相差顯微鏡是一種將光線通過透明標本細節時所產生的光程差（即相位差）轉化為光強差的特種顯微鏡。

光線通過比較透明的標本時，光的波長（顏色）和振幅（亮度）都沒有明顯的變化。因此
，用普通光學顯微鏡觀察未經染色的標本（如活的細胞）時shi，其qi形xing態tai和he內nei部bu結jie構gou往wang往wang難nan以yi分fen辨bian。然ran而er，由you於yu細xi胞bao各ge部bu分fen的de折zhe射she率lv和he厚hou度du的de不bu同tong，光guang線xian通tong過guo這zhe種zhong標biao本ben時shi，直zhi射she光guang和he衍yan射she光guang的de光guang程cheng就jiu會hui有you差cha別bie。隨sui著zhe光guang程cheng的de增zeng加jia或huo減jian少shao，加jia快kuai或huo落luo後hou的de光guang波bo的de相xiang位wei會hui發fa生sheng改gai變bian（產生相位差）。光的相位差人的肉眼感覺不到，但相差顯微鏡能通過其特殊裝置——環狀光闌和相板，利用光的幹涉現象
，將光的相位差轉變為人眼可以察覺的振幅差（明暗差）

，從cong而er使shi原yuan來lai透tou明ming的de物wu體ti表biao現xian出chu明ming顯xian的de明ming暗an差cha異yi，對dui比bi度du增zeng強qiang，使shi我wo們men能neng比bi較jiao清qing楚chu的de觀guan察cha到dao普pu通tong光guang學xue顯xian微wei鏡jing和he暗an視shi野ye顯xian微wei鏡jing下xia都dou看kan不bu到dao或huo看kan不bu清qing的de活huo細xi胞bao及ji細xi胞bao內nei的de某mou些xie細xi微wei結jie構gou。

（二）相差顯微鏡的成像原理 
jingjianshiguangyuanzhinengtongguohuanzhuangguanglandetouminghuan
，jingjuguangqihoujuchengguangshu，zheshuguangxiantongguobeijianwutishi，yingebufendeguangchengbutong
，guangxianfashengbutongchengdudepianxie（衍射）。由(you)於(yu)透(tou)明(ming)圓(yuan)環(huan)所(suo)成(cheng)的(de)像(xiang)恰(qia)好(hao)落(luo)在(zai)物(wu)鏡(jing)後(hou)焦(jiao)點(dian)平(ping)麵(mian)和(he)相(xiang)板(ban)上(shang)的(de)共(gong)軛(e)麵(mian)重(zhong)合(he)。因(yin)此(ci)

，未(wei)發(fa)生(sheng)偏(pian)斜(xie)的(de)直(zhi)射(she)光(guang)便(bian)通(tong)過(guo)共(gong)軛(e)麵(mian)

，而(er)發(fa)生(sheng)偏(pian)斜(xie)的(de)衍(yan)射(she)光(guang)則(ze)經(jing)補(bu)償(chang)麵(mian)通(tong)過(guo)。由(you)於(yu)相(xiang)板(ban)上(shang)的(de)共(gong)軛(e)麵(mian)和(he)補(bu)償(chang)麵(mian)的(de)性(xing)質(zhi)不(bu)同(tong)，它(ta)們(men)分(fen)別(bie)將(jiang)通(tong)過(guo)這(zhe)兩(liang)部(bu)分(fen)的(de)光(guang)線(xian)產(chan)生(sheng)一(yi)定(ding)的(de)相(xiang)位(wei)差(cha)和(he)強(qiang)度(du)的(de)減(jian)弱(ruo)

