關鍵詞 乙酰膽堿酯酶(AchE ) 抑製率(inhibition ratio) 快速檢測(quick detection)
隨著人們的生活質量的不斷提高,健康意識不斷加強,中國農產品出口麵臨重大機遇與挑戰的關鍵時期,國家認監委計劃舉辦“第十二屆全國HACCP應用與認證研討會”,可謂廣開言路,對有效控製食品安全事故發生,推進農產品出口,提升HACCP體係理論水平都具有重大意義。在此,筆者談談關於食品加工、流通環節中的關鍵控製點:在原料驗收環節,以及蔬菜、水果市場準入和出入境農殘檢測中,提出加大“乙酰膽堿酯酶抑製率測定蔬菜水果農殘”(以下簡稱“抑製率法”)應用力度的建議,以高效、快捷、低成本保證食品安全、避免引起農產品質量的國際糾紛來增加一道保險;且建議將“抑製率”作為判定是否合格的重要參考數據作為供有關管理部門的執法依據。
抑製率法最早源於西方醫學、農(nong)產(chan)品(pin)等(deng)領(ling)域(yu),國(guo)內(nei)外(wai)的(de)相(xiang)關(guan)文(wen)獻(xian)不(bu)少(shao)。有(you)的(de)國(guo)家(jia)或(huo)地(di)區(qu),如(ru)東(dong)南(nan)亞(ya)及(ji)中(zhong)國(guo)台(tai)灣(wan)已(yi)將(jiang)抑(yi)製(zhi)率(lv)的(de)檢(jian)測(ce)結(jie)果(guo)作(zuo)為(wei)判(pan)定(ding)農(nong)產(chan)品(pin)是(shi)否(fou)允(yun)許(xu)進(jin)入(ru)市(shi)場(chang)流(liu)通(tong)的(de)重(zhong)要(yao)依(yi)據(ju)之(zhi)一(yi)。2001年以來,中國出台了《蔬菜上有機磷和安基甲酸酯類農藥殘毒快速檢測法》標準:NY/T448-2001和GB/T5009-2003。但若幹年來,檢驗檢疫係統、nongyebumenzaiduikuaisujianceqijuhejiancerenyuandepeixunjiaoweizhongshi,zaigedijianliledaliangdekuaisunongcanzhan。bizheganjiaozhemehaodefangfa,zaiyingyongshanghaiquefayidingdelidu,ruyouxieguanlibumenhaiweijiangyizhilvzuoweizhifayiju。yuanyinshishangshulianggebiaozhunzaiyizhilvjiancedeceshifangfashangbenshenyouyidingdequexian,daozhizhongxianxingjiaocha,shicaixinshangcunzaiyidingdenandu。bizhetongguoshijian,zuolejishushangdegaijin,jiejuelezhefangmiandewenti,shizhikexuexinggengqiang。
眾zhong所suo周zhou知zhi,合he格ge的de農nong藥yao在zai農nong產chan品pin的de生sheng產chan中zhong是shi不bu可ke缺que的de,若ruo不bu施shi用yong農nong藥yao,農nong作zuo物wu在zai成cheng熟shu前qian或huo萌meng芽ya狀zhuang態tai基ji本ben就jiu被bei病bing蟲chong害hai消xiao滅mie了le,導dao致zhi農nong作zuo物wu的de減jian產chan或huo絕jue收shou。聰cong明ming的de學xue者zhe研yan究jiu了le可ke降jiang解jie的de安an全quan農nong藥yao,在zai一yi定ding的de時shi間jian內nei有you毒du性xing,確que保bao農nong作zuo物wu不bu受shou蟲chong害hai、黴菌和雜草的幹擾,正常健康地生長,隻要嚴格控製休藥期,農產品就安全無毒。每年數十萬噸、價格以億計的農藥用於田間地頭,農藥銷售、種植基地都有專業的植物醫生們做技術指導,但在利益驅動下,不懂科學亂用藥的、或購到假農藥的、追求華麗的外觀不嚴格遵守休藥期的現象難以避免,因此產生了農殘檢測的行業。
xianjinnongcanjiancedeshebeizhuyaoshiqixiangsepuhuoqizhilianyongyideng,zheleishebeinengduinongcanjinxingdingxingdingliangdezhunqueceding,henduoguojiahediqudefaguiduigezhongnongyaoxianliangzhidinglebiaozhun,danjianceshebeijiagejibendouzaishushiwanyuanyishang,haocaifeiyonggaodengzhuduoyinsu,daozhijiancefeigao。muqiantongchanganjiancenongyaozhongleishoufei,meizhongnongyaojiancefeitongchangzai150元到400餘元。