒(mei)染(ran)及(ji)複(fu)染(ran)的(de)過(guo)程(cheng)中(zhong)，應(ying)將(jiang)染(ran)液(ye)覆(fu)蓋(gai)整(zheng)個(ge)菌(jun)膜(mo)，避(bi)免(mian)一(yi)部(bu)分(fen)菌(jun)染(ran)色(se)而(er)另(ling)一(yi)部(bu)分(fen)菌(jun)沒(mei)有(you)染(ran)色(se)。因(yin)此(ci)在(zai)塗(tu)片(pian)過(guo)程(cheng)一(yi)定(ding)要(yao)將(jiang)菌(jun)膜(mo)塗(tu)得(de)少(shao)而(er)均(jun)勻(yun)，這(zhe)樣(yang)才(cai)能(neng)達(da)到(dao)最(zui)佳(jia)效(xiao)果(guo)。

4、媒染時間

媒(mei)染(ran)時(shi)間(jian)對(dui)革(ge)蘭(lan)氏(shi)陰(yin)性(xing)菌(jun)的(de)染(ran)色(se)結(jie)果(guo)有(you)很(hen)大(da)影(ying)響(xiang)。由(you)於(yu)媒(mei)染(ran)時(shi)間(jian)過(guo)長(chang)，結(jie)晶(jing)紫(zi)在(zai)碘(dian)液(ye)長(chang)時(shi)間(jian)作(zuo)用(yong)下(xia)過(guo)分(fen)牢(lao)固(gu)結(jie)合(he)在(zai)菌(jun)體(ti)細(xi)胞(bao)壁(bi)上(shang)
，影(ying)響(xiang)了(le)酒(jiu)精(jing)的(de)脫(tuo)色(se)效(xiao)果(guo)
，從(cong)而(er)會(hui)導(dao)致(zhi)這(zhe)種(zhong)假(jia)陽(yang)性(xing)的(de)效(xiao)果(guo)。以(yi)典(dian)型(xing)的(de)革(ge)蘭(lan)氏(shi)陰(yin)性(xing)菌(jun)大(da)腸(chang)埃(ai)希(xi)氏(shi)菌(jun)為(wei)例(li)
，有(you)人(ren)做(zuo)過(guo)統(tong)計(ji)
，媒(mei)染(ran)時(shi)間(jian)嚴(yan)格(ge)控(kong)製(zhi)在(zai)40s-60s之內

，染色結果準確率基本可達到100%，而超過60s準確率會有一定的降低
，若媒染超過100s，準確率甚至可降低接近20%左右。因此在媒染過程中一定要注意媒染時間
，控製在50-60s為宜。

5、酒精脫色

jiujingtuoseyeshiyigeduijieguoyingxiangjiaodadecaozuoguocheng。gelanshiyinxingjunhegelanshiyangxingjunzuizhuyaodechayishixibaobitaijutangcenghouduhejiegou，gelanshiyinxingjunxibaobitaijutangcenghenbo，zhiduotanghanlianggaoyincizaijiujingtuoseshi，xijunxibaobideduotangchengfenhuibeijiujingrongjie
，zengdalexibaobidetongtouxing，jiejingzijidianfuhewujiuhenkuaibeijiujingxituo
，zhihoujiuhuibeishahuangfuranchenghongse；而er陽yang性xing菌jun肽tai聚ju糖tang層ceng厚hou，脂zhi多duo糖tang少shao，酒jiu精jing隻zhi能neng起qi到dao脫tuo水shui效xiao果guo而er無wu法fa進jin入ru
，這zhe樣yang結jie晶jing紫zi和he複fu合he物wu就jiu無wu法fa洗xi脫tuo出chu來lai使shi細xi胞bao呈cheng紫zi色se。因yin此ci，酒jiu精jing脫tuo色se時shi間jian短duan
，脫tuo色se效xiao果guo不bu佳jia

，會hui導dao致zhi陰yin性xing菌jun菌jun體ti內nei的de結jie晶jing紫zi和he複fu合he物wu不bu能neng有you效xiao的de全quan部bu洗xi脫tuo出chu來lai
，就jiu會hui出chu現xian明ming顯xian的de誤wu差cha，使shi陰yin性xing菌jun出chu現xian假jia陽yang性xing。而er洗xi脫tuo時shi間jian過guo長chang，也ye會hui導dao致zhi陽yang性xing菌jun的de細xi胞bao壁bi被bei酒jiu精jing破po壞huai
，導dao致zhi細xi胞bao內nei的de紫zi色se被bei洗xi脫tuo，呈cheng現xian假jia陰yin性xing。因yin此ci洗xi脫tuo時shi間jian也ye是shi革ge蘭lan氏shi染ran色se的de關guan鍵jian環huan節jie。洗xi脫tuo時shi間jian應ying當dang嚴yan格ge控kong製zhi在zai20s-30s之間，同時保證洗脫效果。