，兩(liang)組(zu)光(guang)線(xian)再(zai)經(jing)後(hou)透(tou)鏡(jing)的(de)會(hui)聚(ju)，又(you)複(fu)在(zai)同(tong)一(yi)光(guang)路(lu)上(shang)行(xing)進(jin)，而(er)使(shi)直(zhi)射(she)光(guang)和(he)衍(yan)射(she)光(guang)產(chan)生(sheng)光(guang)的(de)幹(gan)涉(she)
，變(bian)相(xiang)位(wei)差(cha)為(wei)振(zhen)幅(fu)差(cha)。這(zhe)樣(yang)在(zai)相(xiang)差(cha)顯(xian)微(wei)鏡(jing)鏡(jing)檢(jian)時(shi)，通(tong)過(guo)無(wu)色(se)透(tou)明(ming)體(ti)的(de)光(guang)線(xian)使(shi)人(ren)眼(yan)不(bu)可(ke)分(fen)辨(bian)的(de)相(xiang)位(wei)差(cha)轉(zhuan)化(hua)為(wei)人(ren)眼(yan)可(ke)以(yi)分(fen)辨(bian)的(de)振(zhen)幅(fu)差(cha)（明暗差）。

（三）相差顯微鏡的結構和裝置 　

相差顯微鏡與普通光學顯微鏡的基本結構是相同的
，所不同的是它具有四部分特殊結構：即環狀光闌
、相板、合軸調節望遠鏡及綠色濾光片。

1
、環狀光闌 具(ju)有(you)環(huan)形(xing)開(kai)孔(kong)的(de)光(guang)闌(lan)。位(wei)於(yu)聚(ju)光(guang)器(qi)的(de)前(qian)焦(jiao)點(dian)平(ping)麵(mian)上(shang)，光(guang)闌(lan)的(de)直(zhi)徑(jing)大(da)小(xiao)是(shi)與(yu)物(wu)鏡(jing)的(de)放(fang)大(da)倍(bei)數(shu)相(xiang)匹(pi)配(pei)的(de)，並(bing)有(you)一(yi)個(ge)明(ming)視(shi)場(chang)光(guang)闌(lan)，與(yu)聚(ju)焦(jiao)器(qi)一(yi)起(qi)組(zu)成(cheng)轉(zhuan)盤(pan)聚(ju)光(guang)器(qi)。在(zai)使(shi)用(yong)時(shi)隻(zhi)要(yao)把(ba)相(xiang)應(ying)的(de)光(guang)闌(lan)轉(zhuan)到(dao)光(guang)路(lu)即(ji)可(ke)。

2、相板 位於物鏡內部的後焦平麵上。相板上有兩個區域，直射光通過的部分叫“共軛麵”，衍射光通過的部分叫“補償麵”。帶有相板的物鏡叫相差物鏡，常以“Ph”字樣標在物鏡外殼上。

相板上鍍有兩種不同的金屬膜：吸收膜和相位膜。吸收膜常為鉻、銀等金屬在真空中蒸發而鍍成的薄膜，它能把通過的光線吸收掉60%—93%，相位膜為氟化鎂等在真空中蒸發鍍成，它能把通過的光線相位推遲1/4波長。

　　
genjuxuyao，liangzhongmoyoubutongdedufa，congerzhizaochubutongleixingdexiangchawujing。ruguoxishoumohexiangweimodouduzaixiangfandegongemianshang，tongguogongemiandezhisheguangbudanzhenfujianruo，erqiexiangweiyebeituichi1/4λ，衍射光因通過物體時相位也被推遲1/4λ，這zhe樣yang就jiu使shi得de直zhi射she光guang與yu衍yan射she光guang維wei持chi在zai同tong一yi個ge相xiang位wei上shang。根gen據ju相xiang長chang幹gan涉she原yuan理li，合he成cheng光guang等deng於yu直zhi射she光guang與yu衍yan射she光guang振zhen幅fu之zhi和he，因yin背bei景jing隻zhi有you直zhi射she光guang的de照zhao明ming，所suo以yi通tong過guo被bei檢jian物wu體ti的de合he成cheng光guang就jiu比bi背bei景jing明ming亮liang。這zhe樣yang的de效xiao果guo叫jiao負fu相xiang差cha
，鏡jing檢jian效xiao果guo是shi暗an中zhong之zhi明ming。