農藥的施用隨時間、地(di)區(qu)及(ji)病(bing)害(hai)不(bu)同(tong),所(suo)用(yong)農(nong)藥(yao)種(zhong)類(lei)繁(fan)多(duo),這(zhe)就(jiu)要(yao)求(qiu)對(dui)農(nong)產(chan)品(pin)樣(yang)品(pin)進(jin)行(xing)多(duo)種(zhong)農(nong)藥(yao)項(xiang)目(mu)的(de)檢(jian)測(ce),一(yi)個(ge)樣(yang)品(pin)僅(jin)農(nong)殘(can)項(xiang)目(mu)的(de)檢(jian)測(ce)費(fei)就(jiu)高(gao)達(da)一(yi)兩(liang)千(qian)元(yuan)甚(shen)至(zhi)更(geng)多(duo),檢(jian)測(ce)費(fei)用(yong)多(duo)數(shu)情(qing)況(kuang)下(xia)遠(yuan)遠(yuan)高(gao)於(yu)蔬(shu)菜(cai)水(shui)果(guo)本(ben)身(shen)的(de)利(li)潤(run),且(qie)從(cong)樣(yang)品(pin)送(song)達(da)到(dao)出(chu)具(ju)檢(jian)測(ce)報(bao)告(gao)耗(hao)時(shi)長(chang)達(da)數(shu)天(tian),更(geng)長(chang)的(de)達(da)數(shu)月(yue)。一(yi)邊(bian)是(shi)勞(lao)動(dong)密(mi)集(ji)型(xing)的(de)生(sheng)產(chan)者(zhe)種(zhong)植(zhi)出(chu)價(jia)值(zhi)在(zai)一(yi)、兩元一斤的農產品,鮮蔬菜水果保質期短,冷藏可稍微延長;另一邊是昂貴的進口的檢測設備、檢測費,還有一些專門從事農殘檢測的技術人員和漫長的檢測周期,還不等檢測結果出來,蔬菜水果早就變成肥料!特別是食品加工企業的原料檢測,若等檢測結果出來,早已經變質,不能用於食品加工了,失去了檢測意義!這,顯然是一個不等式。
xiaofeizheduisuogoudeshucaishuiguoshifouanquanwufapanduan,wuliduishouzhongyibaliangsanyuandecaizhifushuqianyuandejiancefei。jinguanmuqianjianceshebeigouzhijijiancefeiyongzhuyaoshiguojiatourujinxingguanli,danduimeitianshuyiyijipicideshucaishuiguo,sepufadejiancelibucongxin,conghulianwangzhongzhadaodeshujubiaoming,keweibeishuichexin,yixieyongyoushuqianwanyuansheshidejigoumeiniansuojiancedeyangpinshuquzhikeshu,nianjiancewangeyangpindeshiyanshiliaoliaowuji,nengjiancedenongyaozhongleixiangdangjuxian,qiejiancechulvbingbugao。yici,bizheyongmeiyizhifaduimoudijijiangshangshideshuiguoshucaijinxingjiance,faxianbuhegelvxiangdanggao,zhufuyanchangcaishouqi,yiquebaochanpinzhiliangyuanquan。
如何來解上麵這個不等式呢?“快速檢測法”的問世,當仁不讓!目前快速主要有“速測卡法”、“抑製率法”,前者一個樣品檢測費通常在一兩元,後者則不超過十元(含人工、設備折舊、房租費),且檢測量越大,成本越低。速測卡法操作簡單,隻要像PH試shi紙zhi一yi樣yang,將jiang測ce試shi紙zhi在zai蔬shu菜cai樣yang品pin上shang擦ca幾ji下xia,用yong手shou心xin的de溫wen度du培pei養yang幾ji分fen鍾zhong,觀guan查zha測ce試shi紙zhi的de顏yan色se變bian化hua,就jiu可ke確que定ding是shi否fou為wei農nong藥yao陽yang性xing,可ke廣guang泛fan用yong於yu田tian間jian地di頭tou,商shang販fan采cai購gou、大型食品加工、餐館等進貨時的質量把關用。而抑製率所用的設備主要是分光光度計、天平等,價值少則三五千,多則不過萬元的設備就可對大多數蔬菜、水果中的有機磷等農藥殘留是否達到安全指標做出準確判定,通常一個熟練的操作人員30分鍾可檢測4、5個樣品,一兩小時可測出20餘個樣品。
快速檢測用的酶是一種從蒼蠅頭部、或動物如牛、雞的血清中提取物,稱為乙酰膽堿脂酶,對有機磷、安基甲酸酯類農藥極為敏感,在一定條件下與樣本中的農藥反應,可觀查到顏色的變化,或用分光光度計在412nm處(chu)檢(jian)測(ce)顏(yan)色(se)的(de)變(bian)化(hua)率(lv),若(ruo)顏(yan)色(se)變(bian)化(hua)很(hen)快(kuai),宛(wan)若(ruo)湖(hu)裏(li)的(de)魚(yu)歡(huan)蹦(beng)亂(luan)跳(tiao),表(biao)明(ming)無(wu)毒(du),若(ruo)顏(yan)色(se)基(ji)本(ben)不(bu)變(bian),活(huo)性(xing)被(bei)大(da)大(da)抑(yi)製(zhi),如(ru)水(shui)中(zhong)的(de)魚(yu)基(ji)本(ben)翻(fan)了(le)肚(du)子(zi),則(ze)說(shuo)明(ming)樣(yang)本(ben)中(zhong)的(de)農(nong)藥(yao)殘(can)毒(du)高(gao),引(yin)用(yong)抑(yi)製(zhi)率(lv)進(jin)行(xing)表(biao)述(shu)。