通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物

，革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚
、肽(tai)聚(ju)糖(tang)網(wang)層(ceng)次(ci)較(jiao)多(duo)且(qie)交(jiao)聯(lian)致(zhi)密(mi)，故(gu)遇(yu)乙(yi)醇(chun)脫(tuo)色(se)處(chu)理(li)時(shi)
，因(yin)失(shi)水(shui)反(fan)而(er)使(shi)網(wang)孔(kong)縮(suo)小(xiao)，再(zai)加(jia)上(shang)它(ta)不(bu)含(han)類(lei)脂(zhi)，故(gu)乙(yi)醇(chun)處(chu)理(li)不(bu)會(hui)出(chu)現(xian)縫(feng)隙(xi)，因(yin)此(ci)能(neng)把(ba)結(jie)晶(jing)紫(zi)與(yu)碘(dian)複(fu)合(he)物(wu)牢(lao)牢(lao)留(liu)在(zai)壁(bi)內(nei)，使(shi)其(qi)仍(reng)呈(cheng)紫(zi)色(se)
；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、taijutangcengboqiejiaolianducha，zaiyutuosejihou

，yileizhiweizhudewaimoxunsurongjie
，boersongsandetaijutangwangbunengzudangjiejingziyudianfuhewuderongchu

，yincitongguoyichuntuosehourengchengwuse，zaijingfanhongdenghongseranliaofuran，jiushigelanshiyinxingjunchenghongse。
 

二
、步驟
 

  革蘭氏染色法的步驟為：塗片→固定→結晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脫色→番紅複染→水洗→幹燥→觀察。

1、塗片 

  首shou先xian在zai載zai玻bo片pian上shang滴di一yi小xiao滴di蒸zheng餾liu水shui，用yong灼zhuo燒shao過guo的de接jie種zhong針zhen挑tiao取qu少shao量liang細xi菌jun，置zhi於yu載zai玻bo片pian的de水shui滴di中zhong與yu水shui混hun合he並bing塗tu抹mo開kai。注zhu意yi塗tu抹mo要yao均jun勻yun平ping坦tan，塗tu抹mo成cheng直zhi徑jing約yue為wei1 cm的薄層。　

2、固定

  將載玻片在火焰上方快速來回通過一兩次
，以載玻片的加熱麵接觸手背皮膚
，不覺過燙為佳；待冷卻後再在火焰上方來回通過一兩次，再冷卻，重複操作直到薄層變幹。

3
、結晶紫染色 

  染色1分鍾
，然後水洗並用吸水紙吸幹。

  碘液媒染 染色1分鍾
，然後水洗並吸幹。

4、酒精脫色

  用95%酒精脫色，直到酒精不出現紫色時即停止（大約半分鍾），然後立即水洗
，並吸幹。

5、番紅複染 

  染色3分鍾左右

，然後水洗並吸幹。

6、鏡檢

  在顯微鏡油鏡頭下觀察，菌體顯藍紫色的為革蘭氏陽性菌；菌體顯紅色的為革蘭氏陰性菌。
 

三、結果
 

  染色結果革蘭氏陽性菌呈藍紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。

四、意義

1、鑒別細菌 

2、選擇藥物 

3
、與致病性有關

  革蘭氏陽性菌能產生外毒素，革蘭氏陰性菌能產生內毒素；而內毒素主要是指革蘭氏陰性菌胞壁成分中的脂多糖，兩者的致病作用不同。
 

五、注意事項
 

1、注意塗片不宜過厚
，勿使細菌密集重疊，影響脫色效果，否則脫色不完全造成假陽性。鏡檢時應以視野內分散細胞的染色反應為標準。

2
、火焰固定溫度要適宜，以玻片不燙手為宜
，否則菌體細胞變性。

3、滴加染色液與酒精時一定要覆蓋整個菌膜，否則部分菌膜未受處理，亦可造成假象。

4

、乙醇脫色是革蘭氏操作的關鍵環節。如脫色過度，則G+被誤染成G-菌，而脫色不足，G-被誤染成G+菌。在染色方法正確無誤的前提下，如菌齡過長、死亡或細胞壁受損傷的G+也會呈陰性反應，故革蘭氏染色用要對數生長期的幼齡培養物。

5、染色過程的時間控製。應根據季節
、氣溫調整。一般冬季時間可稍微長些
，夏季可稍微短些。