　　
如(ru)果(guo)吸(xi)收(shou)膜(mo)鍍(du)在(zai)共(gong)軛(e)麵(mian)
，相(xiang)位(wei)膜(mo)鍍(du)在(zai)補(bu)償(chang)麵(mian)上(shang)
，直(zhi)射(she)光(guang)僅(jin)被(bei)吸(xi)收(shou)
，振(zhen)幅(fu)減(jian)少(shao)
，但(dan)相(xiang)位(wei)未(wei)被(bei)推(tui)遲(chi)
，而(er)通(tong)過(guo)補(bu)償(chang)麵(mian)的(de)衍(yan)射(she)光(guang)的(de)相(xiang)位(wei)
，則(ze)被(bei)推(tui)遲(chi)了(le)兩(liang)個(ge)1/4λ，因此衍射光的相位要比直射光相位落後1/2λ。根據相消幹涉原理，這樣通過被檢物體的合成光要比背景暗，這種效果叫正相差，即鏡檢效果是明中之暗。

　　
負相差物鏡（Negative　contrast）用縮寫字母“N”表示，正相差物鏡（Positive contrast）用縮寫字母“P”表示，由於吸收膜對通過它的光線的透過率不同，可分為高

、中、低及低低，如Olympus光的透過率分為：7%、15%、20%、40%四個等級，因此分為高（High略寫為H），中（Medium略寫為M），低（Low略寫為L）及低低（Low—Low略寫成LL）四類

，構成了負高（NH）、負中（NM）、正低（PL）和正低低（PLL）四種類型相差物鏡
，這些字母符號都寫在相差物鏡的外殼上。可根據被檢物體的特性來選擇使用不同類型的相差物鏡。

3
、合軸調節望遠鏡 是shi相xiang差cha顯xian微wei鏡jing一yi個ge極ji為wei重zhong要yao的de結jie構gou。環huan狀zhuang光guang闌lan的de像xiang必bi須xu與yu相xiang板ban共gong軛e麵mian完wan全quan吻wen合he，才cai能neng實shi現xian對dui直zhi射she光guang和he衍yan射she光guang的de特te殊shu處chu理li。否fou則ze應ying被bei吸xi收shou的de直zhi射she光guang被bei泄xie掉diao，而er不bu該gai吸xi收shou的de衍yan射she光guang反fan被bei吸xi收shou，應ying推tui遲chi的de相xiang位wei有you的de不bu能neng被bei推tui遲chi，這zhe樣yang就jiu不bu能neng達da到dao相xiang差cha鏡jing檢jian的de效xiao果guo。由you於yu環huan狀zhuang光guang闌lan是shi通tong過guo轉zhuan盤pan聚ju光guang器qi與yu物wu鏡jing相xiang匹pi配pei的de
，因yin而er環huan狀zhuang光guang闌lan與yu相xiang板ban常chang不bu同tong軸zhou。為wei此ci，相xiang差cha顯xian微wei鏡jing配pei備bei有you一yi個ge合he軸zhou調tiao節jie望wang遠yuan鏡jing（在鏡的外殼上標有“CT”符號）

，用(yong)於(yu)合(he)軸(zhou)調(tiao)節(jie)。使(shi)用(yong)時(shi)撥(bo)去(qu)一(yi)側(ce)目(mu)鏡(jing)，插(cha)入(ru)合(he)軸(zhou)調(tiao)節(jie)望(wang)遠(yuan)鏡(jing)
，旋(xuan)轉(zhuan)合(he)軸(zhou)調(tiao)節(jie)望(wang)遠(yuan)鏡(jing)的(de)焦(jiao)點(dian)
，便(bian)能(neng)清(qing)楚(chu)看(kan)到(dao)一(yi)明(ming)一(yi)暗(an)兩(liang)個(ge)圓(yuan)環(huan)。再(zai)轉(zhuan)動(dong)聚(ju)光(guang)器(qi)上(shang)的(de)環(huan)狀(zhuang)光(guang)闌(lan)的(de)兩(liang)個(ge)調(tiao)節(jie)鈕(niu)