以(yi)國(guo)標(biao)為(wei)例(li),抑(yi)製(zhi)率(lv)高(gao)於(yu)50%為不合格,標準注明與氣相色譜法檢測結果吻合率達80%以上。可以形象理解為,在一塘水池中養100條魚,若死率在50條(tiao)以(yi)上(shang),則(ze)可(ke)以(yi)判(pan)定(ding)水(shui)中(zhong)有(you)毒(du),不(bu)能(neng)飲(yin)用(yong),具(ju)體(ti)是(shi)什(shen)麼(me)種(zhong)類(lei)的(de)毒(du)藥(yao)雖(sui)不(bu)能(neng)定(ding)性(xing)一(yi)樣(yang),抑(yi)製(zhi)率(lv)法(fa)隻(zhi)能(neng)判(pan)定(ding)蔬(shu)菜(cai)水(shui)果(guo)中(zhong)是(shi)否(fou)有(you)高(gao)殘(can)毒(du),可(ke)能(neng)是(shi)一(yi)種(zhong)或(huo)多(duo)種(zhong)農(nong)殘(can)總(zong)量(liang)貢(gong)獻(xian),但(dan)不(bu)能(neng)確(que)定(ding)具(ju)體(ti)農(nong)藥(yao)種(zhong)類(lei)。人(ren)們(men)重(zhong)點(dian)關(guan)注(zhu)的(de)是(shi)能(neng)否(fou)食(shi)用(yong),而(er)不(bu)是(shi)農(nong)藥(yao)種(zhong)類(lei)!抑製率法經濟、快速、高效,剛好解決了上述的不等式問題。
研究表明,原法中不嚴謹導致測量不穩定,與其它檢測一樣,作為所提供的法律數據,檢測需規範嚴謹。
筆者做了如下改進,1、製樣:幹樣品如茶葉類要製成粉,蔬菜水果類水分高的要製成漿,保證樣品的勻一性;2、對提取的分析液增加快速定性濾紙過濾,使溶液清亮透明,因濾紙對緩衝液的吸附作用,所以改樣品中加5ml緩衝液為6ml,且在接過濾液的杯上事先畫好2.5ml刻度線,體積不足時再加少許緩衝液淋洗濾紙及樣品,確保分析液體積基本為2.5ml;3、37℃培養時若因培養箱或水浴加熱過程中蒸發濃縮的要用緩衝液補足2.5ml;4、對於色度過大的吸光度超過光度計讀數限量的,改1cm比色皿為0.5cm;5、出具法律用數據時,取雙杯檢測平均值;6、比色時技巧及注意事項:將培養畢的檢測液置入1cm或0.5cm比皿中讀取吸光度並記錄後,從加入底液起用秒表計時,確保加底液後的顯色反應為準確的3分鍾;對批量樣品的檢測,測吸光度加底液時,從第一個樣加入底液後起計時,按10秒間隔時間按順序依次加入底液的,以便批量操作時能保證每個樣品的反應時間準確為3分鍾時能記錄下吸光度;根(gen)據(ju)操(cao)作(zuo)人(ren)員(yuan)自(zi)己(ji)的(de)情(qing)況(kuang)控(kong)製(zhi)每(mei)次(ci)加(jia)底(di)液(ye)的(de)顯(xian)色(se)杯(bei)數(shu),確(que)保(bao)加(jia)底(di)液(ye)後(hou)一(yi)分(fen)鍾(zhong)後(hou)兩(liang)分(fen)半(ban)鍾(zhong)內(nei)能(neng)使(shi)每(mei)杯(bei)都(dou)能(neng)依(yi)次(ci)盡(jin)量(liang)搖(yao)勻(yun)。實(shi)踐(jian)證(zheng)明(ming)改(gai)進(jin)後(hou)的(de)方(fang)法(fa),重(zhong)現(xian)性(xing)良(liang)好(hao),測(ce)出(chu)抑(yi)製(zhi)率(lv)大(da)於(yu)50%以上的,不確定度小於7%,50%以下的不確定度小於5%,對dui標biao準zhun內nei提ti到dao的de除chu幾ji種zhong有you刺ci激ji性xing幹gan擾rao的de蔬shu菜cai外wai,完wan全quan能neng滿man足zu仲zhong裁cai需xu要yao,且qie與yu相xiang應ying的de色se譜pu圖tu比bi對dui極ji為wei吻wen合he。若ruo抑yi製zhi率lv法fa得de到dao廣guang泛fan應ying用yong與yu認ren可ke,或huo作zuo為wei色se譜pu法fa的de篩shai查zha,對dui大da幅fu節jie省sheng檢jian測ce成cheng本ben、經費支出有重大意義。
在此筆者還有一個建議,就是將每天食用量較少的,或非每天必食的農產品,如水果類的不合格判定抑製率定為90%以上,與主食的蔬菜類的50%以下為合格予以分別對等待,這也符合國際通行做法,如美國農藥限量中,規定甲基硫菌靈在蔬菜類時限量規定為0.1到1mmp左右,而在桃中限量為15,中國蔬菜限量為0.1左右,而水果則為3。
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