，使(shi)明(ming)亮(liang)的(de)環(huan)狀(zhuang)光(guang)闌(lan)圓(yuan)環(huan)與(yu)暗(an)的(de)相(xiang)板(ban)上(shang)共(gong)軛(e)麵(mian)暗(an)環(huan)完(wan)全(quan)重(zhong)疊(die)。如(ru)明(ming)亮(liang)的(de)光(guang)環(huan)過(guo)小(xiao)或(huo)過(guo)大(da)，可(ke)調(tiao)節(jie)聚(ju)光(guang)器(qi)的(de)升(sheng)降(jiang)旋(xuan)鈕(niu)，使(shi)兩(liang)環(huan)完(wan)全(quan)吻(wen)合(he)。如(ru)果(guo)聚(ju)光(guang)器(qi)已(yi)升(sheng)到(dao)最(zui)高(gao)點(dian)或(huo)降(jiang)到(dao)最(zui)低(di)點(dian)而(er)仍(reng)不(bu)能(neng)矯(jiao)正(zheng)
，說(shuo)明(ming)玻(bo)片(pian)太(tai)厚(hou)了(le)
，應(ying)更(geng)換(huan)。調(tiao)好(hao)後(hou)取(qu)下(xia)望(wang)遠(yuan)鏡(jing)，換(huan)上(shang)目(mu)鏡(jing)即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)鏡(jing)檢(jian)觀(guan)察(cha)。

4、綠色濾光片 由you於yu使shi用yong的de照zhao明ming光guang線xian的de波bo長chang不bu同tong，常chang引yin起qi相xiang位wei的de變bian化hua
，為wei了le獲huo得de良liang好hao的de相xiang差cha效xiao果guo

，相xiang差cha顯xian微wei鏡jing要yao求qiu使shi用yong波bo長chang範fan圍wei比bi較jiao窄zhai的de單dan色se光guang
，通tong常chang是shi用yong綠lv色se濾lv光guang片pian來lai調tiao整zheng光guang源yuan的de波bo長chang。Olympus廠家生產的相差顯微鏡在鏡檢時要使用該廠規定的IF550綠色濾光片作為配套器件。

（四）相差顯微鏡的使用範圍、操作步驟及注意事項

1
、使用範圍 相差顯微鏡能觀察到透明樣品的細節，適用於對活體細胞生活狀態下的生長、運動
、增殖情況及細微結構的觀察。因此，是微生物學、細胞生物學
、細胞和組織培養、細胞工程、雜交瘤技術等現代生物學研究的必備工具。

2、操作步驟 

（1）根據觀察標本的性質及要求，挑選適合的相差物鏡。

（2）將標本片放到載物台上。

（3）進行光軸中心的調整。

（4）quxiayicemujing，huanshanghezhoutiaojiewangyuanjing，tiaozhenghuanzhuangguanglanyuxiangbanshangdegongemianyuanhuanwanquanzhongdiewenhe
，ranhouquxiahezhoutiaojiewangyuanjing
，huanhuimujing。zaishiyongzhong，ruxuyaogenghuanwujingbeishushi
，bixuzhongxinjinxinghuanzhuangguanglanyuxiangbangongemianyuanhuanwenhedetiaozheng。

（5）放上綠色濾光片，即可進行鏡檢，鏡檢操作與普通光學顯微鏡方法相同。

3、注意事項

（1）視場光闌與聚光器的孔徑光闌必須全部開大，而且光源要強。因環狀光闌遮掉大部分光，物鏡相板上共軛麵又吸收大部分光。

（2）不同型號的光學部件不能互換使用。

（3）載玻片、蓋玻片的厚度應遵循標準，不能過薄或過厚。

（4）切片不能太厚，一般以5—10μm為宜，否則會引起其他光學現象，影響成像質量。